Name: Postmortale diagnose van hondsdolheid bij dieren door de bijgewerkte, gemultiplexte LN34 real-time reverse transcriptie-polymerasekettingreactietest (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:35:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Leer de bijgewerkte LN34 multiplex RT-PCR-test voor postmortale hondsdolheidsdiagnostiek bij dieren. Dit protocol verbetert de nauwkeurigheid en ondersteunt effectieve rabiespreventie wereldwijd.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Meechan, P. J., Potts, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMeechan%2C+PJ+%22Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories%22">Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories</a>. , Centers for Disease Control and Prevention. (2020).</li>
<li>Terrestrial Manual 2023. , World Organization for Animal Health. At
 <a target="_blank" href="https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals">https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals</a> (2023).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/handle/10665/310836">https://iris.who.int/handle/10665/310836</a> (2018).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 2, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1">https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1</a> (2019).</li>
<li>Genevie, R., et al. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , At
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/RabiesDFASPv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/RabiesDFASPv2.pdf</a> (2003).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WHO+Expert+Consultation+on+Rabies%3A+Third+Report%22">WHO Expert Consultation on Rabies: Third Report</a>. , World Health Organization. Geneva. (2018).</li>
<li>Gigante, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-site+evaluation+of+the+LN34+pan-lyssavirus+real-time+RT-PCR+assay+for+postmortem+rabies+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Multi-site evaluation of the LN34 pan-lyssavirus real-time RT-PCR assay for postmortem rabies diagnostics.</a> PLoS One. 13 (5), e0197074(2018).</li>
<li>Wadhwa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pan-Lyssavirus+Taqman+Real-Time+RT-PCR+assay+for+the+detection+of+highly+variable+rabies+virus+and+other+lyssaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">A Pan-Lyssavirus Taqman Real-Time RT-PCR assay for the detection of highly variable rabies virus and other lyssaviruses.</a> PLoS Negl Trop Dis. 11 (1), e0005258(2017).</li>
<li>Gigante, C. M., Wicker, V., Wilkins, K., Seiders, M., Zhao, H., Patel, P., Orciari, L., Condori, R. E., Dettinger, L., Yager, P., Xia, D., Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+pan-lyssavirus+LN34+assay+for+streamlined+rabies+diagnostics+by+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of pan-lyssavirus LN34 assay for streamlined rabies diagnostics by real-time RT-PCR.</a> Journal Virological Methods. , In press (2024).</li>
<li>Rao, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+modified+preexposure+prophylaxis+vaccination+schedule+to+prevent+human+rabies%3A+recommendations+of+the+advisory+committee+on+immunization+practices-United+States%2C+2022%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Use of a modified preexposure prophylaxis vaccination schedule to prevent human rabies: recommendations of the advisory committee on immunization practices-United States, 2022.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 71 (18), 619(2022).</li>
<li>Condori, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+LN34+Pan-Lyssavirus+Real-Time+RT-PCR+assay+for+rabies+diagnosis+and+rapid+genetic+typing+from+formalin-fixed+human+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Using the LN34 Pan-Lyssavirus Real-Time RT-PCR assay for rabies diagnosis and rapid genetic typing from formalin-fixed human brain tissue.</a> Viruses. 12 (1), 120(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7500 Fast</td><td>Applied Biosystems</td><td>N/A</td><td>Vervang niet zonder validatie</td></tr><tr><td>7500 Fast Dx&nbsp;</td><td>Applied Biosystems</td><td>N/A</td><td>Vervang niet zonder validatie</td></tr><tr><td>ABI ViiA 7</td><td>Applied Biosystems</td><td>N/A</td><td>Vervang niet zonder validatie</td></tr><tr><td>AgPath-ID One-Step RT-PCR Kit&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>AM1005</td><td>Vervang niet zonder validatie</td></tr><tr><td>Beadbug6</td><td>Benchmark Scientific</td><td>D1036</td><td></td></tr><tr><td>Direct-zol RNA MiniPrep kit&nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>R2052</td><td></td></tr><tr><td>MagNA Lyser green beads&nbsp;</td><td>Roche</td><td>3358941001</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>5425 R</td><td></td></tr><tr><td>Optical 96-well Reaction Plates</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>Optical Adhesive covers</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>4311971</td><td>Alternatief: doppen</td></tr><tr><td>Polyester fiber-tipped applicator swabs&nbsp;</td><td>BD BBL Polyester Fiber Tipped Application Swab</td><td>220690</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 6Flex</td><td>Applied Biosystems</td><td>4485691</td><td>Vervang niet zonder validatie</td></tr><tr><td>Quaternary ammonium disinfectant (1:256)</td><td>LYSOL</td><td>WBB56939</td><td>Vervang niet zonder validatie</td></tr><tr><td>RNase AWAY</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>7002PK</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>Single-use scalpel, a scalpel with a safety mechanism&nbsp;</td><td>Integra Miltex&nbsp;</td><td>4-510</td><td></td></tr><tr><td>Sterile polyproylene microcentrifuge tubes (1.5 mL), nuclease free</td><td>Sarstedt</td><td>72.692.405</td><td></td></tr><tr><td>Sterile polyproylene microcentrifuge tubes (2 mL), nuclease free</td><td>Sarstedt</td><td>72.694.600</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent</td><td>ThermoFisher Scientific&nbsp;</td><td>15596026</td><td>Vervang niet zonder validatie</td></tr></tbody></table>

postmortale diagnose van hondsdolheid bij dieren door de bijgewerkte, gemultiplexte ln34 real-time reverse transcriptie-polymerasekettingreactietest

Postmortem Diagnosis of Rabies in Animals by the Updated, Multiplexed LN34 Real-Time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction Assay

Postmortale diagnose van hondsdolheid bij dieren door de bijgewerkte, gemultiplexte LN34 real-time reverse transcriptie-polymerasekettingreactietest

Rabies is a fatal zoonotic disease caused by Lyssavirus rabies (RABV) and related negative strand RNA viruses from the Lyssavirus genus (family ...

postmortem-diagnosis-rabies-animals-updated-multiplexed-ln34-real

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

De directe Rapid immunohistochemische test (DRIT) biedt een Wereldorganisatie voor diergezondheid en Wereldgezondheidsorganisatie (OIE/WHO) erkend alternatief voor de direct fluorescent antilichaam (DFA) test voor de diagnose van rabiës. Deze test maakt het mogelijk voor veld-gebaseerde toepassingen die kunnen worden uitgevoerd in ongeveer 1 h na hersen vertoningen met behulp van Lichtmicroscopie.

Verbeterde bewaking van rabiës met behulp van een directe snelle immunohistochemische test

Een pan-Lyssavirus geneste omgekeerde transcriptie polymerase chain reactie is ontwikkeld om specifiek te detecteren alle bekende lyssaviruses. Validatie met behulp van rabiës hersenen monsters van verschillende diersoorten bleek dat deze methode een gevoeligheid en specificiteit gelijkwaardig is aan de gouden standaard fluorescerende antilichaam test en kan worden gebruikt voor routine hondsdolheid diagnose heeft.

Evaluatie van een universele geneste omgekeerde transcriptie polymerase chain reactie voor de opsporing van Lyssaviruses

Het doel van dit protocol is om in kleine en grote dieren veilige obductie-technieken aan te tonen voor het verkrijgen van bevredigende weefselmonsters voor rabiës testen.

Rabiës necropsy technieken in grote en kleine dieren

Deze real-time RT-PCR met behulp van dsDNA intercalating Dye is geschikt om Lyssavirus infecties te diagnosticeren. De methode begint met RNA geëxtraheerd uit rabiës verdachte ante-mortem-of postmortemmonsters, detaillering Master Mix preparaat, RNA toevoeging, installatie van de real-time machine en juiste interpretatie van de resultaten.

Pan-Lyssavirus real time RT-PCR voor rabiës diagnose

We presenteren een compleet protocol voor postmortem diagnose van dierlijke hondsdolheid onder veldomstandigheden met behulp van een snelle immunochromatografische diagnostische test (RIDT), van hersenbiopsie bemonstering tot uiteindelijke interpretatie. We beschrijven ook verdere toepassingen met behulp van het apparaat voor moleculaire analyse en virale genotypering.

Field Postmortem Rabies Rapid Immunochromagrafische Diagnostische Test voor Resource-Limited Settings met verdere moleculaire toepassingen

Hier presenteren we een immunohistochemisch testprotocol voor de detectie van rabiësvirusantigeen als een alternatieve diagnostische test voor formaline-gefixeerde weefsels.

Immunohistochemische test voor de detectie van het lyssavirusantigeen uit formaline-gefixeerde weefsels

Dit protocol presenteert een qRT-PCR-gebaseerde benadering voor het bepalen van het rabiësvirus nucleoproteïne (N) genkopienummer binnen verschillende anatomische structuren van runderhersenen met behulp van in vitro transcriptie.

Kwantificering van rabiësvirus in verschillende runderhersenstructuren

De Solaris qPCR Gene Expression Assays zijn nieuwe vooraf ontworpen qPCR primer / probe met het doel de qPCR proces te vereenvoudigen zonder dat de specificiteit en robuustheid van de test.

Kwantitatieve real-time PCR met behulp van de Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

Kwantitatieve real-time PCR (qRT-PCR) is een doeltreffend instrument om mRNA niveaus te diagnosticeren in verschillende insecten weefsels en ontwikkelingsstadia. In dit rapport tonen we het gebruik van de qRT-PCR na te gaan mRNA niveaus in de verschillende weefsels en larvale ontwikkelingsstadia van de invasieve soorten insecten, smaragd as boor.

Analyse van genexpressie in Emerald Ash Borer ( Agrilus planipennis) Met behulp van kwantitatieve Real Time-PCR

PCR heeft zich ontpopt als een veelgebruikte techniek in veel moleculair-biologische laboratoria. Mits hier is een kort overzicht van enkele conventionele PCR-protocollen. Omdat elk reactie is een uniek experiment optimale voorwaarden te genereren product variëren. Begrijpen van de variabelen in een reactie, zal ook problemen efficiency, waardoor de kans op het gewenste resultaat.

Polymerase Chain Reaction: Basis Protocol Plus Problemen oplossen en Optimalisatie Strategieën

Leer de bijgewerkte LN34 multiplex RT-PCR-test voor postmortale hondsdolheidsdiagnostiek bij dieren. Dit protocol verbetert de nauwkeurigheid en ondersteunt effectieve rabiespreventie wereldwijd.

Postmortale diagnose van hondsdolheid bij dieren door de bijgewerkte, gemultiplexte LN34 real-time reverse transcriptie-polymerasekettingreactietest (Video) | JoVE Journal

Postmortale diagnose van hondsdolheid bij dieren door de bijgewerkte, gemultiplexte LN34 real-time reverse transcriptie-polymerasekettingreactietest

Meer video's verkennen