Name: AC-DC Electropenetrografie voor de studie van sonderend en innamegedrag van Culex tarsalis muggen op mensenhanden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Leer AC-DC elektropenetrografie om sondeer- en opnamegedrag van Culex tarsalis muggen op mensenhanden te bestuderen. Deze niet-invasieve methode onthult mechanistische inzichten voor vectorbeheersstrategieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We zijn dankbaar aan Prof. Astri Wayadande van de Oklahoma State University voor het pionieren van de bedradingsprocedure voor muggen, en aan Dr. Elaine Backus bij de USDA-ARS in Parlier, CA, en de heer Andrew Dowell bij EPG Technologies Inc. in Gainesville, FL, voor hulp bij het oplossen van problemen met de EPG-apparatuur. We danken ook Dr. Dustin Swanson en de heer William Yarnell bij de USDA-ARS Insectary in Manhattan, KS, voor het leveren van muggen, en mejuffrouw Miriam Ruhinda aan de Kansas State University in Manhattan, KS voor haar hulp bij het filmen van de procedurevideo's. Dit werk was mogelijk door toegang tot de Integrated Molecular Entomology Core (IEMC) aan de Kansas State University. Dit onderzoek werd ondersteund door de USDA Research, Education, and Economics Workforce Development Agreement (#58-3022-0-002) en het Hatch Multistate Project (NE1943). Dit manuscript is bijdrage nr. 24-194-J van de Kansas Agricultural Experiment Station, Kansas State University, Manhattan, KS, USA.

Non-invasive Electropenetrography to Study Mosquito Probing Behaviors

<ol><li>Becker, N., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBecker%2C+N+%22Medical+importance+of+mosquitoes+in+Mosquitoes+and+their+control%22">Medical importance of mosquitoes in Mosquitoes and their control</a>. , 2nd ed, Springer. Los Angeles, CA. 25-42 (2010).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Vector-borne+diseases%22">Vector-borne diseases</a>. , (2024).</li>
<li>Woodstream Corporation, Inc. The economic cost of mosquito-borne diseases. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22AMosquito+Magnet%22">AMosquito Magnet</a>. , (2022).</li>
<li>Bartlow, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forecasting+zoonotic+infectious+disease+response+to+climate+change%3A+Mosquito+vectors+and+a+changing+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">Forecasting zoonotic infectious disease response to climate change: Mosquito vectors and a changing environment.</a> Vet Sci. 6 (2), 40(2019).</li>
<li>Naslund, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+mosquito-borne+viruses+linked+to+Aedes+aegypti+and+Aedes+albopictus%3A+Global+status+and+preventive+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Vector+Borne+Zoonotic+Dis%22%5BJournal%5D)">Emerging mosquito-borne viruses linked to Aedes aegypti and Aedes albopictus: Global status and preventive strategies.</a> Vector Borne Zoonotic Dis. 21 (10), 731-746 (2021).</li>
<li>Shaw, W. R., Catteruccia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vector+biology+meets+disease+control%3A+Using+basic+research+to+fight+vector-borne+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Vector biology meets disease control: Using basic research to fight vector-borne diseases.</a> Nat Microbiol. 4 (1), 20-34 (2019).</li>
<li>Wilson, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+vector+control+for+the+control+and+elimination+of+vector-borne+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">The importance of vector control for the control and elimination of vector-borne diseases.</a> PLoS Negl Trop Dis. 14 (1), e0007831(2020).</li>
<li>Dusfour, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+insecticide+resistance+in+the+major+Aedes+vectors+of+arboviruses%3A+Advances+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Management of insecticide resistance in the major Aedes vectors of arboviruses: Advances and challenges.</a> PLoS Negl Trop Dis. 13 (10), e0007615(2019).</li>
<li>Choumet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+non+infectious+and+infectious+Anopheles+gambiae+blood+feedings+in+na%C3%AFve+and+saliva-immunized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Visualizing non infectious and infectious Anopheles gambiae blood feedings in naïve and saliva-immunized mice.</a> PLoS ONE. 7 (12), e50464(2012).</li>
<li>Backus, E. A., Cervantes, F. A., Guedes, R. N. C., Li, A. Y., Wayadande, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AC-DC+electropenetrography+for+in-depth+studies+of+feeding+and+oviposition+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Entomol+Soc+Am%22%5BJournal%5D)">AC-DC electropenetrography for in-depth studies of feeding and oviposition behaviors.</a> Ann Entomol Soc Am. 112 (3), 236-248 (2019).</li>
<li>Hol, F. J., Lambrechts, L., Prakash, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BiteOscope%2C+an+open+platform+to+study+mosquito+biting+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">BiteOscope, an open platform to study mosquito biting behavior.</a> Elife. 9, e56829(2020).</li>
<li>Backus, E. A., Guedes, R. N., Reif, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AC-DC+electropenetrography%3A+Fundamentals%2C+controversies%2C+and+perspectives+for+arthropod+pest+management%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag+Sci%22%5BJournal%5D)">AC-DC electropenetrography: Fundamentals, controversies, and perspectives for arthropod pest management.</a> Pest Manag Sci. 77 (3), 1132-1149 (2021).</li>
<li>Gordon, R. M., Lumsden, W. H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+the+behavior+of+the+mouthparts+of+mosquitoes+when+taking+up+blood+from+living+tissue%3B+together+with+some+observations+on+the+ingestion+of+microfilariae%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Trop+Med+Parasitol%22%5BJournal%5D)">A study of the behavior of the mouthparts of mosquitoes when taking up blood from living tissue; together with some observations on the ingestion of microfilariae.</a> Ann Trop Med Parasitol. 33, 259-278 (1939).</li>
<li>Janson, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+automated+biomaterial+platform+to+study+mosquito+feeding+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Development of an automated biomaterial platform to study mosquito feeding behavior.</a> Front Bioeng Biotechnol. 11, 1103748(2023).</li>
<li>Henriques-Santos, B. M., Xiong, C., Pietrantonio, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+analysis+of+feeding+behaviors+of+females+of+the+mosquito+Aedes+aegypti+using+a+modified+flyPAD+system%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Automated analysis of feeding behaviors of females of the mosquito Aedes aegypti using a modified flyPAD system.</a> Sci Rep. 13, 20188(2023).</li>
<li>Kashin, P., Wakeley, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+insect+%27Bitometer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An insect 'Bitometer.</a> Nature. 208 (5009), 462-464 (1965).</li>
<li>Kashin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electronic+recording+of+the+mosquito+bite%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electronic recording of the mosquito bite.</a> J Insect Physiol. 12, 281-286 (1966).</li>
<li>Kashin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+orally+effective+insect+repellent%5BTitle%5D)+AND+%22IIT+Research+Institute%22%5BJournal%5D)">Development of an orally effective insect repellent.</a> IIT Research Institute. , (1967).</li>
<li>Kashin, P., Arneson, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automated+repellency+assay+system.+II.+a+new+electronic+%26%2334%3BBitometer-timer.%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22J+Econ+Entomol%22%5BJournal%5D)">An automated repellency assay system. II. a new electronic &#34;Bitometer-timer.&#34.</a> J Econ Entomol. 62 (1), 200-205 (1969).</li>
<li>Shieh, J. -N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Salivation+and+engorgement+parameters+of+sucking+insect+vectors%3A+Implications+in+pathogen+transmission%22">Salivation and engorgement parameters of sucking insect vectors: Implications in pathogen transmission</a>. , Oregon State University. (1994).</li>
<li>Kimsey, R. B. Measuring and recording arthropod blood feeding. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKimsey%2C+RB+%22History%2C+Development%2C+and+Applications+of+AC+Electronic+Insect+Feeding+Monitors%22">History, Development, and Applications of AC Electronic Insect Feeding Monitors</a>. , Entomological Society of America. 122-128 (1994).</li>
<li>Backus, E. A., Devaney, M. J., Bennett, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+signal+processing+circuits+among+seven+AC+electronic+monitoring+systems+for+their+effects+on+the+emf+and+R+components+of+aphid+%28Homoptera%3A+Aphididae%29+waveforms%5BTitle%5D)+AND+%22Principles+and+Applications+of+Electronic+Monitoring+and+Other+Techniques+in+the+Study+of+Homopteran+Feeding+Behavior%22%5BJournal%5D)">Comparison of signal processing circuits among seven AC electronic monitoring systems for their effects on the emf and R components of aphid (Homoptera: Aphididae) waveforms.</a> Principles and Applications of Electronic Monitoring and Other Techniques in the Study of Homopteran Feeding Behavior. Walker, G. P., Backus, E. A. , Entomological Society of America: Lanham, MD. 102-143 (2000).</li>
<li>Backus, E. A., Bennett, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+AC-DC+correlation+monitor%3A+New+EPG+design+with+flexible+input+resistors+to+detect+both+R+and+emf+components+for+any+piercing-sucking+hemipteran%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">The AC-DC correlation monitor: New EPG design with flexible input resistors to detect both R and emf components for any piercing-sucking hemipteran.</a> J Insect Physiol. 55 (10), 869-884 (2009).</li>
<li>Backus, E. A., Cline, A. R., Ellerseick, M. R., Serrano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lygus+hesperus+%28Hemiptera%3A+Miridae%29+feeding+on+cotton%3A+New+methods+and+parameters+for+analysis+of+nonsequential+electrical+penetration+graph+data%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Entomological+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Lygus hesperus (Hemiptera: Miridae) feeding on cotton: New methods and parameters for analysis of nonsequential electrical penetration graph data.</a> Annals of the Entomological Society of America. 100, 296-310 (2007).</li>
<li>Ebert, T. A., Backus, E. A., Cid, M., Fereres, A., Rogers, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+SAS+program+for+behavioral+analysis+of+electrical+penetration+graph+data%5BTitle%5D)+AND+%22Comput+Electron+Agr%22%5BJournal%5D)">A new SAS program for behavioral analysis of electrical penetration graph data.</a> Comput Electron Agr. 116, 80-87 (2015).</li>
<li>Wayadande, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waveforms+from+stylet+probing+of+the+mosquito+Aedes+aegypti+%28Diptera%3A+Culicidae%29+measured+by+AC-DC+electropenetrography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Waveforms from stylet probing of the mosquito Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) measured by AC-DC electropenetrography.</a> J Med Entomol. 57 (2), 353-368 (2020).</li>
<li>Cooper, A. M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+electropenetrography+waveform+library+for+the+probing+and+ingestion+behaviors+of+Culex+tarsalis+on+human+hands%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">An electropenetrography waveform library for the probing and ingestion behaviors of Culex tarsalis on human hands.</a> Insect Sci. 31 (4), 1165-1186 (2024).</li>
<li>Reif, K. E., Backus, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AC-DC+electropenetrography+unmasks+fine+temporal+details+of+feeding+behaviors+for+two+tick+species+on+unsedated+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">AC-DC electropenetrography unmasks fine temporal details of feeding behaviors for two tick species on unsedated hosts.</a> Sci Rep. 11 (1), 2040(2021).</li>
<li>Vaughan, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electropenetrography+as+a+tool+to+quantify+probing+and+injection+behaviors+of+mosquitoes+%28Aedes+aegypti%29+in+mice+under+biocontainment+housing%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Electropenetrography as a tool to quantify probing and injection behaviors of mosquitoes (Aedes aegypti) in mice under biocontainment housing.</a> Comp Med. 73 (6), 25(2023).</li>
<li>Backus, E. A., Shugart, H. Electropenetrography (EPG) Online Workshop. Hosted by L. Diepenbrock at the University of Florida. Institute of Food and Agricultural Sciences Extension. , 
 <a target="_blank" href="https://ifas-crec-entomology.catalog.instructure.com/courses/epg-workshop-2022">https://ifas-crec-entomology.catalog.instructure.com/courses/epg-workshop-2022</a> (2022).</li>
<li>Dataq Instruments Inc. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WinDaq+recording+and+playback+software%22">WinDaq recording and playback software</a>. , (2024).</li>
<li>Backus, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Our+own+jabberwocky%3A+clarifying+the+terminology+of+certain+piercing-sucking+behaviors+of+homopterans%5BTitle%5D)+AND+%22Principles+and+applications+of+electronic+monitoring+and+other+techniques+in+the+study+of+homopteran+feeding%22%5BJournal%5D)">Our own jabberwocky: clarifying the terminology of certain piercing-sucking behaviors of homopterans.</a> Principles and applications of electronic monitoring and other techniques in the study of homopteran feeding. Walker, G. P., Backus, E. A. , Entomological Society of America: Lanham, MD. 102-143 (2000).</li>
<li>Tjallingii, W. F. Comparison of AC and DC systems for electronic monitoring of stylet penetration activities by homopterans. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTjallingii%2C+WF+%22Principles+and+Applications+of+Electronic+Monitoring+and+Other+Techniques+in+the+Study+of+Homopteran+Feeding+Behavior%22">Principles and Applications of Electronic Monitoring and Other Techniques in the Study of Homopteran Feeding Behavior</a>. Walker, G. P., Backus, E. A. , Entomological Society of America. 41-69 (2000).</li>
<li>Mizrahi, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMizrahi%2C+J+%22Advances+in+Applied+Electromyography%22">Advances in Applied Electromyography</a>. , IntechOpen. Rijeka, Croatia. (2011).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden. Vermelding van handelsnamen of commerciële producten in deze publicatie is uitsluitend bedoeld om specifieke informatie te verschaffen en impliceert geen aanbeveling of goedkeuring door het Amerikaanse ministerie van Landbouw. De conclusies in dit rapport zijn die van de auteurs en vertegenwoordigen niet noodzakelijkerwijs de standpunten van het USDA.

Bij het gebruik van de AC-DC EPG is het van cruciaal belang om een basiskennis te hebben van de werking van hardware en software30 en om de hier beschreven protocollen zorgvuldig te volgen om schade aan het apparaat te voorkomen. Het is vooral belangrijk om de hoofdversterker niet aan te raken als deze is ingeschakeld, tenzij deze is geaard op de Faraday-kooi. Het wordt aanbevolen om zo ver mogelijk in de Faraday-kooi op te nemen30. De deuren van de kooi hoeven niet noodzakelijkerwijs gesloten te zijn om interpreteerbare golfvormen te verkrijgen, tenzij u in een omgeving met overmatige omgevingsgeluiden opneemt. Niets gemotoriseerd mag zich in de Faraday-kooi bevinden. Het is belangrijk op te merken dat de Faraday-kooi zelf alleen elektrisch geaard mag zijn via de hoofdversterker om goed te werken. Dit wordt bereikt door de hoofdversterker aan te sluiten op een metalen laboratoriumstandaard waarvan de verf is weggeslepen op een voet van de standaard om een geleidende weg te creëren voor de elektriciteit die door de Faraday-kooi wordt opgevangen om naar de laboratoriumstandaard te stromen, in de metalen behuizing van de hoofdversterker, via de kabel naar de bedieningsdoos, door de voeding naar een goed geaarde stopcontact en in de aarde via de gebouwgrond30. Een multimeter kan worden gebruikt om de kwaliteit van de verbinding tussen de componenten in de kooi te controleren door de weerstand (het omgekeerde van de geleidbaarheid) tussen verschillende punten te meten. Een draadloze AM-radio kan ook in de Faraday-kooi worden geplaatst om te verifiëren dat het geluid aanzienlijk wordt verminderd (of idealiter wordt geëlimineerd) wanneer de deuren zijn gesloten, wat bevestigt dat de Faraday-kooi voldoende luchtgebonden elektrische signalen vangt (E. Backus per. Comm.).
Juiste en gestandaardiseerde voorbereiding van het zilverlijm en bevestiging van de opnameelektroden aan insecten zijn van cruciaal belang voor het verkrijgen van bruikbare opnames. Insectencuticula is een isolator en werkt als een condensator als de zilverlijm niet voldoende door de poriën van de cuticula dringt om een weg te creëren voor elektriciteit om van binnenuit het insect naar de gouddraad op het oppervlak van het pronotum te reizen30. Bereid de zilverlijm tegelijkertijd voor elke EPG-sessie, werk met verse zilverlijm uit de buis en vervang deze regelmatig tijdens de bedradingsprocedure door krachtig gevormde zilverlijm. Zorg ervoor dat de gouden lus tegen de thorax is gepositioneerd, zodat de hele lus in contact staat met de cuticula en niet scheef staat of wordt gescheiden door een dikke laag zilverlijm en schubben om een sterke elektrische verbinding te vormen en om loslating en ontsnapping van de mug uit de draad te voorkomen.
De hier beschreven protocollen moeten worden geoptimaliseerd bij het werken met verschillende muggensoorten. De optimale EPG-instellingen (Ri-niveau, spanning, stroompatroon en hardwareversterking) voor opname op een bepaalde geleedpotige moeten experimenteel worden bepaald12,30. Echter, eenmaal de offset is aangepast, hoeft deze niet meer te worden aangepast bij het werken met vergelijkbare muggen. Optimale instellingen zijn bepaald voor AC-DC EPG met Ae. aegypti26 en Cx. tarsalis27. Golfvormbibliotheken (gedefinieerd in Tabel 2) voor aanvullende soorten zullen de toepassing van EPG voor muggen vergemakkelijken. Het is ook noodzakelijk om de anesthesie voor de betreffende mug te optimaliseren, aangezien het bloedzuigende gedrag differentieel kan worden beïnvloed op basis van de mugensoort en de keuze van de anesthesie. Bijvoorbeeld, Cx. tarsalis vereist een herstelperiode van 4 uur na 15 minuten anesthesie met CO2, terwijl voor Ae. aegypti, een herstelperiode van 15 minuten voldoende is na een anesthesieperiode van 15 minuten met ijs. Culex tarsalis is echter moeilijk om neer te halen met koude blootstelling, dus CO2 wordt overwegend gebruikt ondanks de lange herstelperiode.
Hoewel de AC-DC EPG-monitor eenvoudig te gebruiken is na het bekijken van online bronnen30,31 of het trainen met een ervaren gebruiker, is enige probleemoplossing vereist. Aanvankelijk hadden de EPG-opnames van de auteur van de mugprobes een onverwachte 11 Hz-signaalgolf in het pre-signaal dat niet was waargenomen of gerapporteerd door Wayadande en collega's26. Overleg met E. Backus wees erop dat de Faraday-kooi waarschijnlijk het probleem was vanwege interfererende grondlussen. Een nieuwe Faraday-kooi geconstrueerd uit een zeer geleidende koperscherm verbonden aan een aluminium frame dat is bevestigd aan een grote aluminium vloerplaat ondersteund door rubberen voeten om deze te isoleren van de onderliggende tafel (Figuur 1B), loste het 11 Hz ruissignaal op (Figuur 3C,C'). Bovendien verschenen de pre- en post-rectificatiesignalen soms als dikke, wazig lijnen in plaats van rechte, gladde, dunne lijnen wanneer de EPG-voeding voor het eerst werd ingeschakeld. Dit werd meestal verholpen door het instrument uit te schakelen en alle kabelverbindingen te controleren. Als dat faalde, hielp het meestal om het apparaat 1-3 minuten uit het stopcontact te halen. Zeer zelden worden de pre- en post-signalen dik en wazig tijdens de werking, wat werd aangepakt door het apparaat uit te schakelen en het in een ander stopcontact te steken of een spanningsregelaar en stroombronnen om het EPG in te steken voordat het op de muur werd aangesloten. Idealiter zou een specifi

Muggen veroorzaken over de hele wereld lijden en economische schade door hun rol als ziektevectoren en hinderlijke plagen1. Anopheles muggen verspreiden malaria, wat jaarlijks naar schatting 219 miljoen gevallen wereldwijd veroorzaakt, meer dan 400.000 sterfgevallen2 en 12 miljard Amerikaanse dollar aan directe kosten3. Aedes muggen zijn de meest opmerkelijke vectoren van belang voor de volksgezondheid omdat ze een bijna wereldwijde aanwezigheid hebben en agenten van Chikungunya, knokkelkoorts, lymfatische filariasis, Rift Valley koorts, gele koorts en Zika verspreiden, die levens kosten, gezondheidssystemen overbelasten en leiden tot chronisch lijden, levenslange morbiditeit en invaliditeit4,5. Daarnaast verspreiden Culex muggen agenten van paardenencefalitis, Japanse encefalitis, lymfatische filariasis, Saint Louis encefalitis en West-Nijl koorts, die zowel de menselijke als dierlijke gezondheid beïnvloeden3,4.
Vectorbestrijding met insecticiden-gebaseerde benaderingen is de belangrijkste methode voor het bestrijden van door vectoren overgedragen ziekten wereldwijd6,7. Echter, het aantal insecticiden dat beschikbaar is voor muggenbestrijding is beperkt. Bovendien ontwikkelt zich insecticideresistentie bij veel soorten, vooral bij Aedes muggen, wat onze capaciteit om door vectoren overgedragen ziekten te bestrijden beïnvloedt en de behoefte aan nieuwe bestrijdingsstrategieën aanjaagt6,8. Een beter begrip van muggenbiologie, muggen-gastheer-pathogeen interacties en de processen die de overdracht van pathogeen reguleren, kan de ontwikkeling van nieuwe gereedschappen voor vectorbestrijding vergemakkelijken6.
Probeer- en innamegedragingen in gastheerweefsels kunnen de overdracht van pathogeen en ziektepathologie beïnvloeden9,10,11,12. Bijvoorbeeld, meer microfilariae werden opgenomen wanneer Aedes aegypti direct van capillairen voedde in plaats van gepoold bloed buiten gebroken vaten13. Daarom kan fundamenteel en toegepast onderzoek op dit gebied helpen bij het ontwikkelen, verfijnen en evalueren van muggenbestrijdingsstrategieën en andere contramaatregelen voor de overdracht van pathogeen. Er bestaan echter significante kennisgaten in de details van cryptische bloedvoedende gedragingen die zich onder het oppervlak van de gastheerhuid voordoen, omdat deze gedragingen vaak invasieve procedures op levende diermodellen vereisen of transparante kunstmatige substraten of vloeibare diëten gebruiken9,11,14,15. Niet-invasieve elektropenetragrafie (EPG; ook wel elektrische penetratiegrafiek genoemd) technieken zijn gebruikt om voedingsgedragingen van plantenetende insecten te bestuderen die gerelateerd zijn aan plantenpathogeenoverdracht, weerstand van gastplanten en werkingsmechanismen van insecticiden omdat ze onderzoekers in staat stellen om indirect monddelenbewegingen en gedragingen die zich in gastheerweefsels voordoen, waar te nemen, op te nemen en te kwantificeren10,12.
Sinds de jaren 1950 zijn elektronische penetratiebewakingstechnieken toegepast op bloedvoedende geleedpotigen, inclusief muggen16,17,18,19,20. Echter, EPG werd nooit wijdverspreid voor bloedvoedende geleedpotigen toegepast omdat biologische activiteiten die overeenkomen met de golfvormen nooit werden geverifieerd21. Bovendien resulteerden de ontwerpen en elektronica van vroege instrumenten in overbelasting van sommige elektrische signalen, hoge signaal-ruisverhoudingen, lage resolutie en vervorming van golfvormen, en irritatie van werveldiergastheer12,22. Een recenter instrument, de AC-DC EPG monitor23, heeft variabele instellingen en verbeterde signaalverwerking, waardoor het beter geschikt is om bloedvoedende geleedpotigen op te nemen en de biologische oorsprong van de golfvormen in experimentele correlatiestudies te ontcijferen10,12.
Voor EPG wordt een elektrisch signaal toegepast op de gastheer via een substraatspanningssonde (d.w.z. referentie-elektrode). Het geleedpotige wordt aan een opname-elektrode bevestigd en op de gastheer geplaatst. Wanneer het geleedpotige zijn monddelen (d.w.z. styletten) in de gastheer inbrengt, wordt het elektrische signaal naar de AC-DC EPG monitor voor signaalverwerking geleid. De elektrische signalen worden vervolgens weergegeven op een computer als "golfvormen" die overeenkomen met specifiek gedrag zoals monddelenbewegingen, inname, speekselafscheiding en pathogeenaanwinning/inoculatie10,12. Achtereenvolgende en niet-achtereenvolgende responsvariabelen gerelateerd aan de duur en telling van de golfvormen24,25 op verschillende hiërarchische niveaus (families, typen en subtypes) kunnen vervolgens worden berekend op basis van de frequentie en duur van de golfvormen om inzicht te krijgen in de voedingsgedragingen die binnen

<table><tbody><tr><td>Instrumentation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AC-DC 4-channel electropenetrograph</td><td>EPG Technologies, Inc.</td><td></td><td>Voor EPG, inclusief de voeding, bedieningsbox, schakelinterfacebox, vier hoofdfase-versterkers, vier substraatspanningsprobes en bijbehorende snoeren</td></tr><tr><td>Luchtkussens</td><td>Amazon.com</td><td></td><td>voor de menselijke gastheer om zijn hand/arm op te rusten tijdens EPG</td></tr><tr><td>DI-710 Data acquisition hardware (AD Board)</td><td>DATAQ Instruments Inc.</td><td></td><td>voor het digitaliseren van de analoge EPG-signalen zodat ze op een computer kunnen worden gevisualiseerd</td></tr><tr><td>Dimbare Led Vergrootglas, Groot 5X Handsfree Vergrootglas met Licht en Standaard voor Lezen, Hobby's, Ambachten, Naaiwerk, Werkbank</td><td>Amazon.com</td><td></td><td>voor gedragsobservatie tijdens EPG; alleen gebruiken wanneer de stekker eruit zit of anders kan er ruis optreden</td></tr><tr><td>Dino-Lite Edge Digitaal Microscoop (250x vergroting)</td><td>Dino-Lite</td><td>AF4915ZT</td><td>voor gedragsobservatie tijdens EPG</td></tr><tr><td>Dino-Lite Flex-arm Desktop Stand</td><td>Dino-Lite</td><td>MS22B</td><td>voor het vasthouden en manipuleren van de camera</td></tr><tr><td>Eisco Steel Retort Basis Stand en Staafset</td><td>Fisher Scientific</td><td>S41740</td><td>voor het vasthouden van de hoofdfase-versterker & het aarden van de Faraday-kooi (moet van metaal zijn)</td></tr><tr><td>EPG Online Workshop</td><td>UF IFAS Extension</td><td>https://ifas-crec-entomology.catalog.instructure.com/courses/epg-workshop-2022</td><td>AKA, "online bronnen" voor het leren van EPG (instrumentopstelling, gegevensverzameling en -analyse, Faraday-constructie, zilverlijmvoorbereiding, insectenstaafconstructie, enz.)</td></tr><tr><td>Furman P-1800 AR Power Regulator/Power Conditioner</td><td>Amazon.com</td><td></td><td>voor het verminderen van lijnruis</td></tr><tr><td>Kleine Bubbeldempingsfolie</td><td>Amazon.com</td><td></td><td>voor gebruik als barrière tussen de gastheer en de Faraday-kooi</td></tr><tr><td>Troemner Talboys Labjaws Regular Clamp Holder</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-217-121</td><td>voor het vasthouden van de hoofdfase-versterker & het aarden van de Faraday-kooi (moet van metaal zijn en niet bedekt zijn met plastic)</td></tr><tr><td>Windows computer</td><td>Best Buy</td><td></td><td>voor EPG & statistische analyse</td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Backus 2.0 Data Analysis SAS program&nbsp;</td><td>UF IFAS Extension</td><td>https://crec.ifas.ufl.edu/extension/epg/data-analysis/</td><td>voor statistische analyse van golfvormgegevens</td></tr><tr><td>Ebert 1.0 File Manipulator and Error Checker SAS programs</td><td>UF IFAS Extension</td><td>https://crec.ifas.ufl.edu/extension/epg/data-analysis/</td><td>voor voorbereiding van bestanden voor statistische analyse van golfvormgegevens</td></tr><tr><td>SAS version 9.4</td><td>SAS Institute Inc.</td><td></td><td>voor statistische analyse van golfvormgegevens</td></tr><tr><td>WinDaq Lite&nbsp;</td><td>DATAQ Instruments Inc.</td><td></td><td>voor het opnemen en beoordelen van EPG-gegevens.&nbsp; Bevat de WinDaq Hardware Manager software (AKA, "hardwarebeheersoftware") en WinDaq Waveform Browser software (AKA, "golfvormbeoordelingssoftware"). Alleen voor gebruik op Windows-computers.&nbsp;</td></tr><tr><td>Faraday Cage</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aluminium schermframe</td><td>Home Depot</td><td>MSCF5167</td><td>voor&nbsp; de wanden van de Faraday-kooi</td></tr><tr><td>Aluminium plaat, 0,125 (1/8) dik 3003-H14</td><td>Metals Depot</td><td>S318</td><td>voor de basis van de Faraday-kooi</td></tr><tr><td>Hoeksteunen, 1"&nbsp;</td><td>Home Depot</td><td>339547</td><td>voor&nbsp; de wanden van de Faraday-kooi</td></tr><tr><td>Kruidslijper met platte kop, #6-32 x 1"</td><td>Home Depot</td><td>459999</td><td>voor Faraday-kooiconstructie</td></tr><tr><td>Vlakke ringen, #6&nbsp;</td><td>Home Depot</td><td>638977</td><td>voor Faraday-kooiconstructie</td></tr><tr><td>Fluke 15B+ Digital Multimeter, voor elektrische toepassingen, meet AC/DC spanning en stroommetingen tot 1000V en 10A, samen met weerstands-, doorgangs-, diode- en capaciteitsmogelijkheden</td><td>Amazon.com</td><td></td><td>voor het testen van de Faraday-kooi</td></tr><tr><td>Portable Radio AM FM, Goodes Transistor Radio met luidspreker, Hoofdtelefoonaansluiting, 2AA Batterij Aangedreven Radio voor Lange Afstandsontvangst, Zakradio voor Binnen, Buiten en Noodgebruik</td><td>Amazon.com</td><td></td><td>voor het testen van de Faraday-kooi</td></tr><tr><td>Pure koperscherm, 16 x 16 maas met 0,11 draaddiameter, 36" x 12'</td><td>Metro Screenworks</td><td></td><td>voor&nbsp; de wanden van de Faraday-kooi</td></tr><tr><td>Rondkopcombo-machineschroeven, #6-32 x 3/4"</td><td>Home Depot</td><td>528466</td><td>voor Faraday-kooiconstructie</td></tr><tr><td>Schuurpapier, 1/2" bij 1", 150 Grit</td><td>Home Depot</td><td>19036-20-CC</td><td>voor het verwijderen van de verf van de onderkant van de laboratoriumstandaard</td></tr><tr><td>Schermframe hoeken, 5/16"&nbsp;</td><td>Home Depot</td><td>WCORN516</td><td>voor&nbsp; de wanden van de Faraday-kooi</td></tr><tr><td>Schermspline, 0,14"&nbsp;</td><td>Home Depot</td><td>3034719</td><td>voor&nbsp; de wanden van de Faraday-kooi</td></tr><tr><td>Insect Stubs</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Messing Escutcheon Pins</td><td>Home Depot</td><td>801294</td><td>voor het construeren van insectenstaafjes&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>Koperdraad, 20 AWG</td><td>Amazon.com</td><td></td><td>voor het construeren van insectenstaafjes&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>Harris wateroplosbaar flu</td><td>Home Depot</td><td>355398</td><td>voor het helpen solderen van het insectenstaafjesdraad en een sterke verbinding vormen</td></tr><tr><td>Naald-neustang</td><td>Home Depot</td><td></td><td>voor het buigen van draad bij het construeren van insectenstaafjes</td></tr><tr><td>Pro's Kit 900-015 Helping Hands Soldering Aid</td><td>Amazon.com</td><td></td><td>voor het vasthouden van escucheonpins tijdens het solderen</td></tr><tr><td>Soldeer (met harskern)</td><td>Home Depot</td><td>296497</td><td>voor het construeren van insectenstaafjes&

ac-dc electropenetrografie voor de studie van sonderend en innamegedrag van culex tarsalis muggen op mensenhanden

AC-DC Electropenetrography for the Study of Probing and Ingestion Behaviors of Culex tarsalis Mosquitoes on Human Hands

Muggen verspreiden ziekteverwekkers die een negatieve invloed hebben op de gezondheid van mensen en dieren. Een beter begrip van hun bloedzuigende biologie en interacties met gastheren en ziekteverwekkers zou kunnen worden benut om nieuwe doelen te ontwikkelen voor het beheersen van door muggen overgedragen ziekten. Helaas zijn de (bijt)gedragingen van muggen slecht begrepen omdat ze zich in de weefsels van de gastheer afspelen. Hier wordt een niet-invasieve procedure beschreven voor het gebruik van AC-DC elektropenetragrafie (EPG) om muggengedragingen bij het voeden indirect te visualiseren en te kwantificeren door het registreren van veranderingen in elektrische signalen die worden gegenereerd bij het prikken en innemen op menselijke handen. Dunne gouddraden worden aan de muggen bevestigd met behulp van geleidende zilverlijm en verbonden met het EPG-instrument. De menselijke gastheer houdt een substraatspanningssonde in hun hand. Het prikken van de gastheer door de bedraadde mug maakt de elektrische kring compleet, en elektrische signalen worden op een computer opgenomen als "golfvormen" die vervolgens kunnen worden gemeten en geteld voor analyse. Deze methodologie is gebruikt om de prik- en innamegedragingen van Aedes aegypti en Culex tarsalis muggen te karakteriseren en kan worden toegepast op andere soorten muggen. EPG kan worden gebruikt om de effecten van ziekteverwekkers, insecticiden en andere factoren op het voedingsgedrag van muggen te bestuderen.

AC-DC EPG-opnames van Cx. tarsalis-muggen die bloed zuigen uit menselijke handen (Figuur 4) genereerden interpreteerbare golfvormen die geschikt waren voor analyse en publicatie27. De interpreteerbare golfvormen bevatten duidelijke, onderscheidbare repeterende patronen die konden worden geclassificeerd in golfvormfamilie's (Tabel 1 en Figuur 4), typen en subtypen wanneer de compressie (gedefinieerd in Tabel 2) en de softwareversterking werden aangepast in de software voor het beoordelen van golfvormen27,31. Alle golfvormfamilie's (J, K, L, M, N) en typen (L1, L2, M1, M2) die eerder zijn beschreven bij Ae. aegypti die bloed zuigen uit menselijke handen26, werden geïdentificeerd in de golfvormen die werden gegenereerd door Cx. tarsalis die bloed zuigen uit menselijke handen, wat de validiteit van de hier beschreven methoden bevestigt. Daarnaast werden drie nieuwe golfvormtypen (M3, N1, N2) en talrijke subtypen van L1, L2, M1 en M2 geïdentificeerd27. Verder werd de spanningsval terug naar de basislijn wanneer de monddelen uit de gastheer worden teruggetrokken, benoemd als golfvormfamilie W27.
Door de instrumentinstellingen (stroomtype en Ri-niveaus) systematisch te variëren terwijl de hier beschreven procedures werden gevolgd, konden de optimale instellingen worden bepaald voor het registreren van Cx. tarsalis die zich voedden aan menselijke handen, de elektrische oorsprong van elke golfvorm, de gemiddelde duur in seconden van volledige en onvolledige sondages per mug, en voor de statistische vergelijking van de golfvormduur in seconden per insect (WDI), het aantal golfvormgebeurtenissen per insect (NWEI) en de golfvormduur in seconden per gebeurtenis per insect (WDEI) over de verschillende instellingen27. Muggen werden daarnaast onderbroken tijdens verschillende golfvormen en gedissekeerd om te bepalen welke golfvorm correleerde met bloedopname27. Een soortgelijk onderzoek werd uitgevoerd voor Ae. aegypti met gebruik van een vergelijkbare methodologie26.
Vanwege de gevoelige en complexe aard van EPG waren niet alle opnames zo zuiver als die getoond in Figuur 4. Oversturing (Figuur 3A,C), wijzigingen in de hardwareversterking (Figuur 3A,C), gebrekkige bedrading (Figuur 3B), rectifier-foldover in golfvorm J (Figuur 3C,C') en elektrische ruis (Figuur 3C,C') veroorzaakten af en toe vervormingen en maskeerden de golfvormen, waardoor ze ongeschikt waren voor gebruik in figuren van publicatiekwaliteit en de scoring en analyse bemoeilijkten. Daarom wordt aanbevolen om vooraf tijd te investeren in het perfectioneren van de bedradingsvaardigheden, het optimaliseren van de versterkings- en spanningsinstellingen, het aanpassen van de offset en het beheersen van elektrische ruis. Interessant is dat rectifier-foldover alleen werd waargenomen in golfvormfamilie J voor Cx. tarsalis (Figuur 3C,C') en niet meer voorkwam zodra de offset aanvankelijk was aangepast, zelfs wanneer andere muggensoorten (Ae. aegypti en Culex quinquefasciatus) werden gebruikt (gegevens niet getoond). Daarnaast bleek uit probleemopsporing dat de ongecontroleerde elektrische ruis getoond in Figuur 3 (panelen C en C') het gevolg was van een defecte kooi van Faraday. De opnames gemaakt in de defecte kooi van Faraday waren nog steeds bruikbaar, maar de ruisproblemen werden opgelost toen er een verbeterde kooi van Faraday werd gebouwd (Figuur 1B).
Zelfs wanneer alle voorzorgsmaatregelen en front-end optimalisaties waren doorgevoerd, maakten lichte variaties in de kwaliteit van de elektrodebevestiging aan de mug en andere onbekende factoren die het signaal vervormden en de signaal-ruisverhouding beïnvloedden, het periodiek noodzakelijk om de hardwareversterking tijdens de opname aan te passen. Dit was nodig om te garanderen dat het signaal zich binnen het zichtbare bereik bevond en dat de resolutie van de pieken in elke golfvorm voldoende was voor de identificatie en karakterisering van de golfvorm. Helaas kan het aanpassen van de hardwareversterking tijdens de opname leiden tot abrupte spanningsverschuivingen (Figuur 3A, C), waardoor de golfvormen ongeschikt zijn voor publicatie, maar nog wel bruikbaar (geheel of gedeeltelijk) voor meting en analyse.
<img alt="Statische evenwichtdiagrammen die krachtanalyse tonen; grafieken markeren de vergelijkingen ΣFx=0, ΣFy=0." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66877/66877fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Figuur 4"> 
Figuur 4: Representatieve golfvormen van een Culex tarsalis-sonde op een menselijke hand, geregistreerd met een Ri van 107 Ω met gebruik van een aangelegd signaal van 250 mV AC.Golfvormnamen op familieniveau (NP, J, K, L, M, W) worden bovenaan elk paneel weergegeven. De onderste panelen tonen vergrotingen van geselecteerde regio's in paneel A. Ingezette panelen tonen vergrotingen van aangegeven regio's. Tijdschalen en softwareversterkingen zijn (A) 7,0 s/div, 16x; (B) 1,0 s/div, 64x; (B') 0,2 s/div, 64x; (C) 1,0 s/div, 64x; (C') 0,2 s/div, 32x; (D) 1,0 s/div, 64x; (D') 0,2 s/div, 64x. Afkortingen: AC = wisselstroom, Ri = ingangsweerstand, mV = millivolt, Ω = Ohm, s/div = seconden per divisie. Deze figuur is opgesteld met gegevens van Cooper et al.27. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66877/66877fig04large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>

Procedures worden beschreven voor het bestuderen van het sonderende en innamegedrag van Culex tarsalis muggen op menselijke handen met behulp van AC-DC elektropenetragrafie.

AC-DC Electropenetrografie voor de studie van sonderend en innamegedrag van Culex tarsalis muggen op mensenhanden

Mosquitoes transmit pathogens that negatively affect human and animal health. A greater understanding of their blood-feeding biology and interactions with ...

ac-dc-electropenetrography-for-study-probing-ingestion-behaviors

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Elektrofysiologische reacties van olfactorische sensorische neuronen aan geurstoffen kan worden gemeten bij insecten met behulp van enkele sensillum opnames. In deze video artikel zullen we laten zien hoe je een sensillum opnamen in de antennes van de azijn fly uit te voeren...

Single Sensillum Opnamen in de Insecten Drosophila melanogaster En Anopheles gambiae</em

Werkwijze snel scherm waardplant vluchtige door meting van de elektrofysiologische reactie van volwassen navel orangeworm...

Electroantennographic Bioassay als een screeningsinstrument voor Host Plant Vluchtige stoffen

Met twee methodologie om genexpressie in grote smaak aanhangsels van Aedes aegypti, hebben we de set genen vermoedelijk onderliggende neuronale reacties op bitter en afstotende verbindingen geïdentificeerd, zoals bepaald door elektrofysiologische onderzoeken.

Fysiologische Recordings en RNA Sequencing van de Smaak Appendages van de Gele-koorts Mosquito Aedes aegypti

Voor een efficiënte controle van mug virusverspreiding gedragen, is de kennis van het potentieel van de vector van respectieve muggen van bijzonder belang. Beschrijven we gedwongen speekselvloed als een methode voor het analyseren van vector bevoegdheid van Aedes albopictus en drie verschillende Culex taxa voordeoverdracht van Zika-virus.

Gedwongen speekselvloed als een methode voor het analyseren van Vector bevoegdheid van muggen

Het gepresenteerde protocol kan de vectorcompetentie van Aedes aegypti-muggenpopulaties voor een bepaald virus, zoals Zika, in een containmentomgeving bepalen.

Vectorcompetentieanalyses op Aedes aegypti-muggen met behulp van het Zika-virus

Dit protocol schetst methodologieën achter de Ramsay-assay, ionselectieve micro-elektroden, Scanning Ion-selective Electrode Technique (SIET) en in vitro contractie-assays, toegepast om het uitscheidingssysteem van volwassen muggen te bestuderen, bestaande uit de Malpighian tubuli en hindgut, om gezamenlijk ionen- en vloeistofsecretiesnelheden, contractiele activiteit en transepitheliaal ionentransport te meten.

Het bestuderen van de activiteit van neuropeptiden en andere regulatoren van het uitscheidingssysteem in de volwassen mug

Het huidige artikel beschrijft een stap-voor-stap protocol voor succesvolle en geluidsarme elektroantennogrammen in verschillende geslachten van muggen, waaronder zowel vrouwtjes als mannetjes.

Een stapsgewijze handleiding voor muggenelektroantennografie

Kwantitatief en gecontroleerd onderzoek naar het bijtgedrag van insecten is cruciaal voor het bedenken van effectieve strategieën om door vectoren overgedragen ziekten te bestrijden. In deze context wordt een methode geïntroduceerd voor het vervaardigen van een biohybride atoomkrachtmicroscopie (AFM) sonde.

Ontwikkeling van een bio-hybride Mosquito Stinger-gebaseerde atoomkrachtmicroscopiesonde

Het testen van visuele gevoeligheid bij hagedissen met behulp van een operante conditionering paradigma dat het afspelen van video van de random-dot kinematograms en computer-gegenereerde ongewervelde dieren in dienst heeft.

Het testen van visuele gevoeligheid voor de snelheid en richting van de beweging in Lizards

Computer-gegenereerde prikkels met behulp van de Jacky draak als een model.

Door de computer gegenereerde Animal Model Stimuli

Leer AC-DC elektropenetrografie om sondeer- en opnamegedrag van Culex tarsalis muggen op mensenhanden te bestuderen. Deze niet-invasieve methode onthult mechanistische inzichten voor vectorbeheersstrategieën.

AC-DC Electropenetrografie voor de studie van sonderend en innamegedrag van Culex tarsalis muggen op mensenhanden

Meer video's verkennen