Name: Hemostase van punctiewonden en voorbereiding van monsters voor gemonteerde elektronenmicroscopieanalyse met een groot gebied (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 41 s
Description: Leer een punctiewondprocedure voor hemostasestudies met muismodellen en volume-elektronenmicroscopie. Deze methode onthult de structuur van trombi en verbetert het inzicht in bloedstolling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Hemostase van de prikwond en gemonteerde elektronenmicroscopie

<ol><li>Rhee, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+puncture+and+wound+hemostasis+results+in+a+vaulted+thrombus+structured+by+locally+nucleated+platelet+aggregates%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">Venous puncture and wound hemostasis results in a vaulted thrombus structured by locally nucleated platelet aggregates.</a> Comm Biol. 4 (1), 1090(2021).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tethered+platelet+capture+provides+a+mechanism+for+restricting+circulating+platelet+activation+in+the+wound+site%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Pract+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Tethered platelet capture provides a mechanism for restricting circulating platelet activation in the wound site.</a> Res Pract Thromb Haemost. 7 (2), 100058(2023).</li>
<li>Yadav, S., Storrie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+basis+of+platelet+secretion%3A+emerging+structure%2Ffunction+relationships%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">The cellular basis of platelet secretion: emerging structure/function relationships.</a> Platelets. 28 (2), 108-118 (2017).</li>
<li>Joshi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+and+sample+collection+for+3D+electron+microscopy+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced arterial thrombosis and sample collection for 3D electron microscopy analysis.</a> J Vis Exp. (193), e64985(2023).</li>
<li>Guerrero, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+von+Willebrand+factor%2Fglycoprotein+Ib-IX+axis+with+a+platelet-type+von+Willebrand+disease+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Visualizing the von Willebrand factor/glycoprotein Ib-IX axis with a platelet-type von Willebrand disease mutation.</a> Blood. 114 (27), 5541-5546 (2009).</li>
<li>Kato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+glycoprotein+VI+to+stable+platelet+adhesion+and+thrombus+formation+illustrated+by+targeted+gene+deletion%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The contribution of glycoprotein VI to stable platelet adhesion and thrombus formation illustrated by targeted gene deletion.</a> Blood. 102 (5), 1701-1707 (2003).</li>
<li>Tomaiuolo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrelationships+between+structure+and+function+during+the+hemostatic+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+NatlAcad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Interrelationships between structure and function during the hemostatic response to injury.</a> Proc NatlAcad Sci U S A. 116 (6), 2243-2252 (2019).</li>
<li>Cocchiaro, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasmic+lipid+droplets+are+translocated+into+the+lumen+of+the+Chlamydia+trachomatis+parasitophorous+vacuole%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Cytoplasmic lipid droplets are translocated into the lumen of the Chlamydia trachomatis parasitophorous vacuole.</a> Proc Natl Acad Sci. 105 (27), 9379-9384 (2008).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlamydia+trachomatis+hijacks+intra+-+Golgi+COG+complex+-+dependent+vesicle+trafficking+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Chlamydia trachomatis hijacks intra - Golgi COG complex - dependent vesicle trafficking pathway.</a> Cell Microbiol. 14 (5), 656-668 (2012).</li>
<li>Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+electron+microscope+tomography+using+robust+prediction+of+specimen+movements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Str+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated electron microscope tomography using robust prediction of specimen movements.</a> J Str Biol. 152 (1), 36-51 (2005).</li>
<li>Kremer, J. R., Mastronarde, D. N., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+visualization+of+three-dimensional+image+data+using+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Str+Biol%22%5BJournal%5D)">Computer visualization of three-dimensional image data using IMOD.</a> J Str Biol. 116 (1), 71-76 (1996).</li>
<li>Chan, N. C., Eikelboom, J. W., Weitz, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+treatments+for+arterial+and+venous+thrombosis%3A+role+of+the+direct+oral+anticoagulants%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Evolving treatments for arterial and venous thrombosis: role of the direct oral anticoagulants.</a> Circ Res. 118 (9), 1409-1424 (2016).</li>
<li>Kiernan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde%2C+formalin%2C+paraformaldehyde%2C+and+glutaraldehyde%3A+what+they+are+and+what+they+do%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Today%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde, formalin, paraformaldehyde, and glutaraldehyde: what they are and what they do.</a> Microscopy Today. 8 (1), 8-13 (2000).</li>
<li>Storrie, B., Attardi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+mitochondrial+genome+in+HeLa+cells%3A+XV.+Effect+of+inhibition+of+mitochondrial+protein+synthesis+on+mitochondrial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+CellBiol%22%5BJournal%5D)">Expression of the mitochondrial genome in HeLa cells: XV. Effect of inhibition of mitochondrial protein synthesis on mitochondrial formation.</a> J CellBiol. 56, 819-831 (1973).</li>
<li>Liu, S., Pokrovskaya, I. D., Storrie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+-+pressure+freezing+followed+by+freeze+substitution%3A+an+optimal+electron+microscope+technique+to+study+Golgi+apparatus+organization+and+membrane+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">High - pressure freezing followed by freeze substitution: an optimal electron microscope technique to study Golgi apparatus organization and membrane trafficking.</a> Meth Mol Biol. 2557, 211-223 (2023).</li>
<li>Klarhofer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+blood+flow+velocity+measurements+in+the+human+finger%5BTitle%5D)+AND+%22Mag+Res+Med%22%5BJournal%5D)">High-resolution blood flow velocity measurements in the human finger.</a> Mag Res Med. 45 (4), 716-719 (2001).</li>
<li>Chaudry, R., Miao, J. H., Rehman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology%2C+cardiovascular%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls%22%5BJournal%5D)">Physiology, cardiovascular.</a> StatPearls. , Treasure Island, FL, USA. (2022).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNARE+-+dependent+membrane+fusion+initiates+a-granule+matrix+decondensation+in+mouse+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">SNARE - dependent membrane fusion initiates a-granule matrix decondensation in mouse platelets.</a> Blood Adv. 2 (21), 2947-2958 (2018).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+ultrastructural+analysis+of+a-granule%2C+dense+granule%2C+mitochondria%2C+and+canalicular+system+arrangement+in+resting+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Pract+Thrombosis+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">3D ultrastructural analysis of a-granule, dense granule, mitochondria, and canalicular system arrangement in resting human platelets.</a> Res Pract Thrombosis Haemostasis. 4 (1), 72-85 (2019).</li>
</ol>

```html
<table><tbody><tr><td>0.9% Normal Saline Solution</td><td>Medline</td><td>BHL2F7123HH</td><td></td></tr><tr><td>27G x 3/4 EXELint scalp vein set</td><td>Medline</td><td>NDA26709</td><td></td></tr><tr><td>30G x 1/2 EXELint hypodermic needles</td><td>Medline</td><td>NDA264372</td><td></td></tr><tr><td>33G x 1/2 EXELint specialty hypodermic needles</td><td>Medline</td><td>NDA26393</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Conical Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-443-20</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Prep Pads (70% Isopropyl Alcohol)</td><td>Medline</td><td>MDS090670Z</td><td></td></tr><tr><td>Aluminum Foil</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>Animal Heating Plate</td><td>Physitemp Instruments</td><td>HP-1M</td><td></td></tr><tr><td>Araldite GY 502</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>10900</td><td></td></tr><tr><td>Axiocam 305 Color R2 Microscopy Camera</td><td>Carl Zeiss Microscopy</td><td>426560-9031-000</td><td></td></tr><tr><td>BD Luer-Lok Syringes, 20 mL</td><td>Medline</td><td>B-D303310Z</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>Cell Culture Dishes 35mm x 10mm</td><td>Corning Inc.</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Tipped Applicators</td><td>Medline</td><td>MDS202055H</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30 Activator</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>Dodecenyl Succinic Anhydride/ DDSA</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>13700</td><td></td></tr><tr><td>Dressing Forceps, 5", curved, serrated, narrow tipped</td><td>Integra Miltex</td><td>6-100</td><td></td></tr><tr><td>Dressing Forceps, 5", standard, serrated</td><td>Integra Miltex</td><td>6-6</td><td></td></tr><tr><td>EMBED 812 Resin</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>Ethyl Alcohol, anhydrous 200 proof</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15055</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand 4-Way Tube Rack</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-17</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Digital Timer</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-649-17</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Single Syringe Infusion Pump</td><td>Fisher Scientific</td><td>7801001</td><td></td></tr><tr><td>Gauze Sponges 2" x 2"- 4 Ply</td><td>Medline</td><td>NON26224H</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde (10% Solution)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane Liquid Inhalant Anesthesia, 100 mL</td><td>Medline</td><td>66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>Jeweler-Style Micro-Fine Forceps, Style 5F</td><td>Integra Miltex</td><td>17-305</td><td>Need 2 pairs.</td></tr><tr><td>L/S Pump Tubing, Silicone, L/S 15; 25 Ft</td><td>VWR</td><td>MFLX96410-15</td><td></td></tr><tr><td>L-Aspartic Acid</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP374-100</td><td></td></tr><tr><td>Lead Nitrate</td><td>Fisher Scientific</td><td>L-62</td><td></td></tr><tr><td>Malachite Green 4</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>18100</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Easy-Load II Pump Head</td><td>VWR</td><td>MFLX77200-62</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Variable Speed Digital Drive</td><td>VWR</td><td>MFLX07528-10</td><td></td></tr><tr><td>MSC Xcelite 5" Wire Cutters</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-191-9855</td><td></td></tr><tr><td>Osmium Tetroxide 4% Aqueous Solution</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>19150</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (16% Solution)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Physitemp Temperature Controller</td><td>Physitemp Instruments</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Ferrocyanide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-8131</td><td></td></tr><tr><td>Propylene Oxide, ACS Reagent</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>20401</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex Glass Beakers</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-555-25B</td><td></td></tr><tr><td>Rectal Temperature Probe for Mice</td><td>Physitemp Instruments</td><td>RET-3</td><td></td></tr><tr><td>Scotch Magic Invisible Tape, 3/4" x 1000"</td><td>3M Company</td><td>305289</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Cacodylate Buffer 0.2M, pH 7.4</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>11623</td><td></td></tr><tr><td>SomnoFlo Low Flow Electronic Vaporizer</td><td>Kent Scientific</td><td>SF-01</td><td></td></tr><tr><td>SomnoFlo Starter Kit for Mice</td><td>Kent Scientific</td><td>SF-MSEKIT</td><td></td></tr><tr><td>Stainless Steel Minutien Pins</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope steREO Discovery.V12</td><td>Carl Zeiss Microscopy</td><td>495015-9880-010</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silicone Elastomer</td><td>World Precision Instruments</td><td>SYLG184</td><td>silicone mat</td></tr><tr><td>Tannic Acid</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>21700</td><td></td></tr><tr><td>Thiocarbohydrazide (TCH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>88535</td><td></td></tr><tr><td>Uranyl Acetate</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Spring Micro Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Von Graefe Eye Dressing Forceps, 2.75", Curved, Serrated</td><td>Integra Miltex</td><td>18-818</td><td>Need 2 pairs.</td></tr><tr><td>Wagner Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>Wahl MiniFigura Animal Trimmer</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-9868</td><td></td></tr><tr><td>Zen Lite Software</td><td>Carl Zeiss Microscopy</td><td>410135-1001-000</td><td></td></tr></tbody></table>
```

hemostase van punctiewonden en voorbereiding van monsters voor gemonteerde elektronenmicroscopieanalyse met een groot gebied

Puncture Wound Hemostasis and Preparation of Samples for Montaged Wide-Area Electron Microscopy Analysis

Hemostase van punctiewonden en voorbereiding van monsters voor gemonteerde elektronenmicroscopieanalyse met een groot gebied

Hemostasis, the process of normal physiological control of vascular damage, is fundamental to human life. We all suffer minor cuts and puncture wounds ...

puncture-wound-hemostasis-preparation-samples-for-montaged-wide-area

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Wij beschrijven een protocol voor transcardiale perfusie van muizen, het verwijderen en doorsnijden van de hersenen, evenals immunoperoxidasekleuring, inbedding in hars en ultradunne doorsneden van de hersencoupjes. Na voltooiing van deze procedures is het immuungekleurde materiaal klaar voor onderzoek met transmissie-elektronenmicroscopie.

Voorbereiding van de muis hersenweefsel voor Immunoelectron Microscopie

Cryo elektronenmicroscopen, ofwel Scanning (SEM) of Transmission (TEM), worden op grote schaal gebruikt voor de karakterisering van biologische monsters of andere materialen met een hoog watergehalte 1. Een SEM / focused ion beam (FIB) wordt gebruikt om kenmerken van belang in monsters identificeren en extract een dun, elektron-transparante lamellen overbrenging op een cryo-TEM.

Cryo-elektron microscopie Specimen Voorbereiding door middel van een Focused Ion Beam

Het doel van dit protocol is om een driedimensionaal huidequivalent van volledige dikte op te bouwen, dat lijkt op natuurlijke huid. Met een speciaal geconstrueerd geautomatiseerd wondapparaat kunnen nauwkeurige en reproduceerbare wonden worden gegenereerd onder behoud van steriliteit.

Genereren van een drie-dimensionale volledige dikte huidequivalent en Automated Verwonden

Hier wordt een methode getoond voor het visualiseren van de ultrastructuur van de extracellulaire matrix in gedecellulariseerde hartweefsels.

Scanning Electron Microscopy van Gemacereerde Tissue te visualiseren de extracellulaire matrix

Een instrument en methoden voor de bereiding van de monster nanoliter middelgrote volumes voor transmissie-elektronenmicroscopie wordt gepresenteerd. Er zijn geen papier-bevlekken stappen vereist, dus het vermijden van de schadelijke gevolgen dat voor eiwitten hebben kan, aanzienlijk verminderen monster verlies en de analyse van eencellige lysate voor visuele proteomics inschakelen.

Verkleinde monstervoorbereiding voor transmissie-elektronenmicroscopie

Hier presenteren we een protocol voor het combineren van twee monster verwerkingstechnieken, hogedruk bevriezing en magnetron-bijgewoonde monster verwerking, gevolgd door minimaal hars inbedding voor het verkrijgen van gegevens met een gerichte ion beam scannende elektronen microscoop (FIB-SEM). Dit is aangetoond door middel van een muis nervus monster en Caenorhabditis elegans.

Bereiding van de biologische monsters door hogedruk bevriezing, magnetron-bijgewoonde contrastverbetering, en minimale hars inbedding voor Volume Imaging

Hier geven we een gedetailleerde beschrijving van de procedure om colonoscopisch geleide knijpbiopten bij muizen te induceren en wondsluiting in realtime te volgen. Daarnaast zijn er methoden voor de bereiding van weefsels voor histologische, immunohistochemische en moleculaire analyses van het wondbed.

Colonoscopische geleide pinch-biopsieën bij muizen uitvoeren en daaropvolgende weefselveranderingen evalueren

Dit protocol beschrijft hoe bilaterale excisionale wonden met volledige dikte bij muizen kunnen worden gegenereerd en hoe u de wonden vervolgens controleren, oogsten en voorbereiden op morfometrische analyse. Inbegrepen is een diepgaande beschrijving van het gebruik van seriële histologische secties om morfometrische defecten te definiëren, nauwkeurig te kwantificeren en op te sporen.

Murine Excisional Wound Healing Model en Histological Morphometric Wound Analysis

Hier presenteren we een protocol om de ultrastructuur van de megakaryocyten in situ te analyseren met behulp van transmissie-elektronenmicroscopie (TEM). Murine beenmerg wordt verzameld, gefixeerd, ingebed in epoxyhars en gesneden in ultradunne secties. Na contrastkleuring wordt het beenmerg waargenomen onder een TEM-microscoop bij 120 kV.

In situ Exploratie van Murine Megakaryopoiesis met behulp van Transmissie ElektronenMicroscopie

Het huidige protocol beschrijft hoe een FeCl 3-gemedieerd letsel kan worden gebruikt om arteriële trombose te induceren en hoe arteriële letselmonsters in verschillende stadia van trombose kunnen worden verzameld en voorbereid voor elektronenmicroscopieanalyse.

IJzerchloride-geïnduceerde arteriële trombose en monsterverzameling voor 3D-elektronenmicroscopieanalyse

Leer een punctiewondprocedure voor hemostasestudies met muismodellen en volume-elektronenmicroscopie. Deze methode onthult de structuur van trombi en verbetert het inzicht in bloedstolling.

Hemostase van punctiewonden en voorbereiding van monsters voor gemonteerde elektronenmicroscopieanalyse met een groot gebied

Meer video's verkennen