Dissectie, histologische verwerking en genexpressieanalyse van supraclaviculaire bruine vetweefsel bij muizen
29 maart 2024
Hier bieden we een praktische procedure voor het ontleden en uitvoeren van histologische en genexpressie-analyses van supraclaviculair bruin vetweefsel bij muizen.
1 Ons laboratorium is gericht op het vestigenvan 2 supraclaviculair bruin vetweefsel 3 of SCBAT als een waardevol depot 4 voor de analyse van bruin vet vanwege de anatomische overeenkomsten 5 met menselijk bruin vetweefsel. 6 Dit protocol is gericht op het vergroten van de toegankelijkheid7 van SCBAT-onderzoek. 8 Dit depot kan intimiderend zijn vanwege zijn kleine formaat 9 en de nabijheid van grote aderen in de nek, 10 Het is dus absoluut noodzakelijk om 11 een eenvoudige methode te bieden voor het extraheren en verwerken van SCBAT.
12 Onze methodologie onderscheidt zich13 ten eerste door het gebruik van een ontleedmicroscoop 14 bij het extraheren van SCBAT. 15 Dit verhoogt de precisie 16 en de extractie-efficiëntie, 17 die beide van cruciaal belang zijn bij het werken 18 met zo'n klein weefseldepot. 19 Ten tweede hebben we de bevroren SCBAT-monsters gehomogeniseerd 20 voordat we genexpressieanalyse 21 uitvoerden om de RNA-opbrengst te verhogen om te compenseren 22 voor zo'n lage hoeveelheid beschikbaar weefsel.
23 We richten ons momenteel op het definiëren24 van de genetische voeringsrand van SCBAT, 25 het identificeren van de transfiguratienetwerken, 26 het reguleren van de ontwikkeling ervan, 27 en het ontwikkelen van een cerebraal model 28 voor het onderzoeken van de fysiologische functie ervan bij mensen.
Overzicht
Deze studie biedt een gedetailleerd protocol voor de dissectie van supraclaviculair bruin vetweefsel (scBAT) bij muizen, wat wordt beschouwd als een waardevol model voor het analyseren van bruin vet vanwege de anatomische overeenkomsten met menselijk bruin vetweefsel. De focus ligt op het verbeteren van de toegankelijkheid van scBAT-onderzoek door middel van nauwkeurige dissectie en daaropvolgende histologische analyses en analyses van genexpressie.
Belangrijkste studiecomponenten
Onderzoeksgebied
- Supraclaviculair bruin vetweefsel (scBAT)
- Genexpressieanalyse
- Histologische technieken
Achtergrond
- scBAT wordt erkend vanwege het potentiële belang in metabolisch onderzoek.
- De anatomische nabijheid van grote aderen vormt een uitdaging bij de dissectie.
- Er is behoefte geïdentificeerd aan toegankelijke en nauwkeurige extractiemethoden.
Gebruikte methoden
- Dissectie met behulp van een microscoop voor precisie.
- Genexpressieanalyse na homogenisatie van het weefsel.
- Hematoxyline- en eosinekleuring voor histologische beoordeling.
Belangrijkste resultaten
- Het beschreven protocol verbetert de extractie-efficiëntie en de kwaliteit van de genexpressiegegevens.
- scBAT vertoont kenmerkende weefselstructuren die worden aangetroffen in bruin vetweefsel.
- De studie legt de basis voor het begrijpen van de genetische afstamming en fysiologische rollen van scBAT.
Conclusies
- Dit protocol maakt effectiever onderzoek mogelijk naar de rollen van scBAT in het metabolisme.
- De bevindingen dragen bij aan het bredere vakgebied van de biologie van het vetweefsel.
Veelgestelde vragen
Relevantie voor de industrie
Precieze dissectie en moleculaire analyse van supraclaviculair bruin vetweefsel (scBAT) bij muizen maken translationele inzichten in de menselijke metabole regulatie mogelijk. Dit protocol bevordert vroege ontdekkingen door toegang te bieden tot een depot dat anatomisch analoog is aan menselijk BAT, wat mechanistische risicoreductie en targetvalidatie in onderzoek naar metabole ziekten ondersteunt. Verbeterde extractie- en genexpressieworkflows verhogen het voorspellende vertrouwen voor daaropvolgende portfoliobeslissingen.
Strategische toepassingen in biofarmaceutisch R&D
Vroege ontdekking & targetvalidatie
- Maakt onderzoek naar de biologie van bruin vetweefsel mogelijk in een depot dat relevant is voor de menselijke fysiologie.
- Ondersteunt functionele targetvalidatie door genexpressie- en morfologische analyses te faciliteren.
- Verbetert mechanistische risicoreductie door nauwkeurige weefselisolatie en moleculaire karakterisering.
- Biedt een platform voor het verduidelijken van regulatoire netwerken en ontwikkelingspaden in BAT.
Screening & Assay-ontwikkeling
- Biedt gestandaardiseerde weefselpreparatie voor reproduceerbare genexpressie- en histologische analyses.
- Optimaliseert monsterhomogenisatie om de RNA-opbrengst uit kleine weefseldepots te maximaliseren.
- Faciliteert kwantitatieve beoordeling van markergenexpressie voor assay-ontwikkeling.
- Maakt betrouwbare vergelijking tussen scBAT en andere BAT-depots mogelijk voor de evaluatie van verbindingen.
Translationeel & Preklinisch Onderzoek
- Lijnt murine scBAT-studies uit met de menselijke BAT-biologie voor translationeel onderzoek naar biomarkers.
- Ondersteunt de continuïteit van ontdekking tot preklinische validatie in modellen voor metabole ziekten.
- Biedt een basis voor ex-vivo modellering van BAT-functies die relevant zijn voor de menselijke fysiologie.
- Maakt risico-gecorrigeerde voortgang van metabole targets mogelijk op basis van depot-specifieke gegevens.
Integratie van pipeline en workflow
Dit protocol integreert in het continuüm van ontdekking naar preklinisch onderzoek door nauwkeurige hypothesetoetsing en moleculaire profilering van een ziekterellevant BAT-depot mogelijk te maken.
- Ontdekkingsbiologie: Ondersteunt de verduidelijking van signaalpaden en biologische risicoreductie via gerichte genexpressieanalyse.
- Screening: Levert reproduceerbare, kwantitatieve resultaten voor assay-gereedheid en vergelijkingen tussen verschillende depots.
- Analytiek: Levert robuuste moleculaire en histologische read-outs ter ondersteuning van conditiespecifieke analyses.
- Translationeel onderzoek: Slaat een brug tussen murine en humane BAT-studies voor biomarker-afstemming en preklinische continuïteit.
- Bedrijfsbrede hergebruik: Vestigt een herbruikbare workflow voor scBAT-extractie en -analyse binnen metabole onderzoeksprogramma's.
Operationele & Bedrijfsimpact
- Wetenschappelijke waarde: Verhoogt het voorspellende vertrouwen en vermindert mechanistische ambiguïteit in BAT-onderzoek.
- Operationele waarde: Standaardiseert weefselverwerking en moleculaire analyse voor reproduceerbaarheid en schaalbaarheid.
- Strategische waarde: Maakt geïnformeerde go/no-go beslissingen en kapitaalefficiënte portfolio-progressie mogelijk in pipelines voor metabole ziekten.
- Impact op portfolio: Ondersteunt risico-gecorrigeerde prioritering van targets en modellen op basis van depot-specifieke gegevens.
Overwegingen voor implementatie
- Vereist expertise in muisdissectie en moleculaire biologische technieken.
- Toegang tot dissectiemicroscopen, histologie en qPCR-infrastructuur is noodzakelijk.
- Vereist standaardisatie tussen teams voor weefselverwerking en datainterpretatie.
- Kan aanpassing vereisen voor verschillende muisleeftijden of genetische achtergronden.
- Beperkt door de geringe omvang en anatomische complexiteit van scBAT, wat een nauwkeurige techniek noodzakelijk maakt.
Veelgestelde vragen over Biopharma
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:24
Dissection of Supraclavicular Brown Adipose Tissue in Mice
2:54
Supraclavicular Brown Adipose Tissue Processing for Hematoxylin and Eosin Staining
4:49
Total RNA Isolation from Supraclavicular Brown Adipose Tissue for Gene Expression Analysis
![Visualisatie en kwantificering van bruine en beige vetweefsels bij muizen met behulp van [18F] FDG Micro-PET / MR Imaging](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fcloudfront.jove.com%2FCDNSource%2Fteasers%2F62460.jpg%3Fv%3D2026-08-11T08%253A27%253A22.161Z&w=384&q=75)
