Name: Muizen linker pulmonale hilarische klemmodel van longischemie reperfusieletsel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-12T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: Leer een betrouwbaar model van linker pulmonale hilarische klemming om longischemie-reperfusieletsel bij muizen te bestuderen. Deze methode helpt onderzoekers de rol van neutrofielen en B-cellen te begrijpen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk ontving geen specifieke subsidie van een financieringsinstantie in de publieke, commerciële of non-profitsector.

Muismodel voor het bestuderen van longischemie-reperfusieschade

<ol><li>Bharat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+link+between+primary+graft+dysfunction+and+chronic+lung+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Immunological link between primary graft dysfunction and chronic lung allograft rejection.</a> Ann Thorac Surg. 86 (1), 189-195 (2008).</li>
<li>Daud, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+immediate+primary+lung+allograft+dysfunction+on+bronchiolitis+obliterans+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of immediate primary lung allograft dysfunction on bronchiolitis obliterans syndrome.</a> Am J Respir Crit Care Med. 175 (5), 507-513 (2007).</li>
<li>Halazun, K. J., Al-Mukhtar, A., Aldouri, A., Willis, S., Ahmad, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warm+ischemia+in+transplantation%3A+search+for+a+consensus+definition%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Warm ischemia in transplantation: search for a consensus definition.</a> Transplant Proc. 39 (5), 1329-1331 (2007).</li>
<li>Warnecke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warm+or+cold+ischemia+in+animal+models+of+lung+ischemia-reperfusion+injury%3A+is+there+a+difference+%5BTitle%5D)+AND+%22Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Warm or cold ischemia in animal models of lung ischemia-reperfusion injury: is there a difference .</a> Thorac Cardiovasc Surg. 52 (3), 174-179 (2004).</li>
<li>Hasenauer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cold+or+warm+ischemia+and+ex-vivo+lung+perfusion+on+the+release+of+damage+associated+molecular+patterns+and+inflammatory+cytokines+in+experimental+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Effects of cold or warm ischemia and ex-vivo lung perfusion on the release of damage associated molecular patterns and inflammatory cytokines in experimental lung transplantation.</a> J Heart Lung Transplant. 40 (9), 905-916 (2021).</li>
<li>Iskender, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+warm+versus+cold+ischemic+donor+lung+preservation+on+the+underlying+mechanisms+of+injuries+during+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of warm versus cold ischemic donor lung preservation on the underlying mechanisms of injuries during ischemia and reperfusion.</a> Transplantation. 102 (5), 760-768 (2018).</li>
<li>Santos, P., Teixeira, P. J. Z., Moraes Neto, D. M., Cypel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donation+after+circulatory+death+and+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bras+Pneumol%22%5BJournal%5D)">Donation after circulatory death and lung transplantation.</a> J Bras Pneumol. 48 (2), e20210369(2022).</li>
<li>Moskowitzova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transplantation+enhances+murine+lung+viability+and+recovery+after+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transplantation enhances murine lung viability and recovery after ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 318 (1), L78-L88 (2020).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+blockage+of+S100A8%2FA9+ameliorates+ischemia-reperfusion+injury+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Functional blockage of S100A8/A9 ameliorates ischemia-reperfusion injury in the lung.</a> Bioengineering (Basel). 9 (11), 673(2022).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+anti-HMGB1+monoclonal+antibody+on+lung+ischemia+reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Protective effects of anti-HMGB1 monoclonal antibody on lung ischemia reperfusion injury in mice.</a> Biochem Biophys Res Commun. 573, 164-170 (2021).</li>
<li>Wang, Q., Li, Y., Wu, C., Wang, T., Wu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-1+inhibition+exacerbates+ischemia-reperfusion-induced+lung+injury+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-1 inhibition exacerbates ischemia-reperfusion-induced lung injury in mouse.</a> Am J Med Sci. 365 (1), 84-92 (2023).</li>
<li>Gielis, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury%3A+tricks+of+the+trade%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> J Surg Res. 194 (2), 659-666 (2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitogen-activated+protein+kinases+regulate+HO-1+gene+transcription+after+ischemia-reperfusion+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitogen-activated protein kinases regulate HO-1 gene transcription after ischemia-reperfusion lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 283 (4), L815-L829 (2002).</li>
<li>Sharma, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+A2A+receptor+activation+on+CD4%2B+T+lymphocytes+and+neutrophils+attenuates+lung+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Adenosine A2A receptor activation on CD4+ T lymphocytes and neutrophils attenuates lung ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 139 (2), 474-482 (2010).</li>
<li>Yang, Z., Sharma, A. K., Linden, J., Kron, I. L., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+lymphocytes+mediate+acute+pulmonary+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">CD4+ T lymphocytes mediate acute pulmonary ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 137 (3), discussion 702 695-702 (2009).</li>
<li>Sayah, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+are+pathogenic+in+primary+graft+dysfunction+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps are pathogenic in primary graft dysfunction after lung transplantation.</a> Am J Respir Crit Care Med. 191 (4), 455-463 (2015).</li>
<li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am J Transplant. 6 (7), 1672-1679 (2007).</li>
<li>Hsiao, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> J Clin Invest. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li>
<li>Sharma, A. K., Mulloy, D. P., Le, L. T., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NADPH+oxidase+mediates+synergistic+effects+of+IL-17+and+TNF-alpha+on+CXCL1+expression+by+epithelial+cells+after+lung+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">NADPH oxidase mediates synergistic effects of IL-17 and TNF-alpha on CXCL1 expression by epithelial cells after lung ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306 (1), L69-L79 (2014).</li>
<li>Zanotti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+critical+role+of+Toll-like+receptor+4+in+lung+ischemia-reperfusion+injury+and+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Novel critical role of Toll-like receptor 4 in lung ischemia-reperfusion injury and edema.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297 (297), L52-L63 (2009).</li>
<li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals%22">Guide for the care and use of laboratory animals</a>. , The National Academies Press. Washington, DC. (2011).</li>
<li>Saito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pirfenidone+alleviates+lung+ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Pirfenidone alleviates lung ischemia-reperfusion injury in a rat model.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 158 (1), 289-296 (2019).</li>
<li>Tanaka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+Imatinib+on+ischemia%2Freperfusion+injury+in+rat+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Protective effects of Imatinib on ischemia/reperfusion injury in rat lung.</a> Ann Thorac Surg. 102 (5), 1717-1724 (2016).</li>
<li>Kreisel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+two-photon+imaging+reveals+monocyte-dependent+neutrophil+extravasation+during+pulmonary+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In vivo two-photon imaging reveals monocyte-dependent neutrophil extravasation during pulmonary inflammation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (42), 18073-18078 (2010).</li>
<li>Koletsis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+cooling+in+a+lung+hilar+clamping+model+of+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">In situ cooling in a lung hilar clamping model of ischemia-reperfusion injury.</a> Exp Biol Med (Maywood). 231 (8), 1410-1420 (2006).</li>
<li>Hermsen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+landscape+of+rat+strain+and+substrain+variation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Genomic landscape of rat strain and substrain variation.</a> BMC Genomics. 16 (1), 357(2015).</li>
<li>Beck, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genealogies+of+mouse+inbred+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Genealogies of mouse inbred strains.</a> Nat Genet. 24 (1), 23-25 (2000).</li>
<li>Liao, W. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orotracheal+intubation+and+ventilated+lung+ischemia+reperfusion+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orotracheal intubation and ventilated lung ischemia reperfusion surgery.</a> J Vis Exp. (187), 64383(2022).</li>
<li>Murata, T., Nakazawa, H., Mori, I., Ohta, Y., Yamabayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reperfusion+after+a+two-hour+period+of+pulmonary+artery+occlusion+causes+pulmonary+necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Reperfusion after a two-hour period of pulmonary artery occlusion causes pulmonary necrosis.</a> Am Rev Respir Dis. 146 (4), 1048-1053 (1992).</li>
<li>Ukita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large+animal+model+for+pulmonary+hypertension+and+right+ventricular+failure%3A+Left+pulmonary+artery+ligation+and+progressive+main+pulmonary+artery+banding+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A large animal model for pulmonary hypertension and right ventricular failure: Left pulmonary artery ligation and progressive main pulmonary artery banding in sheep.</a> J Vis Exp. (173), 62694(2021).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+right+ventricular+failure+by+pulmonary+artery+constriction+and+evaluation+of+right+ventricular+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of right ventricular failure by pulmonary artery constriction and evaluation of right ventricular function in mice.</a> J Vis Exp. (147), 59431(2019).</li>
<li>Welbourn, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+ischaemia+reperfusion+injury%3A+central+role+of+the+neutrophil%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of ischaemia reperfusion injury: central role of the neutrophil.</a> Br J Surg. 78 (6), 651-655 (1991).</li>
</ol>

De auteurs rapporteren geen relevante openbaarmakingen.

We beschrijven een hilarische klemtechniek waarbij een slipknot op het linker hilum wordt aangebracht die de longslagader en aders en bronchus afsluit om warme ischemie te induceren, gevolgd door reperfusie. Na hilarische klemming kan de linkerlong worden geoogst voor een verscheidenheid aan experimentele technieken zoals histologie, flowcytometrie, bulk- of single cell sequencing en kwantitatieve polymerasekettingreactie. Bovendien kunnen het bloed en de milt worden gebruikt om systemische effecten te bestuderen, terwijl de niet-ischemische rechterlong als interne controle kan dienen. In dit protocol beschrijven we ook gedetailleerde methoden om ABG-metingen te verkrijgen en/of celextravasatie te bepalen.
De hilarische klemtechniek van muizen is van cruciaal belang voor de studie van long-IRI en voor het bredere veld van longtransplantatie. Met behulp van dit hilarische klemmodel ontdekte onze groep bijvoorbeeld dat milt-afgeleide CCR2+ klassieke monocyten neutrofiele extravasatie in de long mediëren na IRI18. Een andere groep toonde aan dat type II alveolaire epitheelcellen CXCL1 (een neutrofiele chemoattractant) produceren op een NADPH-oxidase-IL-17-TNFα-afhankelijke manier met behulp van een hilarische klemmodel19. TLR4 bleek een rol te spelen bij de ontwikkeling van oedeem in een muizenmodel van hilarische klemming20.
Hoewel orthotope longtransplantatie van muizen meer klinisch toepasbaar is en zowel warme als koude ischemie kan simuleren, introduceert het ook chirurgisch trauma door vasculaire en bronchiale anastomosen en allogene stimuli door mismatch tussen donor en ontvanger. Het belangrijkste voordeel van de hilarische klemtechniek is dus het vermogen om de effecten van long-IRI te isoleren van deze andere factoren. Bovendien is voor de onervaren muismicrochirurg de hilarische klemprocedure technisch minder veeleisend en kan deze sneller worden beheerst in vergelijking met longtransplantatie. Een beperking van het hilarische klemmodel is dat koude ischemie moeilijk te bereiken is. In situ koude ischemie is uitgevoerd bij varkens met antegrade flush perfusie via de linker longslagader25, maar dit is veel uitdagender bij de muis vanwege het kleinere formaat en de noodzaak om normothermie tijdens de operatie te behouden. Desalniettemin is de studie van geïsoleerde warme ischemie belangrijk, omdat deze over het algemeen schadelijker is voor de orgaanfunctie dan koude ischemie 4,5,6. Bovendien passen transplantatiecentra steeds vaker DCD-longtransplantaties toe, die gepaard gaan met veel langere warme ischemische tijden dan traditionele DBD-longtransplantaties7. Gedetailleerde studie van de gebeurtenissen tijdens warme ischemie en de daaropvolgende reperfusieperiode is dus van cruciaal belang en kan worden bereikt met dit hilarische klemmodel.
In de afgelopen decennia zijn er veel variaties van de hilarische klemtechniek gemaakt. Deze omvatten het gebruik van een atraumatische microvasculaire klem 8,9,10,11,12,13, een Rumel-tourniquet14,15 en een stropdas met een schuifknoop rond het hilum16. We beschrijven onze aanpassing van de slipknot-techniek bij muizen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van andere hilarische klemtechnieken is dat het mogelijk maakt om de borstkas te sluiten tijdens de periode van ischemie, waardoor ongevoelige vloeistofverliezen worden geminimaliseerd, vooral in protocollen met langere perioden van ischemie. Dit kan niet worden bereikt wanneer een klem of tourniquet op het hilum wordt geplaatst.
Wat de selectie van dieren betreft, hebben we ervoor gekozen om dit model te ontwikkelen in muizen in plaats van ratten- of grote diermodellen, zoals varkens. De redenering is tweeledig: ons laboratorium heeft uitgebreide ervaring in microchirurgie van muizen met orthotope longtransplantatie bij muizen17. Ten tweede, hoewel muizen kleiner en technisch uitdagender zijn om te opereren dan ratten, zijn er momenteel meer in de handel verkrijgbare transgene muizenstammen dan rattenstammen26,27. Muizen planten zich ook sneller voort, waardoor nieuwe stammen sneller kunnen worden ontwikkeld, wat vooral nuttig is bij het onderzoeken van immuunmechanismen van IRI. Om deze redenen hebben we ervoor gekozen om deze techniek bij muizen te ontwikkelen.
Voor zover wij weten, is dit het eerste op video gebaseerde artikel dat gebruik maakt van de techniek van de linkerlong hilarische klem in de muis met een slipknot. Saito et al. hebben een op video gebaseerd artikel gepubliceerd dat hilarische klem bij ratten demonstreert met behulp van een microvasculaire klem22. Bij muizen publiceerden Liao et al een long-IRI-model met longslagader (PA) klemming met een schuifknoop, maar de long blijft in dit model geventileerd omdat de bronchus is uitgesloten van de klem28. De PA-klemtechniek is gebruikt als model om longembolie29, pulmonale hypertensie en/of rechterventrikelfalente bestuderen 30,31. Aangezien het studiegebied long IRI bij transplantatie is, hebben we ervoor gekozen om het hele hilum inclusief de bronchus vast te klemmen om barotrauma bovenop het ischemische letsel te minimaliseren.
Merk op dat 30 minuten warme ischemie werd gekozen, gevolgd door 1 uur reperfusie omdat we geïnteresseerd zijn in de dynamiek van long-infiltrerende cellen in de zeer vroege periode na IRI. Studies hebben bijvoorbeeld opregulatie van cytoprotectieve genen, zoals heemoxygenase 1, gemeld na slechts 30 minuten ischemie, gevolgd door 2 uur reperfusie13. Eerder werd gedacht dat neutrofielen het centrale celtype waren dat na IRI32 in de long infiltreerde, maar we toonden aan dat monocyten voorafgaan aan neutrofielen bij hun aankomst in de long18,24. Meer recentelijk ontdekten we dat B-cellen zelfs voorafgaan aan monocyten en binnen 1 uur na reperfusie de long binnendringen (niet-gepubliceerde gegevens). Bij het aanpassen van deze techniek kan de duur van warme ischemie en reperfusie worden aangepast aan de onderzoeksvraag en hypothese. Langere perioden van warme ischemie zijn mogelijk zonder dat u zich zorgen hoeft te maken over overmatig vocht- en warmteverlies, aangezien de borstkas tijdens deze periode kan worden gesloten.
Perioperatief kunnen verschillende complicaties optreden, met als uiteindelijke gemeenschappelijke uitkomst perioperatief overlijden. We hebben gezien dat de incidentie van dierensterfte tijdens de operatie afneemt bij herhaling van de techniek door de chirurg. We schatten dat chirurgen minstens 2 maanden oefening en/of minstens 20 gevallen nodig hebben om een plateau in vaardigheid te bereiken. Op dit moment schatten we dat intraoperatieve mortaliteit optreedt in ongeveer 1 op de 50 gevallen. De dood bij de verdoofde muis wordt vaak aangekondigd door agonale ademhalingen die gepaard gaan met krachtige samentrekkingen van het middenrif en de borstwandspieren. Bij het begin van deze agonale ademhalingen zal de dood binnen 3-5 minuten optreden als er niet wordt ingegrepen. Er zijn verschillende oorzaken die intraoperatieve overlijden kunnen veroorzaken, waarvan er vele herkenbaar en te voorkomen zijn. We zullen hieronder de kritieke stappen van deze operatie en probleemoplossingstechnieken belichten om een succesvol resultaat te bereiken.
Intubatie De eerste cruciale stap is zorgvuldige intubatie en het beveiligen van de luchtweg om onbedoelde extubatie te voorkomen. Bij een overlevingsoperatie is het vooral belangrijk om ervoor te zorgen dat de stembanden niet worden beschadigd tijdens de eerste intubatie, omdat de muis na extubatie niet kan ademen. Voortgang van de ETT langs de koorden moet worden gedaan onder directe visualisatie door de microscoop. Als er tijdens de intubatie weerstand wordt ondervonden, mag de ETT niet blindelings naar voren worden gebracht. Terwijl u de orofarynx open houdt met de muggenklem, moet ervoor worden gezorgd dat het mondslijmvlies niet wordt doorboord, omdat bloed het zicht op de luchtwegen belemmert. Het aantal pogingen tot intubatie moet worden beperkt tot minder dan vijf.
Onbedoelde extubatie Als de longen op enig moment tijdens de procedure niet op de juiste manier lijken op te blazen, is het mogelijk dat de ETT is losgeraakt. Een andere manifestatie van onbedoelde extubatie die gedurende een langere periode onopgemerkt blijft, is de muis die plotseling agonale ademhaling ontwikkelt. Na de eerste intubatie moet ervoor worden gezorgd dat de ETT goed rondom de neus wordt bevestigd met zijden tape, en dat de aanpassing van de nek en romp van de muis beperkt is. Als noch de linker- noch de rechterlong wordt opgeblazen, kan de ETT uit de luchtpijp zijn gekomen. Er kunnen pogingen worden ondernomen om de ETT terug naar binnen te duwen, maar het kan nodig zijn om de muis op een snelle manier opnieuw te intuberen om vroegtijdige dood van het dier te voorkomen. Als slechts één long wordt opgeblazen terwijl beide dat verwachten, kan de ETT te diep zijn en moet deze voorzichtig worden teruggetrokken en opnieuw worden vastgezet.
Mobilisatie van de longen Mobilisatie van de linkerlong moet worden gedaan met behulp van applicators met wattenstaafjes en lichte druk op het longparenchym, omdat compressieletsel de longblaasjes kan beschadigen en de therapietrouw van de long kan verminderen. De longen mogen niet met een tang of klemmen worden vastgepakt, omdat dit het longparenchym beschadigt.
Toepassing van hilarische klem De linker hilarische klem moet onder directe visualisatie worden geplaatst, waarbij ervoor moet worden gezorgd dat de knoop niet te centraal wordt gelegd (om het linker atrium niet te vangen) of te perifeer (om geen longparenchym te vangen). Het vangen van het linker atrium met de hilarische klem zal waarschijnlijk boezemfibrilleren en de daaropvolgende dood veroorzaken. De visualisatie van het hilum kan worden verbeterd door te zorgen voor voldoende ribretractie om het gezichtsveld uit te breiden. Na het vastbinden van de slipknoop is het handig om ervoor te zorgen dat de klem volledig occlusief is door een rekruteringsmanoeuvre uit te voeren - door de uitstroomslang die de ETT met de ventilator verbindt handmatig af te sluiten en ervoor te zorgen dat de linkerlong niet uitzet met positieve druk. Vasculaire occlusie wordt verondersteld met bevestiging van bronchiale occlusie, gezien de verhoogde collapsibility van de longslagader en aders in vergelijking met de kraakbeenachtige bronchus. Bovendien mag de hilarische klem niet met overmatige kracht worden vastgemaakt, omdat deze de kraakbeenachtige delen van de linker hoofdstambronchus zal verpletteren en uitzetting van de linkerlong zal voorkomen na het loslaten van de hilarische klem. Zodra de hilarische klem is losgelaten, is het belangrijk om te controleren of de long nog steeds kan worden beademd door nog een rekruteringsmanoeuvre uit te voeren.
Sluiting op de borst Bij het sluiten van de borstkas moeten de 4een 5eribben bij elkaar worden gebracht wanneer de long maximaal is ingehaald. Dit minimaliseert de hoeveelheid lucht die in de pleuraholte achterblijft, wat zou resulteren in pneumothorax zodra de ribben zijn gesloten. De spierlagen en de huid moeten luchtdicht worden afgesloten om de ontwikkeling van spanningspneumothorax te voorkomen.
ABG's behalen Ten slotte is het bij het verkrijgen van ABG's belangrijk om eerst het rechter hilum vast te klemmen, zodat de ABG-meting alleen de linkerlongfunctie weerspiegelt22,23. Zonder de rechter hilarische klem zal de normaal ventilerende rechterlong de beschadigde ischemische linkerlong meer dan compenseren en zullen ABG-metingen normaal lijken.
Samenvattend is de hilarische klemtechniek die we hierboven beschrijven een waardevol hulpmiddel voor de studie van longtransplantatie en, belangrijker nog, kan de studie van warme IRI isoleren zonder de introductie van allogeniteit, chirurgisch anastomose-gerelateerd trauma of koude ischemische opslag. Met name deze beschreven techniek van hilarisch klemmen is gemakkelijk aan te leren en op grote schaal toe te passen en kan leiden tot betrouwbare en reproduceerbare resultaten.

<a href="https://app.jove.com/t/6603">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/66232">10.3791/66232</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/66232">Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury</a>. The Protocol and Representative Results&#160;sections were&#160;updated.

Erratum: Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

IRI tijdens orgaantransplantatie is een belangrijke risicofactor voor primaire transplantaatdisfunctie en latere episodes van transplantaatafstoting 1,2. Tijdens transplantatie wordt de tijd van warme ischemie gedefinieerd als de periode vanaf de kruisklem van de donoraorta tot het begin van koude perfusie en van het verwijderen van organen van ijs tot orgaanimplantatie. Koude opslagtijd wordt gedefinieerd als de periode vanaf het begin van de koude perfusie tot de verwijdering van het orgaan uit ijs3. Warme ischemie is schadelijker voor de latere orgaanfunctie dan koude ischemie 4,5,6, en de onderliggende mechanismen rechtvaardigen verder onderzoek in preklinische modellen. Bovendien wordt orgaantransplantatie na donatie na hartdood (DCD) in verband gebracht met langere warme ischemische tijden dan traditionele donatie na hersendood (DBD)7. Hoewel het gebruik van DCD-donoren de donorpool kan vergroten en het longgebruik kan verhogen, zijn verdere preklinische studies nodig om de effecten van warme ischemie op de longfunctie na transplantatie te evalueren. Hieronder beschrijven we een model van warme IRI bij muizen via de linker pulmonale hilarische klem.
In de afgelopen jaren zijn verschillende diermodellen van longhilarische klemmen ontwikkeld en aangepast en kunnen het gebruik van een atraumatische microvasculaire klem 8,9,10,11,12,13, een Rumel-tourniquet14,15 of hechtdraadligatie16 omvatten als de hilarische klem. De crux van de hilarische klem is dat deze omkeerbaar moet zijn en minimale of geen schade aan de hilarische structuren moet veroorzaken, zodat reperfusie kan worden bereikt. Hier beschrijven we onze hilarische klemtechniek bij muizen waarbij het linker longhilum omkeerbaar wordt afgebonden met een schuifknoop. Deze methode sluit de pulmonale arteriële instroom, veneuze uitstroom en luchtstroom in en uit de bronchus van de hoofdstam af. Het belangrijkste voordeel van een slipknot over een vaatklem, clip of tourniquet is dat de borstkas kan worden gesloten tijdens langdurige perioden van ischemie, waardoor ongevoelig vocht- en warmteverlies bij de muis tot een minimum wordt beperkt. We bieden een protocol voor het verkrijgen van betrouwbare arteriële bloedgasmetingen (ABG) en voor het meten van celextravasatie na hilarische klemming.
Deze hilarische klemtechniek neemt een belangrijke plaats in in de bredere studie van longtransplantatie. Vergeleken met kleine diermodellen van orthotope longtransplantatie, kan de hilarische klemtechniek de effecten van IRI isoleren zonder de toevoeging van chirurgisch anastomosetrauma of allogeniciteit17. Bovendien kan de hilarische klemtechniek gemakkelijker en sneller onder de knie worden gekregen dan de longtransplantatie van muizen. In feite zijn in het afgelopen decennium met behulp van hilarische klemtechnieken verschillende belangrijke mechanismen in de pathogenese van IRI geïdentificeerd, zoals TLR4, NADPH-oxidase en adenosine A2A-receptor 14,18,19,20. In het volgende protocol presenteren we een betrouwbare, leerbare en reproduceerbare methode van hilarische klemming als hulpmiddel voor het bestuderen van long-IRI.

<table><tbody><tr><td>Medicijnen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% povidon-jodiumoplossing</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>Voor desinfectie</td></tr><tr><td>Buprenorfine 1,3 mg/mL</td><td>Fidelis Animal Health</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>Voor pijnbestrijding</td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Cronus Pharma</td><td>NDC 69043-027-18</td><td>Voor pijnbestrijding</td></tr><tr><td>Heparine 1000 eenheden/mL</td><td>Sagent</td><td>NDC 25021-404-01</td><td>Voor het verkrijgen van arterieel bloed</td></tr><tr><td>Isofluraan 1%-1,5%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>26675-46-7</td><td>Voor anesthesie</td></tr><tr><td>Ketaminehydrochloride 100 mg/mL</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>Voor anesthesie</td></tr><tr><td>Puralube Vet oogzalf</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>Om ooguitdroging te voorkomen</td></tr><tr><td>Xylazin 20 mg/mL</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>Voor pijnbestrijding</td></tr><tr><td>Gereedschappen en instrumenten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Argent High Temp Fine Tip Cautery Pen</td><td>McKesson</td><td>231</td><td>Om bloedvaten te coagularen</td></tr><tr><td>Gebogen muggenklem</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td>Voor chirurgische procedure</td></tr><tr><td>Fijne gebogen pincetten</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Voor chirurgische procedure</td></tr><tr><td>Fijne schaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>15040-11</td><td>Voor chirurgische procedure</td></tr><tr><td>Intubatieklem set-up</td><td>Fine Science Tools</td><td>18374-44, 18144-30</td><td>Om muis verticaal vast te houden aan de tong tijdens intubatie. Zie Aanvullende Figuur 1A.&nbsp;</td></tr><tr><td>Magnetische ribbenretractoren</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-01, 18200-10</td><td>Voor retractie van thoracotomie. Magnetische fixator en retractor moeten onderaan door micro latex buisjes worden verbonden.</td></tr><tr><td>Optical Grade Plastic Optical Fiber Unjacketed, 500&mu;m</td><td>Edmund Optics</td><td>02-532</td><td>Om de introducer voor de endotracheale buis te maken. Zie Aanvullend Figuur 1B. Een 1,5-inch lengte van deze optische vezel moet een stuk zijden tape op een van de uiteinden hebben. Het kan vervolgens worden gebruikt als een introducer voor de endotracheale buis. Het uiteinde van de introducer moet lichtjes gebogen zijn.</td></tr><tr><td>Power Pro Ultra clipper</td><td>Oster</td><td>078400-020-001</td><td>Om haar te knippen</td></tr><tr><td>Schaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>14370-22</td><td>Voor chirurgische procedure</td></tr><tr><td>Verwarmingskussen voor kleine dieren</td><td>K&amp;H Pet Products</td><td>Thermo-Peep verwarmd kussen</td><td>Om normothermie te handhaven</td></tr><tr><td>Kleine dieren ventilator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>55-0000</td><td>Voor ventilatie (TV 0,35 cc, PEEP 1 cm H2O, RR 100-105/min, FiO2 100%)</td></tr><tr><td>Spearit Micro Latex Rubber Tubing (1/8 inch buitendiameter, 1/16 inch binnendiameter)</td><td>Amazon.com</td><td>https://www.amazon.com/Rubber-Tubing-CONTINUOUS-Select-Length/dp/B00H4MT7V0?th=1</td><td>Voor retractie van thoracotomie</td></tr><tr><td>Stat Profile Prime Critical Care Blood Gas Analyzer</td><td>Nova Biomedical</td><td>https://novabiomedical.com/prime-plus-critical-care-blood-gas-analyzer/index.php?gad=1&amp;gclid=Cj0KCQjwmICoBhDx ARIsABXkXlInZX--R3ezBkc304nS_GVGI9Z2T3Esr33 2aM8WGPiUVhicPQZ Wj2AaAqhDEALw_wcB&nbsp;&nbsp;</td><td>Voor retractie van thoracotomie</td></tr><tr><td>Rechte klem</td><td>Fine Science Tools</td><td>13008-12</td><td>Voor chirurgische procedure</td></tr><tr><td>Rechte pincetten</td><td>Fine Science Tools</td><td>91113-10</td><td>Voor chirurgische procedure</td></tr><tr><td>Chirurgisch microscoop</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>niet langer geproduceerd</td><td>Voor intubatie en chirurgische procedure; aanbevolen vervanging door Leica chirurgische microscopen</td></tr><tr><td>Benodigdheden</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1/2 cc spuit met 1/2 inch 29G naald</td><td>McKesson</td><td>942665</td><td>Voor intraperitoneaal injecteren van ketamine/xylazine</td></tr><tr><td>1/2 inch 31G naald op een 1 cc tuberculine spuit</td><td>McKesson</td><td>16-SNT1C2705</td><td>Voor aspiratie van arterieel bloed uit de linker ventrikel</td></tr><tr><td>1-inch 20G IV katheter</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>Voor endotracheale buis (ETT)</td></tr><tr><td>1-inch zijden tape</td><td>Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>Om ETT aan de neus vast te plakken en om ledematen te beveiligen</td></tr><tr><td>3/10 cc spuit met 5/16 inch 31G naald</td><td>McKesson</td><td>102-SN310C31516P</td><td>Voor injectie van antilichamen in de inferieure vena cava</td></tr><tr><td>6-0 monofilamentnaad op een P-10 naald</td><td>McKesson</td><td>S697GX</td><td>Voor sluiting van thoracotomie, spierlaag en huid</td></tr><tr><td>6-0 zijden knoop</td><td>Surgical Specialties Look</td><td>SP102</td><td>Om een slipknoop te maken voor hilar klem</td></tr><tr><td>Gespitsde wattenstaafjes</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>Om de long te manipuleren en voor blinde dissectie</td></tr></tbody></table>

muizen linker pulmonale hilarische klemmodel van longischemie reperfusieletsel

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

Ischemie-reperfusieletsel (IRI) tijdens longtransplantatie is een belangrijke risicofactor voor complicaties na transplantatie, waaronder disfunctie van het primaire transplantaat, acute en chronische afstoting en mortaliteit. Inspanningen om de onderbouwing van IRI te bestuderen leidden tot de ontwikkeling van een betrouwbaar en reproduceerbaar muismodel van linkerlong hilarische klemming. Dit model omvat een chirurgische ingreep die wordt uitgevoerd bij een verdoofde en geïntubeerde muis. Een linker thoracotomie wordt uitgevoerd, gevolgd door zorgvuldige longmobilisatie en dissectie van het linker longhilum. De hilarische klem omvat omkeerbare hechtingsligatie van het pulmonale hilum met een schuifknoop, die de arteriële instroom, veneuze uitstroom en luchtstroom door de linker bronchus van de hoofdstam stopt. Reperfusie wordt geïnitieerd door zorgvuldige verwijdering van de hechtdraad. Ons laboratorium gebruikt 30 minuten ischemie en 1 uur reperfusie voor het experimentele model in de huidige onderzoeken. Deze tijdsperioden kunnen echter worden gewijzigd, afhankelijk van de specifieke experimentele vraag. Onmiddellijk voorafgaand aan het offeren kan arteriële bloedgas uit de linkerventrikel worden verkregen na een periode van 4 minuten van rechter hilarische klemming om ervoor te zorgen dat de verkregen PaO2-waarden alleen aan de gewonde linkerlong worden toegeschreven. We beschrijven ook een methode om celextravasatie te meten met flowcytometrie, waarbij intraveneus een fluorochroom-gelabeld antilichaam wordt geïnjecteerd dat specifiek is voor de cel(len) die moeten worden bestudeerd voordat ze worden opgeofferd. De linkerlong kan vervolgens worden geoogst voor flowcytometrie, bevroren of gefixeerd, in paraffine ingebedde immunohistochemie en kwantitatieve polymerasekettingreactie. Deze hilarische klemtechniek maakt een gedetailleerde studie mogelijk van de cellulaire en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan IRI. Representatieve resultaten tonen verminderde oxygenatie van de linkerlong en histologisch bewijs van longbeschadiging na hilarische klemming. Deze techniek kan gemakkelijk worden geleerd en gereproduceerd door personeel met en zonder microchirurgische ervaring, wat leidt tot betrouwbare en consistente resultaten en dient als een algemeen aanvaardbaar model voor het bestuderen van long-IRI.

Na linker hilarische klemming is de partiële zuurstofdruk in het arteriële bloed (PaO2) toegeschreven aan de linkerlong ~100 mmHg, significant lager in vergelijking met de ~500 mmHg na schijnthoracotomie (Figuur 7A, n=6-7). Merk op dat schijnthoracotomieën werden uitgevoerd bij B6-muizen met ABG-meting na 4 minuten rechter hilarische klemming, wat waarden vertegenwoordigt die alleen aan de linkerlong worden toegeschreven. H&E-kleuring van de hilarische afgeklemde linkerlong toonde infiltrerende ontstekingscellen aan die de luchtwegen vulden en stuwing van bloedvaten met erytrocyten, terwijl deze bevindingen afwezig zijn in de naïeve linkerlong (Figuur 7B, n=2). Deze resultaten tonen de onmiddellijke weefselbeschadiging en celinfiltratie aan na een periode van ischemie en reperfusie.
Zoals besproken in stap 6, kunnen intravasculaire en interstitiële neutrofielen worden onderscheiden met intraveneuze injectie van FITC-gelabeld anti-Ly6G-antilichaam 5 minuten voorafgaand aan het offeren, gevolgd door labeling van alle neutrofielen met APC-Ly6G-antilichamen18,24. Representatieve grafieken laten zien dat ~75% van de neutrofielen intravasculair zijn (APC-Ly6G+FITC-Ly6G+) en ~25% interstitiële (APC-Ly6G+FITC-Ly6G-) na hilarische klemming van de linkerlong (Figuur 7C, n=4). Deze resultaten tonen een betrouwbare manier aan om neutrofiele extravasatie te beoordelen en kunnen worden aangepast aan andere celtypen, afhankelijk van de gebruikte antilichamen (d.w.z. anti-Ly6C voor monocyten, anti-CD19 voor B-cellen). Deze techniek is nuttig voor de studie van de celdynamica na IRI.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2.jpg"> Figuur 1: Intubatie bij muizen. (A) Muis met geschoren linkerborst en buik. (B) Endotracheale tube verbonden met beademingsslang. (C) Zodra de intubatie is bevestigd, plakt u de buis in de omtrek op de neus van de muis. (D) Geïntubeerde muis met in- en uitstroomslang van en naar de ventilator voor kleine dieren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig02.jpg"> Figuur 2: Linker thoracotomie. (A) Huidincisie over de 4eintercostale ruimte (ICS). (B) Spierlagen verdeeld over de 4eintercostale ruimte. (C) Het maken van een kleine incisie net boven de 5erib. (D) Uitbreiding van de incisie naar voren en naar achteren in 4e ICS. (E) Long gevisualiseerd in 4eICS . (F-G) Rib retractors geplaatst. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig02large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig03.jpg"> Figuur 3: Linker hilarische klem. (A) Linkerlong gemobiliseerd met wattenstaafjes. (B) Inferieur pulmonaal ligament (IPL) gevisualiseerd. (C) Met de linkerlong naar voren gedraaid, wordt de zijden stropdas achter het hilum geplaatst. (D) Met links naar achteren geklapt over zijden stropdas, wordt het voorste hilum gevisualiseerd. (E) Instrument stropdas van slipknot over linker hilum. (F) Slipknot op hilum. (G) Bij handmatige occlusie van de uitstroom wordt de linkerlong niet opgeblazen, wat wijst op een succesvolle hilarische klem. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig03large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig04.jpg"> Figuur 4: Loslaten van de linker hilarische klem en de linker borstsluiting. (A) Met de slipknot losgelaten, wordt de linkerlong opnieuw opgeblazen. (B) Ribsluiting met één hap net boven de 4erib en (C) één hap net boven de 6erib. (D-E) Borst gesloten met één steek vastgebonden aan het einde van de inspiratie. (F) Huidsluiting met onderbroken hechtingen (na sluiting van de spierlaag met rijgsteek). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig04large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig05.jpg"> Figuur 5: Laparotomie, bilaterale clamshell thoracotomie en arteriële bloedafname. (A) Muis aangepast aan rugligging. (B) Huidincisie gemaakt over de buik van de middellijn. (C) Laparotomie die zich uitstrekt van xiphoid tot schaambeen, met extensie links en rechts langs de meest inferieure rib. (D-E) Opening van het middenrif om de borstholte binnen te gaan, met verlenging van de incisie in het middenrif links en rechts langs de meest inferieure rib (stippellijn). (F) Bilaterale clamshell thoracotomie met incisies in de voorste oksellijnen (stippellijn) naar de top van de borstkas. (G) Accessoire kwab van de rechterlong die zich uitstrekt tot in de linkerborstkas achter de vena cava inferior. (H) Accessoire lob gemobiliseerd en teruggebracht naar de rechterborst. (I) Aspiratie van arterieel bloed uit de linkerventrikel (inzet: kleurverschil tussen rechter- en linkerventrikels). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig05large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig06.jpg"> Figuur 6: Intraveneuze injectie in de vena cava inferior . (A) Rechter mediale viscerale rotatie om de vena cava inferior bloot te leggen (IVC). (B) Injectie van de oplossing in IVC. (C) Druk uitoefenen op IVC om hemostase te bereiken. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig06large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig07.jpg"> Figuur 7: Representatieve resultaten van longoxygenatie, histologie en extravasatie van neutrofielen na de linker hilarische klem. (A) Gedeeltelijke zuurstofdruk in het arteriële bloed van een C57BL/6-muis die een schijnthoracotomie heeft ondergaan versus een hilarische klem. De resultaten worden weergegeven als gemiddeld ± SEM, n=6-7. p-waarden berekend door de Mann-Whitney U-test . **blz <0,01. (B) H&E-kleuring van met formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde longsectie van een C57BL/6-muis die een schijnthoracotomie versus een hilarische klem onderging. De schaalbalk vertegenwoordigt 250 μm. (C) Representatief cijfer voor de verdeling van intravasculaire (APC-Ly6G+FITC-Ly6G+) vs. extravasculaire (APC-Ly6G+FITC-Ly6G-) Ly6G+ neutrofielen in een C57BL/6 muis na hilarische klem. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig07large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
Aanvullende figuur 1: Introducer voor endotracheale tube. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/Supplemental_Figure_1_updated.pdf" target="_blank">Klik hier om dit bestand te downloaden.</a>

Het protocol schetst een haalbare, betrouwbare en reproduceerbare methode van linker pulmonale hilarische klemming die kan worden gebruikt om longischemie-reperfusieletsel in muismodellen te bestuderen.

Muizen linker pulmonale hilarische klemmodel van longischemie reperfusieletsel

Ischemia reperfusion injury (IRI) during lung transplantation is a major risk factor for post-transplant complications, including primary graft ...

We zijn geïnteresseerd in het bestuderen van de effecten van ischemie-reperfusieschade op de resultaten na longtransplantatie met als doel de onderliggende cellulaire en moleculaire mechanismen te begrijpen. Neutrofielen die de long binnendringen, dragen bij aan ischemie-reperfusieletsel of IRI. We hebben onlangs ontdekt dat B-cellen doorgaan met neutrofielen bij het binnendringen van de longen, en ze spelen een rol bij de rekrutering van neutrofielen na IRI.Linkerlongtransplantatie bij de muis is technisch uitdagend en vereist een fulltime, toegewijde training gedurende meerdere maanden om consistente resultaten te bereiken. Bovendien introduceert het allergeniciteit en chirurgisch anastomosetrauma. We hebben dus een meer toegankelijke techniek nodig die de studie van ischemie-reperfusieschade kan isoleren.Met behulp van ons hilarische klemmodel hebben we ontdekt dat B-cellen vroeg na ischemie-reperfusieschade de long binnendringen en klassieke monocyten in een B-celreceptor rekruteren op TLR4-afhankelijke wijze. Dit resulteert uiteindelijk in een verhoogde extravasatie van neutrofielen in de long. Ons protocol omvat omkeerbare hechtingsligatie van het linker pulmonale hilum met een schuifknoop.De buigzame en onopvallende aard van de hechting zorgt voor sluiting van de borstkas, wat handig is voor het bestuderen van langere perioden van warme ischemie, omdat borstsluiting warmte en ongevoelig vochtverlies bij de muis minimaliseert.

murine-left-pulmonary-hilar-clamp-model-lung-ischemia-reperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Chirurgisch trauma veroorzaakt een ontstekingsreactie. Cytokines en endogene liganden zijn bekend voor het moduleren van een myocard infarct grootte na ischemie en reperfusie. We presenteren een aangepaste gesloten kist model van muizen ischemie en reperfusie met behulp van gewichten opknoping om de effecten van thoracotomie te minimaliseren.

Een murine Closed-borst Model van myocardiale ischemie en reperfusie

We introduceren een chirurgische methode experimentele ischemie / reperfusie (I / R) letsel veroorzaken simuleren myocardiaal infarct (MI) in muismodellen die zorgt voor meer duidelijkheid in positionering van de ligatie van de LAD (LAD) om de reproduceerbaarheid te verhogen MI van experimenten in muizen.

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Een unieke rattenlever hilaire clamp model ontwikkeld voor het bestuderen van de effecten van farmacologische moleculen bij het verbeteren van ischemie-reperfusieletsel. Dit model omvat directe canulatie van het portaal toevoer naar het segment ischemische lever via een tak van de poortader, zodat hij direct hepatische afgifte.

Wijze van Direct Segmentale Intra-lever Delivery Met behulp van een Rat Liver Hilar Clamp Model

Hierin beschrijven we een chirurgische ingreep die laat zien hoe u permanente ligatie van de linker-anterieure aflopende coronaire slagader bij muizen bereikt. Dit model is van groot belang om de pathofysiologie van myocardiaal infarct en de gelijktijdige biologische processen te onderzoeken.

Murine myocardinfarct model met behulp van permanente Ligatie van linker anterieure aflopende coronaire slagader

We beschrijven in detail een klinisch relevante colorectale kanker Levermetastasen (CRLM) tumor model en de invloed van lever ischemie reperfusie (I/R) in tumorgroei en metastase. Dit model kan helpen om beter te begrijpen van de mechanismen onderliggende chirurgie-geïnduceerde bevordering van de lever metastatische groei.

Murine model van gemetastaseerde lever tumoren in de setting van ischemie reperfusie letsel

Myocardiale ischemie-reperfusie model van rattenhart wordt verbeterd door gebruik te maken van een zelfgemaakt retractor, polyvinylchloride buis, en een unieke knoopmethode. Elektrocardiogram, trifenyltetrazoliumchloride en histologische kleuring en procentuele overlevingsanalyseresultaten toonden aan dat de verbeterde modelgroep hogere succes- en overlevingskansen heeft dan de reeds bestaande modelgroep.

Verbeterd knaagdiermodel van myocardiale ischemie en reperfusieletsel

Een muischirurgisch model om reperfusie (IR) -letsel in de linkerlong te creëren met behoud van ventilatie en het vermijden van hypoxie.

Een muismodel van orotracheale intubatie en beademde longischemie reperfusiechirurgie

Hier wordt een chirurgische procedure gepresenteerd voor permanente ligatie van de linker kransslagader bij muizen. Dit model kan worden gebruikt om de pathofysiologie en bijbehorende ontstekingsreactie na een hartinfarct te onderzoeken.

Ligatie van de linker kransslagader: een chirurgisch muizenmodel van myocardinfarct

Deze studie beschrijft een model van acuut longletsel na viscerale ischemie-reperfusie tijdens supra-coeliakie aorta-kruisklemming via laparotomie bij ratten. Het maakt het mogelijk om zowel de klinische als biologische effecten van aortaklemmen te onderzoeken, evenals de impact van ischemie-reperfusie op onderliggende organen en longletsels op afstand.

Een model van acuut longletsel na viscerale ischemie-reperfusie door supracoeliakie aortakruisklemming bij ratten

We beschrijven modellen van matige en ernstige ischemie-reperfusie geïnduceerde nierschade waarin de muizen ondergaan unilaterale renale pedicle klemmen gevolgd door gelijktijdige of vertraagde contralaterale nefrectomie, respectievelijk. Deze modellen consequent aanleiding geven tot nierinsufficiëntie en na het letsel fibrose, maar letselernst en overleving afhankelijk zijn van de muis achtergrond, leeftijd en chirurgische apparatuur.

Ischemie-reperfusie model van Acute Kidney Injury en Post Letsel Fibrosis in Muizen

Leer een betrouwbaar model van linker pulmonale hilarische klemming om longischemie-reperfusieletsel bij muizen te bestuderen. Deze methode helpt onderzoekers de rol van neutrofielen en B-cellen te begrijpen.

Muizen linker pulmonale hilarische klemmodel van longischemie reperfusieletsel

Meer video's verkennen