Name: Voorbereiding en analyse van histologische objectglaasjes van de oogbollen van ratten en muizen om het netvlies te evalueren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Leer een stap-voor-stap protocol voor histologische preparatie van netvliesweefsels bij knaagdieren. Deze methode maakt gedetailleerde celbeoordeling mogelijk met minder artefacten dan andere technieken.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Beoordeling van de dikte van het netvlies en het aantal ganglioncellen in de oogbollen van knaagdieren

<ol><li>Kels, B. D., Grzybowski, A., Grant-Kels, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ocular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Human ocular anatomy.</a> Clin Dermatol. 33 (2), 140-146 (2015).</li>
<li>Gupta, M. P., Herzlich, A. A., Sauer, T., Chan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+anatomy+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Retinal anatomy and pathology.</a> Dev Ophthalmol. 55, 7-17 (2016).</li>
<li>Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+diversity+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Neuronal diversity in the retina.</a> Curr Opin Neurobiol. 11 (4), 431-436 (2001).</li>
<li>Vecino, E., Rodriguez, F. D., Ruzafa, N., Pereiro, X., Sharma, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia-neuron+interactions+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Glia-neuron interactions in the mammalian retina.</a> Prog Retin Eye Res. 51, 1-40 (2016).</li>
<li>Boulton, M., Dayhaw-Barker, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+retinal+pigment+epithelium%3A+Topographical+variation+and+ageing+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">The role of the retinal pigment epithelium: Topographical variation and ageing changes.</a> Eye (Lond). 15 (Pt 3), 384-389 (2001).</li>
<li>Baden, T., Euler, T., Berens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+retinal+basis+of+vision+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Understanding the retinal basis of vision across species.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (1), 5-20 (2020).</li>
<li>Nguyen-Ba-Charvet, K. T., Chédotal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+retinal+layers%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of retinal layers.</a> C R Biol. 337 (3), 153-159 (2014).</li>
<li>Adams, T., Chernoff, E., Wilson, J., Dharmarajan, S. Reactive muller glia as potential retinal progenitors. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAdams%2C+T+%22InTech%22">InTech</a>. , (2013).</li>
<li>Salman, A., Mcclements, M. E., Maclaren, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+on+the+regeneration+potential+of+m%C3%BCller+glia+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Insights on the regeneration potential of müller glia in the mammalian retina.</a> Cells. 10 (8), 1957(2021).</li>
<li>Marchesi, N., Fahmideh, F., Boschi, F., Pascale, A., Barbieri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+neurodegenerative+diseases%3A+Interconnection+between+retina+and+cortical+areas%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Ocular neurodegenerative diseases: Interconnection between retina and cortical areas.</a> Cells. 10 (9), 2394(2021).</li>
<li>Enoch, J., Mcdonald, L., Jones, L., Jones, P. R., Crabb, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+whether+sight+is+the+most+valued+sense%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Evaluating whether sight is the most valued sense.</a> JAMA Ophthalmol. 137 (11), 1317-1320 (2019).</li>
<li>Struebing, F. L., Geisert, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+animal+models+can+tell+us+about+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">What animal models can tell us about glaucoma.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 365-380 (2015).</li>
<li>Bouhenni, R. A., Dunmire, J., Sewell, A., Edward, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal models of glaucoma.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 692609(2012).</li>
<li>Wilding, L. A., Uchihashi, M., Bergin, I. L., Nowland, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enucleation+for+treating+rodent+ocular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Enucleation for treating rodent ocular disease.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (3), 328-332 (2015).</li>
<li>Lin, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+inject+ocular+drug+implants+into+mouse+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol to inject ocular drug implants into mouse eyes.</a> STAR Protoc. 3 (1), 101143(2022).</li>
<li>Lozano, D. C., Twa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rat+schematic+eye+from+in+vivo+biometry+and+the+correction+of+lateral+magnification+in+sd-oct+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Development of a rat schematic eye from in vivo biometry and the correction of lateral magnification in sd-oct imaging.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6446-6455 (2013).</li>
<li>Castro, G., Navajas, E., Farah, M. E., Maia, M., Rodrigues, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration%2C+integration%2C+survival%2C+and+differentiation+of+stem+cell-derived+neural+progenitors+in+the+retina+in+a+pharmacological+model+of+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Migration, integration, survival, and differentiation of stem cell-derived neural progenitors in the retina in a pharmacological model of retinal degeneration.</a> ISRN Ophthalmol. 2013, 752161(2013).</li>
<li>Chai, G. R., Liu, S., Yang, H. W., Chen, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+protects+against+diabetic+retinopathy+in+rats+by+inducing+heme+oxygenase-1+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Quercetin protects against diabetic retinopathy in rats by inducing heme oxygenase-1 expression.</a> Neural Regen Res. 16 (7), 1344-1350 (2021).</li>
<li>Igarashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+triple+mutated+aav2-bdnf+gene+therapy+in+a+rat+model+of+transient+iop+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Tyrosine triple mutated aav2-bdnf gene therapy in a rat model of transient iop elevation.</a> Mol Vis. 22, 816-826 (2016).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+efficacy+of+neural+stem+cells+originating+from+umbilical+cord-derived+mesenchymal+stem+cells+in+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Therapeutic efficacy of neural stem cells originating from umbilical cord-derived mesenchymal stem cells in diabetic retinopathy.</a> Sci Rep. 7 (1), 408(2017).</li>
<li>Dorfman, D., Aranda, M. L., Rosenstein, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environment+protects+the+optic+nerve+from+early+diabetes-induced+damage+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Enriched environment protects the optic nerve from early diabetes-induced damage in adult rats.</a> PLoS One. 10 (8), e0136637(2015).</li>
<li>Barber, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+apoptosis+in+the+retina+during+experimental+and+human+diabetes.+Early+onset+and+effect+of+insulin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Neural apoptosis in the retina during experimental and human diabetes. Early onset and effect of insulin.</a> J Clin Invest. 102 (4), 783-791 (1998).</li>
<li>Steinle, J. J., Kern, T. S., Thomas, S. A., Mcfadyen-Ketchum, L. S., Smith, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+basement+membrane+thickness%2C+pericyte+ghosts%2C+and+loss+of+retinal+thickness+and+cells+in+dopamine+beta+hydroxylase+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Increased basement membrane thickness, pericyte ghosts, and loss of retinal thickness and cells in dopamine beta hydroxylase knockout mice.</a> Exp Eye Res. 88 (6), 1014-1019 (2009).</li>
<li>Polley, E. H., Walsh, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+flat+embedding+and+en+face+sectioning+of+the+mammalian+retina+for+autoradiography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Method%22%5BJournal%5D)">A technique for flat embedding and en face sectioning of the mammalian retina for autoradiography.</a> J Neurosci Method. 12 (1), 57-64 (1984).</li>
<li>Turner, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+toluidine+blue-phloxinate+staining+of+glycol+methacrylate+sections+of+retina+and+other+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+Technol%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin toluidine blue-phloxinate staining of glycol methacrylate sections of retina and other tissues.</a> Stain Technol. 55 (4), 229-233 (1980).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+optical+coherence+tomography+and+retinal+histology+in+normal+and+pro23his+retinal+degeneration+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Correlation of optical coherence tomography and retinal histology in normal and pro23his retinal degeneration pig.</a> Transl Vis Sci Technol. 7 (6), 18(2018).</li>
</ol>

```html
<table><tbody><tr><td>Acetone&nbsp;</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>111024800</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Tweezers #5, 11cm, 0.05 x 0.01mm Tips</td><td>World Precision Instruments</td><td>14095</td><td>small, microsurgical forceps</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Mar-Four</td><td>4P.05.2001/L</td><td>Aqueous solution</td></tr><tr><td>Ethyl alcohol 96 %</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>CH.ET.AL.96%CZDA.CH</td><td></td></tr><tr><td>Ethyl alcohol 99.9 %</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>CH.ETYL.ALK.99,9%BW</td><td>Use to prepare 70% and 80% solutions of EtOH</td></tr><tr><td>Glacier - 86 &deg;C Ultralow Temperature Freezer NU-9483E</td><td>NuAire</td><td>13027D0034</td><td>Freezing temperature - 80 &deg;C</td></tr><tr><td>Glass slides</td><td>Mar-Four</td><td>MI.15.01673</td><td>Ground glass slides with a double-sided matte field for description</td></tr><tr><td>Leica CV5030 Fully Automated Glass Coverslipper</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td>14,04,78,80,101</td><td>Automated slide sealer&nbsp;</td></tr><tr><td>Mayer's hematoxylin</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>124687402</td><td></td></tr><tr><td>Metal base molds 15 mm&nbsp; x 15 mm</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td>3803081</td><td></td></tr><tr><td>Microme HM 340 E</td><td>Thermo Scientific</td><td>90-519-0</td><td>Microtome</td></tr><tr><td>Microtome razor blades</td><td>Mar-Four</td><td>HI.N.35</td><td>Cutting angle 35&deg;</td></tr><tr><td>Micro-Twin biopsy cassette</td><td>Mar-Four</td><td>LN.13874550</td><td></td></tr><tr><td>Microwave Hybrid Tissue Processor</td><td>Milestone</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multistainer Leica ST5020</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td></td><td>Automated slide stainer&nbsp;</td></tr><tr><td>NanoZoomer 2.0-HT slide scanner</td><td>Hamamatsu</td><td>C9600</td><td>Histopathological slide scanner</td></tr><tr><td>NDP.view2 Image viewing software</td><td>Hamamatsu</td><td>U12388-01</td><td>Image viewing software</td></tr><tr><td>Paraffin Pathowax Plus</td><td>Mar-Four</td><td>4P.PWP.010</td><td>Melting temperature 56 &deg;C - 58 &deg;C</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>441244-1KG</td><td>Prepare a 4% solution in PBS</td></tr><tr><td>PBS Tablets</td><td>Merck Millipore</td><td>524650-1EA</td><td>Use to prepare a solution of phosphate buffer saline, per manufacturer's instructions</td></tr><tr><td>Pierce Microcentrifuge Tubes, 1.5 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>69715</td><td></td></tr><tr><td>Refrigerator-freezer EN14000AW</td><td>Electrolux</td><td>925032562-00</td><td>refrigeration 4 &deg;C</td></tr><tr><td>Scalpel blade</td><td>Swann-Morton</td><td>T.OST.SKAL00.024</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>427720906</td><td></td></tr><tr><td>SuperCut Spring Scissors, 12.5cm, Curved</td><td>World Precision Instruments</td><td>501925</td><td>curved, small microsurgical scissors</td></tr><tr><td>Tape for automatic sealers</td><td>Mar-Four</td><td>KP-3020/SMRH001</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>CH.KSYL.5l.METAL.OP&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>
```

voorbereiding en analyse van histologische objectglaasjes van de oogbollen van ratten en muizen om het netvlies te evalueren

Preparation and Analysis of Histological Slides of Rat and Mouse Eyeballs to Evaluate the Retina

Voorbereiding en analyse van histologische objectglaasjes van de oogbollen van ratten en muizen om het netvlies te evalueren

A rodent eyeball is a powerful tool for researching the pathomechanisms of many ophthalmic diseases, such as glaucoma, hypertensive retinopathy, and many ...

preparation-analysis-histological-slides-rat-mouse-eyeballs-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Het hier beschreven protocol is voor structurele beoordeling van een wholemount retinale preparatie. Dit omvat beschrijvingen van weefseldissecatie, montage op een hydrofiliseerde polytetrafluorethyleen (PTFE) membraaninzet, bolusbelasting met fluorescente markeringen, en een vergelijking van fixatie met carbodiimide en paraformaldehyde voor immunohistochemische analyse van cellulaire en synaptische componenten.

Geoptimaliseerd protocol voor Retina Wholemount Voorbereiding voor Imaging en Immunohistochemistry

Het knaagdier netvlies is lang erkend als een toegankelijke venster naar de hersenen. In dit technisch document bieden we een protocol dat het muismodel van zuurstof geïnduceerde retinopathie van de mechanismen die leiden tot het falen van vasculaire regeneratie binnen het centrale zenuwstelsel na ischemische schade te bestuderen in dienst heeft. Het beschreven systeem kan ook worden ingezet om strategieën te ontwikkelen om hergroei van functionele bloedvaten te bevorderen binnen het netvlies...

Beoordeling van de Vasculaire Regeneratie in het CZS met de muis Retina

We tonen drie verschillende weefsel voorbereiding technieken voor immunohistochemische visualisatie van rat retinale microvasculaire pericytes, dat wil zeggen, cryo-secties, geheel-mounts en hypotone isolatie van de vasculaire netwerk.

Netvlies Cryo-secties, geheel-Mounts en hypotone geïsoleerde therapieën voorbereidingen voor immunohistochemische visualisatie van microvasculaire Pericytes

Dit rapport beschrijft uitgebreide methoden voor de voorbereiding van bevroren muis Retina secties voor Immunohistochemistry (IHC).  Beschreven methoden omvatten dissectie van de oculaire posterior Cup, Paraformaldehyde fixatie, inbedding in optimale snij-temperatuur (OCT) media en weefsel oriëntatie, sectioneren en immunokleuring.

Voorbereiding van de muis netvlies Cryo-profielen voor Immunohistochemistry

Diabetische retinopathie is een van de belangrijkste oorzaken van blindheid. Histologie, bloed-retinale barrièreafbraaktest en fluorescentieangiografie zijn waardevolle technieken om de pathofysiologie van het netvlies te begrijpen, wat de efficiënte screening van geneesmiddelen tegen diabetische retinopathie verder zou kunnen verbeteren.

Retinale pathofysiologische evaluatie in een rattenmodel

Het doel van dit protocol is het karakteriseren van een nieuw model van glaucoomneurodegeneratie op basis van 360° thermische cauterisatie van de limbale vasculaire plexus, die subacute oculaire hypertensie induceert.

Volledige cirkel Cauterisatie van limbale vasculaire plexus voor chirurgisch geïnduceerd glaucoom bij knaagdieren

Dit artikel presenteert een protocol voor oculaire microdissectie bij knaagdieren. Het proces omvat de enucleatie van de oogbol samen met het nictitating membraan (d.w.z. het derde ooglid). Dit wordt dan gevolgd door de scheiding van de achterste en voorste oogschelpen.

Microdissectie van het knaagdieroog

Muismodellen kunnen nuttige hulpmiddelen zijn voor het onderzoeken van de biologie van het retinale gepigmenteerde epitheel (RPE). Er is vastgesteld dat muizen een reeks RPE-pathologieën kunnen ontwikkelen. Hier beschrijven we een fenotyperingsprotocol om RPE-pathologieën bij muizen op te helderen en te kwantificeren met behulp van licht, transmissie-elektron en confocale microscopie.

Een protocol voor het evalueren en kwantificeren van retinale gepigmenteerde epitheelpathologieën in muismodellen van leeftijdsgebonden maculaire degeneratie

Er wordt een protocol beschreven voor het voorbereiden van retinale cryosecties van muizen en het uitvoeren van immunokleuring op fotoreceptoren. Dit artikel stelt onderzoekers in staat om consequent bevroren secties van het netvlies van muizen te produceren met goed bewaarde morfologie en hoogwaardige immunokleuringsresultaten.

Cryosectie en immunokleuring van het netvlies van de muis

B7-H1 (PD-L1) en de binding aan PD-1 een grote tumor geïnduceerde immunosuppressieve signaal in de tumor micro-omgeving. Een immunohistochemische kleuring techniek om de expressie en lokalisatie van B7-H1 in pancreas adenocarcinoom karakteriseren wordt hier beschreven.

Immunohistochemische kleuring van B7-H1 (PD-L1) op paraffine ingebedde Slides van Pancreatic Darmkanker Tissue

Leer een stap-voor-stap protocol voor histologische preparatie van netvliesweefsels bij knaagdieren. Deze methode maakt gedetailleerde celbeoordeling mogelijk met minder artefacten dan andere technieken.

Voorbereiding en analyse van histologische objectglaasjes van de oogbollen van ratten en muizen om het netvlies te evalueren

Meer video's verkennen