Name: Toegang tot vroege differentiatie van virusspecifieke folliculaire helper CD4+ T-cel in acute LCMV-geïnfecteerde muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 3 s
Description: Leer hoe u de vroege differentiatie van virusspecifieke folliculaire helper CD4+ T-cellen bestudeert in acute LCMV-geïnfecteerde muizen. Deze methode omvat flowcytometrie en retrovirale genmanipulatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd ondersteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (nr. 32300785 tot X.C.), het China National Postdoctoral Program for Innovative Talents (nr. BX20230449 aan X.C.), en het National Science and Technology Major Project (nr. 2021YFC2300602 aan L.Y.).

Het ontcijferen van vroege folliculaire helper T-celbinding bij acute LCMV-infectie

<ol><li>O'shea, J. J., Paul, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+lineage+commitment+and+plasticity+of+helper+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying lineage commitment and plasticity of helper CD4+ T cells.</a> Science. 327 (5969), 1098-1102 (2010).</li>
<li>Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+follicular+helper+cell+biology%3A+A+decade+of+discovery+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">T follicular helper cell biology: A decade of discovery and diseases.</a> Immunity. 50 (5), 1132-1148 (2019).</li>
<li>Vinuesa, C. G., Linterman, M. A., Yu, D., Maclennan, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+helper+t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Follicular helper t cells.</a> Annu Rev Immunol. 34, 335-368 (2016).</li>
<li>Choi, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ICOS+receptor+instructs+T+follicular+helper+cell+versus+effector+cell+differentiation+via+induction+of+the+transcriptional+repressor+bcl6%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">ICOS receptor instructs T follicular helper cell versus effector cell differentiation via induction of the transcriptional repressor bcl6.</a> Immunity. 34 (6), 932-946 (2011).</li>
<li>Choi, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bcl6+expressing+follicular+helper+CD4+T+cells+are+fate+committed+early+and+have+the+capacity+to+form+memory%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Bcl6 expressing follicular helper CD4 T cells are fate committed early and have the capacity to form memory.</a> J Immunol. 190 (8), 4014-4026 (2013).</li>
<li>Johnston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bcl6+and+BLIMP-1+are+reciprocal+and+antagonistic+regulators+of+T+follicular+helper+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Bcl6 and BLIMP-1 are reciprocal and antagonistic regulators of T follicular helper cell differentiation.</a> Science. 325 (5943), 1006-1010 (2009).</li>
<li>Nurieva, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bcl6+mediates+the+development+of+T+follicular+helper+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Bcl6 mediates the development of T follicular helper cells.</a> Science. 325 (5943), 1001-1005 (2009).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcriptional+repressor+bcl-6+directs+T+follicular+helper+cell+lineage+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The transcriptional repressor bcl-6 directs T follicular helper cell lineage commitment.</a> Immunity. 31 (3), 457-468 (2009).</li>
<li>Choi, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LEF1+and+TCF1+orchestrate+T%28FH%29+differentiation+by+regulating+differentiation+circuits+upstream+of+the+transcriptional+repressor+bcl6%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">LEF1 and TCF1 orchestrate T(FH) differentiation by regulating differentiation circuits upstream of the transcriptional repressor bcl6.</a> Nat Immunol. 16 (9), 980-990 (2015).</li>
<li>Wu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TCF1+is+required+for+the+t+follicular+helper+cell+response+to+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">TCF1 is required for the t follicular helper cell response to viral infection.</a> Cell Rep. 12 (12), 2099-2110 (2015).</li>
<li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+TCF-1+initiates+the+differentiation+of+T%28FH%29+cells+during+acute+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The transcription factor TCF-1 initiates the differentiation of T(FH) cells during acute viral infection.</a> Nat Immunol. 16 (9), 991-999 (2015).</li>
<li>Oestreich, K. J., Mohn, S. E., Weinmann, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+that+control+the+expression+and+activity+of+bcl-6+in+th1+cells+to+regulate+flexibility+with+a+TFH-like+gene+profile%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms that control the expression and activity of bcl-6 in th1 cells to regulate flexibility with a TFH-like gene profile.</a> Nat Immunol. 13 (4), 405-411 (2012).</li>
<li>Choi, Y. S., Eto, D., Yang, J. A., Lao, C., Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+STAT1+is+required+for+IL-6-mediated+bcl6+induction+for+early+follicular+helper+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: STAT1 is required for IL-6-mediated bcl6 induction for early follicular helper cell differentiation.</a> J Immunol. 190 (7), 3049-3053 (2013).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histone+methyltransferase+ezh2+primes+the+early+differentiation+of+follicular+helper+T+cells+during+acute+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">The histone methyltransferase ezh2 primes the early differentiation of follicular helper T cells during acute viral infection.</a> Cell Mol Immunol. 17 (3), 247-260 (2020).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ezh2+programs+T%28FH%29+differentiation+by+integrating+phosphorylation-dependent+activation+of+bcl6+and+polycomb-dependent+repression+of+p19ARF%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Ezh2 programs T(FH) differentiation by integrating phosphorylation-dependent activation of bcl6 and polycomb-dependent repression of p19ARF.</a> Nat Commun. 9 (1), 5452(2018).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((METTL3-dependent+m%286%29A+modification+programs+T+follicular+helper+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">METTL3-dependent m(6)A modification programs T follicular helper cell differentiation.</a> Nat Commun. 12 (1), 1333(2021).</li>
<li>Johnston, R. J., Choi, Y. S., Diamond, J., Yang, J. A., Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT5+is+a+potent+negative+regulator+of+TFH+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">STAT5 is a potent negative regulator of TFH cell differentiation.</a> J Exp Med. 209 (2), 243-250 (2012).</li>
<li>Lee, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+KLF2+restrains+CD4%2B+T+follicular+helper+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The transcription factor KLF2 restrains CD4+ T follicular helper cell differentiation.</a> Immunity. 42 (2), 252-264 (2015).</li>
<li>Xiao, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+e3+ubiquitin+ligase+itch+is+required+for+the+differentiation+of+follicular+helper+t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The e3 ubiquitin ligase itch is required for the differentiation of follicular helper t cells.</a> Nat Immunol. 15 (7), 657-666 (2014).</li>
<li>Baumjohann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microRNA+cluster+mir-17%7E92+promotes+TFH+cell+differentiation+and+represses+subset-inappropriate+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The microRNA cluster mir-17~92 promotes TFH cell differentiation and represses subset-inappropriate gene expression.</a> Nat Immunol. 14 (8), 840-848 (2013).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinase+complex+mTORC2+promotes+the+longevity+of+virus-specific+memory+CD4%28%2B%29+T+cells+by+preventing+ferroptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The kinase complex mTORC2 promotes the longevity of virus-specific memory CD4(+) T cells by preventing ferroptosis.</a> Nat Immunol. 23 (2), 303-317 (2022).</li>
<li>Hale, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+memory+CD4%2B+T+cells+with+commitment+to+T+follicular+helper-+and+T+helper+1-cell+lineages+are+generated+after+acute+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Distinct memory CD4+ T cells with commitment to T follicular helper- and T helper 1-cell lineages are generated after acute viral infection.</a> Immunity. 38 (4), 805-817 (2013).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selenium-GPX4+axis+protects+follicular+helper+t+cells+from+ferroptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selenium-GPX4 axis protects follicular helper t cells from ferroptosis.</a> Nat Immunol. 22 (9), 1127-1139 (2021).</li>
<li>Oxenius, A., Bachmann, M. F., Zinkernagel, R. M., Hengartner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus-specific+MHC-class+II-restricted+TCR-transgenic+mice%3A+Effects+on+humoral+and+cellular+immune+responses+after+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Virus-specific MHC-class II-restricted TCR-transgenic mice: Effects on humoral and cellular immune responses after viral infection.</a> Eur J Immunol. 28 (1), 390-400 (1998).</li>
<li>Grosjean, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+enrichment+of+mouse+splenic+t+cells+for+ex+vivo+and+in+vivo+T+cell+receptor+stimulation+assays%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and enrichment of mouse splenic t cells for ex vivo and in vivo T cell receptor stimulation assays.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100961(2021).</li>
<li>Dowling, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+the+bottom-up+proteomic+analysis+of+mouse+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for the bottom-up proteomic analysis of mouse spleen.</a> STAR Protoc. 1 (3), 100196(2020).</li>
<li>Choi, Y. S., Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroviral+vector+expression+in+TCR+transgenic+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Retroviral vector expression in TCR transgenic CD4+ T cells.</a> Methods Mol Biol. 1291, 49-61 (2015).</li>
<li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+expansion+and+retroviral+transduction+of+mouse+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">A method for expansion and retroviral transduction of mouse regulatory T cells.</a> J Immunol Methods. 488, 112931(2021).</li>
<li>He, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+CXCR5-+expressing+CD8%28%2B%29+T+cells+curtail+chronic+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Follicular CXCR5- expressing CD8(+) T cells curtail chronic viral infection.</a> Nature. 537 (7620), 412-428 (2016).</li>
<li>Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+helper+CD4+T+cells+%28TFH%29%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Follicular helper CD4 T cells (TFH).</a> Annu Rev Immunol. 29, 621-663 (2011).</li>
<li>Breitfeld, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+B+helper+T+cells+express+CXC+chemokine+receptor+5%2C+localize+to+B+cell+follicles%2C+and+support+immunoglobulin+production%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Follicular B helper T cells express CXC chemokine receptor 5, localize to B cell follicles, and support immunoglobulin production.</a> J Exp Med. 192 (11), 1545-1552 (2000).</li>
<li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinase+mTORC1+promotes+the+generation+and+suppressive+function+of+follicular+regulatory+t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The kinase mTORC1 promotes the generation and suppressive function of follicular regulatory t cells.</a> Immunity. 47 (3), 538-551 (2017).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phosphatase+pten+links+platelets+with+immune+regulatory+functions+of+mouse+T+follicular+helper+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The phosphatase pten links platelets with immune regulatory functions of mouse T follicular helper cells.</a> Nat Commun. 13 (1), 2762(2022).</li>
<li>Chen, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+identification+of+T%28fh%2913+cells+in+mouse+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric identification of T(fh)13 cells in mouse and human.</a> J Allergy Clin Immunol. 147 (2), 470-483 (2021).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat er geen tegenstrijdige belangen zijn.

Het onderzoek op het gebied van TFH-cellen is benadrukt sinds de ontdekking van de gespecialiseerde functie van TFH-cellen bij het helpen van B-cellen. Cumulatieve studies gaven aan dat TFH-celdifferentiatie een meerfasig en multifactorieel proces is30, waarbij de lotsverbintenis van TFH-cellen in het vroege stadium5 wordt bepaald. Daarom is een beter begrip van de mechanismen die ten grondslag liggen aan vroeg gedifferentieerde TFH-cellen cruciaal voor de biologie van TFH-cellen en een rationeel ontwerp van vaccins. Hierin hebben we methoden aangereikt om toegang te krijgen tot de vroege lotsverbintenis van virusspecifieke TFH-cellen en om genexpressie in vroeg gedifferentieerde TFH-cellen te manipuleren door gebruik te maken van het LCMV Armstrong-virale infectiemodel, TCR-transgene SM-muis en retrovirus-gemedieerde transductie.
De chemokinereceptor CXCR5 is een belangrijke oppervlaktemarker die TFH-cellen onderscheidt van andere CD4+ TH-celsubsets 6,7,8,31, waardoor de CXCR5-kleuringsmethode van hoge specificiteit en gevoeligheid in T-FH-celonderzoek nodig is. In de studie werd een driestaps streptavidine-biotine CXCR5-kleuringsmethode gedemonstreerd bij het identificeren van de TFH-celsubset (Figuur 1C). Hoewel verlies van specificiteit een plakkerig probleem is voor twee- of drie-streptokokken antilichaamkleuringsbenaderingen met hoge gevoeligheid, bleek dat het fluorescentiesignaal door driestaps CXCR5-antilichaamkleuring bijna volledig overlapte met het GFP-signaal in CXCR5-GFP29 reporter SM CD4+ T-cellen op dag 3 na infectie (Figuur 1D), wat suggereert dat zowel specificiteit als sensitiviteit worden bereikt door de driestaps CXCR5-antilichaamkleuringsmethode. Inderdaad, deze drie-streptokokken CXCR5-kleuringsstrategie is beproefd en vertrouwd en heeft de onderzoekers geholpen om TFH-celbiologie 11,14,15,21 beter te onderzoeken, evenals andere CXCR5-expressieve T-celtypen 29,32.
Bij infectie en immunisatie wordt de lotsverbintenis van TFH-cellen over het algemeen gemodelleerd door een gespleten differentiatie van naïeve CD4+ T-cellen in TFH-cellen of niet-TFH-effector T-H-cellen 2,3,30. Deze studie toonde de evenwichtige bifurcatie van TFH- en TH1-cellen in overgedragen SM CD4+ T-cellen. Bovendien zijn deze overgedragen SM CD4+ T-cellen van voldoende celhoeveelheid in de vroege infectiefase, waardoor ze fungeren als een geschikt model voor het bestuderen van TFH-celdifferentiatie. Zeker, retrovirus-gemedieerde ectopische Bcl-6-expressie in overgedragen SM CD4+ T-cellen was sterk bevooroordeeld in de richting van TFH-celdifferentiatie in vergelijking met die in controle-SM CD4+ T-cellen (86,6% vs. 53,8%) (Figuur 3C), wat in lijn is met eerder rapport6 en verder de nauwkeurigheid van de protocollen die in de studie worden beschreven, bewijst. Als alternatief kunnen de bovengenoemde protocollen ook worden toegepast op retrovirus-gemedieerde knock-down van geïnteresseerde genen (bijv. bcl6, Tcf7) in vroeg geactiveerde SM CD4+ T-cellen11 (gegevens niet getoond).
Een beperking in het protocol is het timingprobleem (meer dan 2 uur in totaal) en het meerstappenproces van de driestaps CXCR5-kleuringsmethode. Als alternatief werden één-stap18,33 of tweestaps 4,9,34 CXCR5-kleuringsmethoden ook toegepast in TFH-celonderzoek. Een vergelijking van de specificiteit/gevoeligheid van deze CXCR5-kleuringsmethoden is gerechtvaardigd.
Samenvattend bood de huidige studie protocollen om toegang te krijgen tot vroeg gedifferentieerde virusspecifieke TFH-cellen en om geïnteresseerde genen te onderzoeken die mogelijk de differentiatie van TFH-cellen reguleren. Deze protocollen zullen het onderzoek naar de vroege inzet van het lot van TFH-cellen voeden.

Naïeve CD4+ T-cellen komen verschillende ziekteverwekkers of bedreigingen tegen en passen hun immuunresponsen aan door te differentiëren in verschillende helper T (TH) celsubsets met gespecialiseerde functies1. In het scenario van acute virale infectie differentieert een groot deel van de naïeve CD4+ T-cellen tot folliculaire helper T (TFH) -cellen die hulp bieden aan B-cellen 2,3. In tegenstelling tot andere CD4+ TH-celsubsets (bijv. TH1, TH2, TH9 en TH17-cellen), brengen TFH-cellen een aanzienlijk niveau van CXCR5 tot expressie, de chemokinereceptor voor de B-cel homing chemokine CXCL13, waardoor TFH-cellen kunnen migreren naar B-celfollikels. In de B-celfollikels helpen TFH-cellen verwante B-cellen bij het initiëren en onderhouden van kiemcentrumreacties, waardoor een snelle productie van antilichamen met hoge affiniteit en humoraal geheugen op lange termijn mogelijk wordt 2,3.
Bij acute virale infectie vindt de vroege lotsverbintenis van virusspecifieke TFH-cellen plaats binnen 72 uur 4,5 en wordt gecontroleerd door de transcriptionele repressor B-cellymfoom-6 (Bcl-6)5,6,7,8, die fungeert als de "hoofdregulator" die de lotsbeslissingen van TFH-cellen regelt. Deficiëntie van Bcl-6 verzwakt de differentiatie van TFH-cellen ernstig, terwijl ectopische expressie van Bcl-6 de lotsverbintenis van TFH-cellen aanzienlijk bevordert. Naast Bcl-6 zijn meerdere moleculen betrokken bij het instrueren van vroege lotsverbintenis van TFH-cellen. Transcriptiefactoren TCF-1 en LEF-1 initiëren TFH-celdifferentiatie via de inductie van Bcl-6 9,10,11. De remming van Blimp1, door zowel Bcl-6 als TCF-1, is vereist voor een vroege lotsverbintenis van TFH-cellen 11,12. STAT1 en STAT3 zijn ook nodig voor vroege TFH-celdifferentiatie 13. Bovendien helpen epigenetische modificaties door histonmethyltransferase EZH214,15 en m6A-methyltransferase METTL316 om transcriptieprogramma's van TFH-cellen (vooral Bcl6 en Tcf7) te stabiliseren en zo de vroege lotsverbintenis van TFH-cellen te stimuleren. Hoewel er vooruitgang is geboekt, waaronder de bovengenoemde moleculen en andere, die elders zijn samengevat3, in het begrijpen van de transcriptionele en epigenetische regulaties van vroege lotsverbintenis van TFH-cellen, moeten voorheen onbekende moleculen nog worden geleerd.
In het muismodel van acute lymfatische choriomeningitis virus (LCMV) -infectie, ondergaan adoptief overgedragen congene TCR-transgene SMARTA (SM) CD4+ T-cellen, die specifiek het LCMV-glycoproteïne-epitoop I-AbGP66-77 herkennen, ofwel TFH- of TH1-celdifferentiatie tijdens virale infectie. Dit TFH/TH 1bifurcatiedifferentiatiepatroon ondersteunt de vooruitgang van het SM/acute LCMV-infectiemodel bij het bestuderen van de biologie van virusspecifieke TFH-cellen. Het SM/acute LCMV-infectiemodel is inderdaad op grote schaal gebruikt in het onderzoeksveld van TFH-cellen en heeft een cruciale rol gespeeld bij baanbrekende ontdekkingen in de biologie van TFH-cellen. Dit omvat de identificatie van het eerder genoemde Bcl-6 als de afstammingsbepalende transcriptiefactor van TFH-cellen 5,6, evenals andere belangrijke transcriptionele factoren (bijv. Blimp-16, TCF-1/LEF 9,10,11, STAT1/STAT313, STAT517, KLF218 en Itch19) die de differentiatie van TFH-cellen, posttranscriptionele regelgeving ( bijv. METTL316 en miR-17~9220) van T FH-celdifferentiatie, TFH-celgeheugen en plasticiteit21,22, en rationele vaccinatiestrategieën gericht op TFH-cellen (bijv. selenium23).
De huidige studie beschrijft reproduceerbare methoden om toegang te krijgen tot de vroege lotsverbintenis van virusspecifieke TFH-cellen , waaronder (1) het opzetten van een acuut LCMV-geïnfecteerd SM-chimaera-muismodel dat geschikt is voor toegang tot vroeg gedifferentieerde TFH-cellen , (2) het uitvoeren van flowcytometriekleuringen van moleculen die verband houden met vroeg gedifferentieerde TFH-cellen , en (3) het uitvoeren van retrovirale vectorgebaseerde genmanipulatie in SM CD4+ T-cellen. Deze methoden zullen nuttig zijn voor studies die de vroege lotsverbintenis van virusspecifieke TFH-cellen onderzoeken.

```html
<table><tbody><tr><td>0.25% Trypsin-EDTA</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyde Fix Solution, 4% PFA</td><td>Beyotime</td><td>P0099-500mL</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu;m cell strainer</td><td>Merck</td><td>CLS431751</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-mouse TCR V&alpha;2 (clone B20.1)</td><td>Biolegend</td><td>127812</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 700 anti-mouse CD45.1 (clone A20)</td><td>Biolegend</td><td>110724</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>APC anti-mouse CD25 (clone PC61)</td><td>Biolegend</td><td>101910</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>B6 CD45.1 (B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ) muis</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>002014</td><td></td></tr><tr><td>BeaverBeads Streptavidin</td><td>Beaver</td><td>22321-10</td><td></td></tr><tr><td>Biotin anti-mouse F4/80 Antibody (clone BM8)</td><td>Biolegend</td><td>123106</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>Biotin Rat anti-mouse CD11c (clone N418)</td><td>Biolegend</td><td>117304</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>Biotin Rat anti-Mouse CD19 (clone 6D5)</td><td>Biolegend</td><td>115504</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>Biotin Rat anti-Mouse CD8a (clone 53-6.7)</td><td>Biolegend</td><td>100704</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>Biotin Rat anti-mouse NK-1.1 (clone PK136)</td><td>Biolegend</td><td>108704</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>Biotin Rat anti-mouse TER-119/Erythroid Cells (clone TER-119)</td><td>Biolegend</td><td>116204</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>bovine serum albumin, BSA</td><td>Sigma</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-T-bet (clone 4B10)</td><td>Biolegend</td><td>644816</td><td>1:100 verdunning</td></tr><tr><td>Brilliant Violet 605 anti-mouse CD279 (PD-1) (clone 29F.1A12)</td><td>Biolegend</td><td>135220</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>C57BL/6J (B6) muis</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-GFP knock-in reporter muis</td><td></td><td></td><td>In house; the CXCR5-GFP knock-in muis line was generated by the insertion of an IRES-GFP construct after the open reading frame of Cxcr5.</td></tr><tr><td>DMEM 10% medium</td><td></td><td></td><td>DMEM medium containing 10% FBS</td></tr><tr><td>DMEM medium</td><td>Gibco</td><td>11885092</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>FACSFortesa</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum, FBS</td><td>Sigma</td><td>F8318</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo (version 10.4.0)</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td><td>Invitrogen</td><td>00-5523-00</td><td>The kit contains three reagents: a. Fixation/Permeabilization Concentrate (4X); b. Fixation / Permeabilization Diluent; c. Permeabilization Buffer.</td></tr><tr><td>Goat Anti-Rat IgG Antibody (H+L), Biotinylated</td><td>Vector laboratories</td><td>BA-9400-1.5</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>Invitrogen EVOS FL Auto Cell Imaging System</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isolation buffer</td><td></td><td></td><td>FACS buffer containing 0.5% BSA and 2mM EDTA</td></tr><tr><td>LCMV GP61-77 peptide (GLKGPDIYKGVYQFKSV)</td><td>Chinese Peptide Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit, for 633 or 635 nm excitation</td><td>Life Technologies</td><td>L10199</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>MigR1</td><td>addgene</td><td>#27490</td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td>Sigma</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM medium</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>pCL-Eco</td><td>addgene</td><td>#12371</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-mouse CD69 (clone H1.2F3)</td><td>Biolegend</td><td>104508</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>PE Mouse anti-Bcl-6 (clone K112-91)</td><td>BD Biosciences</td><td>561522</td><td>1:50 verdunning</td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline, PBS</td><td>Gibco</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Solarbio</td><td>H8761</td><td></td></tr><tr><td>Purified Rat Anti-Mouse CXCR5 (clone 2G8)</td><td>BD Biosciences</td><td>551961</td><td>1:50 verdunning</td></tr><tr><td>Rat monoclonal PerCP anti-mouse CD4 (clone RM4-5)</td><td>Biolegend</td><td>100538</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>recombinant murine IL-2</td><td>Gibco</td><td>212-12-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td><td>Beyotime</td><td>C3702-500mL</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium</td><td>Sigma</td><td>R8758</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 2%</td><td></td><td></td><td>RPMI 1640 medium containing 2% FBS</td></tr><tr><td>SMARTA (SM) TCR transgen muis</td><td></td><td></td><td>SM TCR transgen line in our lab is a gift from Dr. Rafi Ahmed (Emory University). Additionally, this muis line can also be obtained from The Jackson Laboratory (stain#: 030450).</td></tr><tr><td>Staining buffer</td><td></td><td></td><td>PBS containing 2% FBS and 0.01% NaN3</td></tr><tr><td>Streptavidin PE-Cyanine7</td><td>eBioscience</td><td>25-4317-82</td><td>1:200 verdunning</td></tr><tr><td>TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb (Alexa Fluor 488 Conjugate)</td><td>Cell signaling technology</td><td>6444S</td><td>1:400 verdunning</td></tr><tr><td>TFH cell staining buffer</td><td></td><td></td><td>FACS buffer containing 1% BSA and 2% muis serum</td></tr><tr><td>TransIT-293 reagent</td><td>Mirus Bio</td><td>MIRUMIR2700</td><td></td></tr></tbody></table>
```

toegang tot vroege differentiatie van virusspecifieke folliculaire helper cd4+ t-cel in acute lcmv-geïnfecteerde muizen

Accessing Early Differentiation of Virus-Specific Follicular Helper CD4+ T Cell in Acute LCMV-Infected Mice

Folliculaire Helper T (TFH)-cellen worden gezien als een onafhankelijke CD4+ T-cellijn die verwante B-cellen helpt bij het produceren van antilichamen met hoge affiniteit, waardoor langdurige humorale immuniteit tot stand wordt gebracht. Tijdens acute virale infectie wordt de lotsverbintenis van virusspecifieke TFH-cellen bepaald in de vroege infectiefase, en onderzoeken naar de vroeg gedifferentieerde TFH-cellen zijn cruciaal om T-celafhankelijke humorale immuniteit te begrijpen en het vaccinontwerp te optimaliseren. In de studie, met behulp van een muismodel van acute lymfatische choriomeningitis virus (LCMV) infectie en de TCR-transgene SMARTA (SM) muis met CD4+ T-cellen die specifiek LCMV-glycoproteïne-epitoop I-AbGP66-77 herkennen, hebben we procedures beschreven om toegang te krijgen tot de vroege lotsverbintenis van virusspecifieke TFH-cellen op basis van flowcytometriekleuringen. Bovendien worden, door gebruik te maken van retrovirale transductie van SM CD4+ T-cellen, ook methoden geboden om genexpressie in vroeg gedifferentieerde virusspecifieke TFH-cellen te manipuleren. Daarom zullen deze methoden helpen bij studies die de mechanismen onderzoeken die ten grondslag liggen aan de vroege binding van virusspecifieke TFH-cellen .

Kenmerken van vroeg gedifferentieerde virusspecifieke TFH-cellen tijdens acute LCMV-infectie Om de vroege lotsverbintenis van virusspecifieke TFH-cellen te onderzoeken, werden naïeve congene SM CD4+ T-cellen die specifiek LCMV GP-epitoop I-AbGP66-77 herkennen, adoptief overgebracht naar CD45.2+ C57BL/6-ontvangers. De volgende dag werden deze ontvangers intraveneus geïnfecteerd met een hoge dosering van de acuut verdwenen LCMV Armstrong (Figuur 1A). Op dag 3 na infectie werden splenocyten van C57BL/6-ontvangers geanalyseerd door middel van flowcytometrie, en de resultaten wezen op een grote hoeveelheid overgedragen CD45.1+ SM CD4+ T-cellen (~10% van het totale aantal CD4+ T-cellen) (Figuur 1B), die voldoende virusspecifieke CD4+ T-cellen opleverden voor verder onderzoek. Verdere analyses van overgedragen SM CD4+ T-cellen toonden co-expressie van CXCR5 en Bcl-6/TCF-1 en wederzijdse expressie van CXCR5 en CD25/T-bet, waardoor TFH (CXCR5+Bcl-6+ of CXCR5+TCF-1+) en TH1 (CXCR5-CD25+ of CXCR5-T-bet+) afstammingslijnen werden gedefinieerd (Figuur 1C). Om de specificiteit en gevoeligheid van CXCR5-antilichaamkleuring in de studie te evalueren, hebben we de eerder genoemde CD45.1+ SM-muislijn verder gekruist met de CXCR5-GFP knock-in muislijn, die werd gegenereerd door de invoeging van een IRES-GFP-construct na het open leesframe van Cxcr529. Vervolgens werden CD45.1+ CXCR5-GFP reporter SM-cellen overgebracht naar C57BL/6-ontvangers. Deze ontvangers waren geïnfecteerd met LCMV Armstrong en hun splenocyten werden geanalyseerd op dag 3 na infectie. Inderdaad, het fluorescentiesignaal door de CXCR5-antilichaamkleuringsmethode in de studie overlapte fijn met het GFP-signaal in overgedragen CXCR5-GFP-reporter29 SM CD4+ T-cellen op dag 3 na infectie (Figuur 1D), wat wijst op de hoge specificiteit van de driestaps CXCR5-antilichaamkleuringsmethode.
Op retrovirus gebaseerde overexpressie van Bcl-6 in SM CD4+ T-cellen Bcl-6 is een van de belangrijkste moleculen bij het bevorderen van T FH-celdifferentiatie 6,7,8. Om de betrouwbaarheid van het huidige protocol bij het verkrijgen van toegang tot vroeg gedifferentieerde TFH-cellen vast te stellen, werden CD45.1+ SM CD4+ T-cellen in vivo geactiveerd en getransduceerd met retrovirussupernatans van MigR1-plasmide- of MigR1-Bcl6-overexpressie plasmide-getransfecteerde 293T-cellen (Figuur 2 en Figuur 3A). Retrovirus-getransduceerde SM CD4+ T-cellen werden vervolgens adoptief overgebracht naar C57BL/6-ontvangers, die vervolgens werden geïnfecteerd met LCMV Armstrong (Figuur 3B). Op dag 3 na infectie vonden we een evenwichtige bifurcatie van TFH- en TH1-cellen in MigR1-SM CD4+ T-cellen, terwijl een overheersende TFH-celgerichte differentiatie in MigR1-Bcl6-SM CD4+ T-cellen (Figuur 3C). Consequent was het Bcl-6-expressieniveau verbeterd in MigR1-Bcl6-SM CD4+ T-cellen in vergelijking met dat in MigR1-SM CD4+ T-cellen (Figuur 3D). Daarom werd het fenotype dat ectopische Bcl-6 expressie-gedreven TFH-celdifferentiatie 6 fijn gereproduceerd volgens het huidige protocol.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66752/66752fig01.jpg"> Figuur 1: Flowcytometrie-analyses van vroege lotsverbintenis van SM TFH-cellen tijdens LCMV Armstrong-infectie. (A) Experimenteel ontwerp. Milt CD4+ T-cellen werden geoogst van CD45.1+ SM-muizen en vervolgens adoptief overgebracht naar C57BL/6-ontvangers (CD45.2+). De volgende dag waren deze ontvangers besmet met LCMV Armstrong. Op dag 3 na infectie werden overgedragen CD45.1+ SM-cellen uit de milt van ontvangers geanalyseerd door middel van flowcytometrie. (B) Representatieve flowcytometriegegevens die de gatingstrategie aantonen van overgedragen CD45.1+ SM CD4+ T-cellen uit de milt van ontvangers op dag 3 - na LCMV Armstrong-infectie. (C) Representatieve flowcytometriegegevens die co-kleuringen van CXCR5 en andere T FH-cel-geassocieerde moleculen (Bcl-6, TCF-1, CD25 en T-bet) aantonen in overgedragen CD45.1+ SM-cellen uit de milt van ontvangers op dag 3 na LCMV Armstrong-infectie. (D) Representatieve flowcytometriegegevens die co-kleuringen van fluorescentie-geconjugeerd antilichaam tegen CXCR5- en GFP-signaal aantonen in overgedragen CD45.1+ CXCR5-GFP-reporter SM-cellen van de milten van ontvangers op dag 3 - na LCMV Armstrong-infectie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66752/66752fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66752/66752fig02.jpg"> Figuur 2: Retrovirale transductie in SM CD4+ T-cellen. (A) Schematisch diagram van retrovirusproductie en retrovirale transductie in SM CD4+ T-cellen. Voor de productie van retrovirussen werden 293T-cellen gezaaid in een plaat met 6 putjes getransfecteerd met doel-DNA-plasmiden wanneer de celdichtheid ≥80% samenvloeiing bereikt. Vervolgens werd 72 uur na transfectie een supernatans voor celculturen met retrovirussen verzameld en onmiddellijk gebruikt of opgeslagen bij -80 °C. Voor retrovirale transductie in SM CD4+ T-cellen werd een CD45.1+ SM-muis intraveneus geïnjecteerd met 200 μg LCMV GP61-77 peptide. Vervolgens werd de milt 16-18 uur na peptide-injectie ontleed van SM-muis en werd de activeringsstatus van milt CD4+ T-cellen gedetecteerd. Geactiveerde SM CD4+ T-cellen werden getransduceerd met kweeksupernatans dat retrovirussen bevatte en gedurende 48 uur in vitro gekweekt voordat de transductie-efficiëntie werd bereikt. (B) Fluorescentiemicroscopie beeldvorming van GFP in plasmide DNA-getransfecteerde 293T cellen. Schaalbalk: 400 μm. (C) Flowcytometrieanalyse van CD25- en CD69-expressieniveaus in milt-naïeve CD4+ T-cellen van naïeve muis (naïef, links) of milt SM CD4+ T-cellen van LCMV GP61-77 peptide-geïnjecteerde SM-muis (geactiveerd, rechts). (D) Flowcytometrieanalyse van GFP-expressie in retrovirus-getransduceerde SM CD4+ T-cellen (getransduceerd, links) of retrovirus-niet-getransduceerde SM CD4+ T-cellen (niet-getransduceerd, links). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66752/66752fig02large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66752/66752fig03.jpg"> Figuur 3: Effecten van Bcl-6 overexpressie in SM TFH cel lot commitment. (A) Lineaire kaarten van retrovirale MigR1 backbones (up panel) en gemodificeerde MigR1 vector met Bcl6 CDS regio aan de upstream van IRES-GFP (MigR1-Bcl6) (onderste paneel). (B) Experimenteel ontwerp. MigR1-getransduceerde of MigR1-Bcl6-getransduceerde SM CD4+ T-cellen werden een dag voorafgaand aan LCMV Armstrong adoptief overgebracht naar C57BL/6-ontvangers (CD45.2+). Op dag 3 na infectie werden overgedragen CD45.1+ SM CD4+ T-cellen uit de milt van de ontvangers geanalyseerd door middel van flowcytometrie. (C) Flowcytometrieanalyse van CXCR5 en CD25 in MigR1-getransduceerde of MigR1-Bcl6-getransduceerde GFP+ SM CD4+ T-cellen. De getallen naast de poort geven de frequenties aan van TFH-cellen in SM CD4+ T-cellen. (D) Flowcytometrieanalyse van het Bcl-6-expressieniveau in MigR1-getransduceerde of MigR1-Bcl6-getransduceerde SM CD4+ T-cellen. MFI, gemiddelde fluorescentie-intensiteit. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66752/66752fig03large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>

De huidige studie toont protocollen voor het beoordelen van de vroege lotsverbintenis van virusspecifieke TFH-cellen en het manipuleren van genexpressie in deze cellen.

Toegang tot vroege differentiatie van virusspecifieke folliculaire helper CD4+ T-cel in acute LCMV-geïnfecteerde muizen

Follicular Helper T (TFH) cells are perceived as an independent CD4+ T cell lineage that assists cognate B cells in producing high-affinity antibodies, ...

accessing-early-differentiation-virus-specific-follicular-helper-cd4

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Een techniek combineert in situ tetrameer vlekken en in situ hybridisatie (ISTH) maakt visualisatie, in kaart brengen en analyseren van de ruimtelijke nabijheid van virus-specifieke CD8 + T-cellen om hun virus-geïnfecteerde targets, en de bepaling van de kwantitatieve relaties tussen deze immuun-effectoren en doelstellingen voor infecties resultaten.

Een techniek om tegelijkertijd Visualiseer virus-specifieke CD8 + T-cellen en virus-geïnfecteerde cellen In situ</em

γ-herpesvirussen (γ-HVS) het vaststellen van een leven lang persistentie in hun gastheer. Infectie van muizen met γ-HV68 biedt een genetisch...

Meting van γHV68 infectie in Muizen

Hier beschrijven we een protocol om het fenotype van regulatorische T-cellen (Treg) te analyseren die zijn geïsoleerd uit naïeve en chronisch lymphocytaire choriomeningitis-virus geïnfecteerde muizen. Daarnaast bieden we een proces om de onderdrukkende activiteit van de Treg-cellen te evalueren.

Fenotypische en functionele analyse van geactiveerde regulatoire T-cellen Geïsoleerd van Chronische Lymfatische choriomeningitis-virus geïnfecteerde muizen

Dit protocol biedt een methode om vast te stellen gehumaniseerd muizen (hu-NSG) via Intrahepatische injectie van menselijke hematopoietische stamcellen in straling-geconditioneerd neonatale NSG muizen. De hu-NSG muis is gevoelig voor HIV-infectie en combinatorische antiretrovirale therapie (cART) en dient als een geschikt pathofysiologisch model voor HIV-replicatie en latentie onderzoeken.

Gehumaniseerd knik/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) muis Model voor HIV-replicatie en Latency Studies

Hier presenteren we een protocol voor de ex vivo kwalitatieve detectie van antigeen-specifieke CD8+ T cellen. Analyse is mogelijk met eencellige schorsingen van organen of van kleine hoeveelheden bloed. Een breed scala van studies vereisen de analyse van de reacties van de cytotoxische T-cel (vaccinatie en kanker immunotherapie studies).

Gelijktijdige kwantificering van anti-vector en Anti-transgenic-specifieke CD8+ T cellen Via MHC ik tetrameer kleuring na vaccinatie met een virale Vector

We beschrijven beide tests in vitro en in vivo infectie die kunnen worden gebruikt voor het analyseren van de activiteiten van host-encoding factoren.

Met behulp van een bacteriële ziekteverwekker sonde voor Cellulair en Organismic niveau Host Reacties

Hier beschreven zijn drie experimentele benaderingen voor het bestuderen van de dynamiek van HIV-infectie in gehumaniseerde muizen. De eerste maakt de studie van chronische infectie gebeurtenissen, terwijl de twee laatsten voor de studie van acute gebeurtenissen na primaire infectie of virale reactivatie.

Chronische, acute en Gereactiveerde HIV-infectie in gehumaniseerde Immunodeficiënte Muismodellen

Dit artikel beschrijft protocollen voor het evalueren van de Tfh- en GC B-respons in het muismodel van influenzavirusinfectie.

Evaluatie van T Folliculaire HelperCellen en Kiemcentrum Respons Tijdens Influenza A Virus Infectie bij Muizen

We hebben een protocol ontwikkeld voor de generatie en evaluatie van een gehumaniseerd en menselijk immunodeficiëntievirus besmet NOG muismodel op basis van stamceltransplantatie, intravaginale blootstelling aan het menselijke immunodeficiëntievirus en druppeldigitale PCR RNA Kwantificering.

Gehumaniseerde NOG Muizen voor intravaginale HIV Blootstelling en behandeling van HIV-infectie

Om de differentiatie en functie van CD8 T-cellen in vitro te bestuderen, kunnen CD8 T-cellen uit de muis worden geïsoleerd om langdurig te worden gekweekt met vooraf geïnfecteerde vaginale epiteelorganoïden van muis. Hier beschrijven we dit proces en beoordelen we de verwerving van residente geheugen T-celmarkers bij co-kweek.

In vitro Resident geheugen CD8 T-celdifferentiatie met behulp van het epitheliale organoïde-T-cel co-cultuursysteem

Leer hoe u de vroege differentiatie van virusspecifieke folliculaire helper CD4+ T-cellen bestudeert in acute LCMV-geïnfecteerde muizen. Deze methode omvat flowcytometrie en retrovirale genmanipulatie.

Toegang tot vroege differentiatie van virusspecifieke folliculaire helper CD4⁺ T-cel in acute LCMV-geïnfecteerde muizen

Meer video's verkennen