Name: Snelle glyco-kwalitatieve beoordeling van recombinante eiwitten met behulp van een volledig geautomatiseerd systeem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: Leer een volledig geautomatiseerd glyco-kwalificatiesysteem voor snelle analyse van glycanen op recombinante eiwitten. Deze lectine-gebaseerde methode vermindert arbeidsintensiteit en ondersteunt validatie van ziektespecifieke glycobiomarkers.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Geautomatiseerde glycaanprofilering op basis van lectine met behulp van Bead Array in a Single Tip (BIST)

<ol><li>Butler, M., Reichl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+cell+expression+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal cell expression systems.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 175, 1-36 (2021).</li>
<li>Silva, M. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+One+-+Lectin+biosensors+in+cancer+glycan+biomarker+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Chapter One - Lectin biosensors in cancer glycan biomarker detection.</a> Adv Clin Chem. 93, 1-61 (2019).</li>
<li>Hiono, T., Nagai-Okatani, C., Kuno, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4.07+-+Application+of+glycan-related+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Glycoscience+%28Second+Edition%29%22%5BJournal%5D)">4.07 - Application of glycan-related microarrays.</a> Comprehensive Glycoscience (Second Edition). , 134-148 (2021).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lectin+bead+array+in+a+single+tip+facilitates+fully+automatic+glycoprotein+profiling%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Lectin bead array in a single tip facilitates fully automatic glycoprotein profiling).</a> Anal Chem. 91 (17), 11162-11169 (2019).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GlycoBIST%3A+A+System+for+automatic+glycan+profiling+of+a+target+protein+using+milli-bead+array+in+a+tip%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">GlycoBIST: A System for automatic glycan profiling of a target protein using milli-bead array in a tip.</a> Curr Protoc Protein Sci. 99 (1), e103(2020).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+Technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: Technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).</li>
<li>Bojar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+useful+guide+to+lectin+binding%3A+machine-learning+directed+annotation+of+57+unique+lectin+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">A useful guide to lectin binding: machine-learning directed annotation of 57 unique lectin specificities.</a> ACS Chem Biol. 17 (11), 2993-3012 (2022).</li>
<li>Nagai-Okatani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2.0%3A+An+integrated+visualization+for+lectin+microarray-based+mouse+tissue+glycome+mapping+data+with+lectin+histochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">2.0: An integrated visualization for lectin microarray-based mouse tissue glycome mapping data with lectin histochemistry.</a> J Proteome Res. 20 (4), 2069-2075 (2021).</li>
<li>Geisler, C., Jarvis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+glycoanalysis+with+Maackia+amurensis+lectins+requires+a+clear+understanding+of+their+binding+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Effective glycoanalysis with Maackia amurensis lectins requires a clear understanding of their binding specificities.</a> Glycobiology. 21 (8), 988-993 (2011).</li>
<li>Noro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N+-glycan+structures+of+Wisteria+floribunda+agglutinin-positive+Mac2+binding+protein+in+the+serum+of+patients+with+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">N -glycan structures of Wisteria floribunda agglutinin-positive Mac2 binding protein in the serum of patients with liver fibrosis.</a> Glycobiology. 31 (10), 1268-1278 (2021).</li>
<li>Rawitch, A. B., Pollock, H. G., Yang, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thyroglobulin+glycosylation%3A+Location+and+nature+of+the+N-Linked+oligosaccharide+units+in+bovine+thyroglobulin%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Thyroglobulin glycosylation: Location and nature of the N-Linked oligosaccharide units in bovine thyroglobulin.</a> Arch Biochem Biophys. 300 (1), 271-279 (1993).</li>
<li>Dang, K., Zhang, W., Jiang, S., Lin, X., Qian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+lectin+microarrays+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+Open%22%5BJournal%5D)">Application of lectin microarrays for biomarker discovery.</a> Chemistry Open. 9 (3), 285-300 (2020).</li>
<li>Chen, S., Qin, R., Mahal, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sweet+systems%3A+Technologies+for+glycomic+analysis+and+their+integration+into+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Sweet systems: Technologies for glycomic analysis and their integration into systems biology.</a> Crit Rev Biochem Mol Biol. 56 (3), 301-320 (2021).</li>
<li>Dwivedi-Agnihotri, H., Srivastava, A., Shukla, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+biotinylation+of+purified+proteins+for+measuring+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Reversible biotinylation of purified proteins for measuring protein-protein interactions.</a> Methods Enzymol. 633, 281-294 (2020).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auto-lectin+dotcoding+by+two+octopuses%3A+Rapid+analysis+of+fluorescence-labeled+glycoproteins+by+an+8-channel+fully-automatic+bead+array+scanner+with+a+rolling-circle+detector%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Auto-lectin dotcoding by two octopuses: Rapid analysis of fluorescence-labeled glycoproteins by an 8-channel fully-automatic bead array scanner with a rolling-circle detector.</a> Anal Chem. 95 (32), 11868-11873 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.2 mL 8 PCR tubes + flat cap</td><td>FastGene</td><td>FG-0028FC/SE</td><td>Voor het doseren en opslaan van biotinyleringsreagentia</td></tr><tr><td>2.0 mL SC Micro Tube protein LB</td><td>SARSTEDT AG&amp;Co. KG</td><td>72.694.600</td><td>Voor het laden van monsters in LuBEA-VIII</td></tr><tr><td>Analysesoftware</td><td>SAS Institute Inc.</td><td>JMP 17</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Statische Ionisator. 110 volt</td><td>Plas-Labs</td><td>800-AS/SPI</td><td>Gebruik tijdens het inbrengen van kralen in BIST Tip.</td></tr><tr><td>Antistatische pincet NK2A</td><td>RUBIS&nbsp;</td><td>9-5681-01</td><td>Gebruik tijdens het inbrengen van kralen in BIST Tip.</td></tr><tr><td>Geautomatiseerd reactiemeetapparaat</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>LuBEA</td><td>Alle gegevens in deze studie zijn verkregen met LuBEA-VIII. Terwijl LuBEA gecommercialiseerd is, bevindt LuBEA-VIII zich momenteel in de ontwikkelingsfase. De website voor productdetails van LuBEA en LuBEA-VIII is te vinden op de volgende URL (https://www.pss.co.jp/english/technology/apit/bist02.html).</td></tr><tr><td>Biotine-(AC5)2 Sulfo-Osu</td><td>Dojindo</td><td>341-06801</td><td>Als biotinyleringsreagens</td></tr><tr><td>BIST spacerkraal- V-11</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>F4938000</td><td>Diameter: 1 mm</td></tr><tr><td>BIST tip en huls</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>F4930-000</td><td>Vul deze lege tip met kralen.</td></tr><tr><td>Calciumchloride</td><td>Wako</td><td>039-00475</td><td>Voor het bereiden van bufferoplossingen</td></tr><tr><td>Can Get Signal Solution 2</td><td>TOYOBO</td><td>NKB-301</td><td>Deze blokkeringsreagens is goed voor deze methode</td></tr><tr><td>CentriVap Benchtop Vacuum Concentrators</td><td>Labconco</td><td>7810010</td><td>Voor het drogen van biotinyleringsreagens. De vervanging door andere bedrijven is mogelijk.</td></tr><tr><td>Clarity Western ECL Substraat&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1705060</td><td>Voor het meten van de monsters met LuVEA VIII</td></tr><tr><td>Cold trap CentriVap series</td><td>Labconco</td><td>7460040</td><td>Voor het drogen van biotinyleringsreagens. De vervanging door andere bedrijven is mogelijk.</td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Wako</td><td>077-00735</td><td>Voor het bereiden van bufferoplossingen</td></tr><tr><td>Mangaan(II) Chloride Tetrahydraat</td><td>Wako</td><td>139-00722</td><td>Voor het bereiden van bufferoplossingen</td></tr><tr><td>Milli-Q referentie</td><td>MERCK</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>Als gedeioniseerd water voor het verdunnen van reagentia en buffers</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wako</td><td>162-19321</td><td>Voor het bereiden van bufferoplossingen</td></tr><tr><td>Peroxidase Streptavidin</td><td>Jackson</td><td>016-030-084</td><td>Dit antilichaam is goed voor GlycoBIST-analyse. Het is nuttig voor de detectie van de western blotting, hoewel vervangingen kunnen worden geleverd door andere bedrijven.</td></tr><tr><td>Probekraal</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>FP4936000</td><td>Voor het bereiden van lectin-gefixeerde kralen. Zie Shimazaki, H. et al., Current Protocols in Protein Science, 2020 in de referentiesectie voor meer informatie.</td></tr><tr><td>Protein LoBind Tubes 1.5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>0030108442</td><td>Gebruik bij het bereiden van monsters zoals biotinylering.</td></tr><tr><td>Silica gel (voor droogmiddel)</td><td>Kanto chemical</td><td>37039-02</td><td>Gebruik bij het opslaan van de GlycoBIST tip en gedroogde biotinyleringsreagens.</td></tr><tr><td>Statische elektriciteit verwijderingsblad M</td><td>TRUSCO NAKAYAMA</td><td>SD5050</td><td>Gebruik tijdens het inbrengen van kralen in BIST Tip.</td></tr><tr><td>SV Cartridge II</td><td>Daido Chemical Industry</td><td>ED041</td><td>Voor het meten van de monsters met LuVEA VIII</td></tr><tr><td>Tabel Microcentrifuge-CAPSULEFUGE</td><td>TOMY</td><td>PMC-060</td><td>Voor het centrifugeren van het mengsel in elk proces</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Nacalai tesque</td><td>35501-15</td><td>Voor het bereiden van bufferoplossingen</td></tr></tbody></table>

snelle glyco-kwalitatieve beoordeling van recombinante eiwitten met behulp van een volledig geautomatiseerd systeem

Rapid Glyco-Qualitative Assessment of Recombinant Proteins Using a Fully Automated System

Snelle glyco-kwalitatieve beoordeling van recombinante eiwitten met behulp van een volledig geautomatiseerd systeem

Protein glycosylation, a critical post-translational modification, influences the stability, efficacy, and immunogenicity of recombinant proteins, ...

rapid-glyco-qualitative-assessment-recombinant-proteins-using-fully

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

In deze studie beschrijven we een verbeterde protocol een gemultiplexte high-throughput antilichaam microarray met lectine detectiemethode die gebruikt kan worden in de glycosylering profilering van specifieke eiwitten. Dit protocol is voorzien van nieuwe betrouwbare reagentia en vermindert de tijd, kosten en lab-apparatuur eisen ten opzichte van de vorige procedure.

Chemisch-geblokkeerde Antilichaam Microarray voor multiplexverzending High-throughput Profilering van specifiek eiwit glycosylering in Complex Samples

In deze studie werd de expressie van een doelgerichte humane recombinante eiwit in verschillende productieplatforms vergeleken. We concentreerden ons op traditionele fermentor-gebaseerde culturen en op planten, waarbij we de instelling van elk systeem beschreven en, op basis van de gerapporteerde resultaten, de inherente grenzen en voordelen voor elk platform benadrukten.

Een vergelijkende analyse van recombinant eiwit expressie in verschillende biofactories: Bacteriën, Insect Cells and Plant Systems

We presenteren een geautomatiseerde modulaire methode met hoge doorvoer voor de identificatie en karakterisering van microbiële exopolysachariden op kleine schaal. Deze methode combineert een snelle preselectie om de totale hoeveelheid uitgescheiden polysacchariden te analyseren met een gedetailleerd koolhydraat-vingerafdruk om het snelle screenen van nieuw geïsoleerde bacteriestammen of hele stamcollecties mogelijk te maken.

Geautomatiseerde Modular High Throughput exopolysaccharide Screening Platform Samen met Highly Sensitive Koolhydraten Fingerprint Analysis

Een hoogdoorvoerprotocol werd ontwikkeld voor gecombineerde proteomics en glycomics zuivering en LC-MS/MS kwantificering in plasma. Deamidatie-analyse van N-gekoppelde glycosyleringsmotieven was specifiek voor degekoppelde sites. Nauwkeurige kwantificering van N-glycanen werd bereikt door filterondersteunde N-glycaanscheiding te koppelen aan de individualiteitsnormalisatie bij het labelen met glycaanhydrazide-tagsstrategie.

Een kwantitatieve Glycomics en Proteomics Combined Purification Strategy

Dit artikel beschrijft een methode cardiovasculaire weefselmonsters voor MS analyse mogelijk maakt (1) de analyse van ECM eiwitsamenstelling, (2) het identificeren van glycosyleringsplaatsen, en (3) de samenstelling karakterisering van glycan vormen moeten worden bereid. Deze methodologie kan worden toegepast, met kleine modificaties, voor de studie van de ECM in andere weefsels.

Glycoproteoomanalyses van de extracellulaire matrix: Een methode voor Intact Glycopeptide analyse met behulp van massaspectrometrie

Dit werk toont het potentieel van gedrukte glycan matrix (PGA) technologie voor de analyse van de circulerende anti-koolhydraten antistoffen bij kleine dieren.

Gedrukte Glycan Array: Een gevoelige techniek voor de analyse van het Repertoire van circulerende anti-koolhydraten antilichamen in kleine dieren

Een gedetailleerd protocol voor de gelijktijdige werking van 48 parallelle celculturen onder uiteenlopende omstandigheden in een systeem van microbioreactor wordt gepresenteerd. Proces van de cultuur van de cel, oogst en latere antilichaam titer analyse worden beschreven.

Gebruik van High-Throughput geautomatiseerd Microbioreactor-systeem voor de productie van Model IgG1 in CHO cellen

Een gedetailleerd protocol voor de zuivering en daaropvolgende analyse van een monoklonaal antilichaam uit geoogste celkweek vloeistof (HCCF) van geautomatiseerde microbioreactoren is beschreven. Het gebruik van analyses om kritische kwaliteitskenmerken (CQAs) te bepalen en beperkt sample volume te maximaliseren om vitale informatie te extraheren wordt ook gepresenteerd.

Zuivering en analyse van een monoklonaal antilichaam van Chinese Hamster Ovariumcellen met behulp van een geautomatiseerd Microbioreactor systeem

Immunoglobuline G (IgG) N-glycan wordt gekenmerkt met behulp van hydrofiele interactie CHROMATOGRAFIE UPLC. Daarnaast is de structuur van IgG N-glycan duidelijk gescheiden. Hier gepresenteerd is een inleiding tot deze experimentele methode, zodat het op grote schaal kan worden gebruikt in onderzoeksinstellingen.

Immunoglobuline G N-Glycan-analyse door Ultra-prestatie vloeistofchromatografie

Het glycosyleringspatroon van een antilichaam bepaalt de klinische prestaties, dus industriële en academische inspanningen om glycosylatie te beheersen blijven bestaan. Omdat typische glyco-engineeringcampagnes tijd- en arbeidsintensief zijn, zou het genereren van een snel protocol om de impact van glycosyleringsgenen te karakteriseren met behulp van transiënte uitschakeling nuttig zijn.

Snelle antilichaamglycosengineering in ovariumcellen van Chinese hamsters

Dit protocol beschrijft de productie van recombinante humane SLFN14-ribonuclease en de stoichiometrische analyse daarvan door massafotometrie.<br...

Snelle productie van recombinante menselijke SLFN14-ribonuclease en stoichiometrische analyse door massafotometrie

Leer een volledig geautomatiseerd glyco-kwalificatiesysteem voor snelle analyse van glycanen op recombinante eiwitten. Deze lectine-gebaseerde methode vermindert arbeidsintensiteit en ondersteunt validatie van ziektespecifieke glycobiomarkers.

Snelle glyco-kwalitatieve beoordeling van recombinante eiwitten met behulp van een volledig geautomatiseerd systeem

Meer video's verkennen