De onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van cumulus-eicelcomplexen: een verfijnde aanpak voor snelle observatie van in-vitrofertilisatie

Ons onderzoek richt zich op het verbeteren van IVF-resultaten door te evalueren of onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van cumulus-eicelkompressen de bevruchting verbetert. De efficiëntie van observatie heeft invloed op de bevruchtingsrace en de kwaliteit van het embryo en optimaliseert laboratoriumprocedures. We streven ernaar IVF-technieken te verfijnen voor betere klinische resultaten.

We hebben vastgesteld dat bij mediale gedeeltelijke verwijdering van cumulus eicelkompressen de efficiëntie van bevruchtingsobservatie bij IVF aanzienlijk verbetert. Dit leidt tot een betere timing bij het beoordelen van bevruchtingsgebeurtenissen en optimaliseert mogelijk de embryokwaliteit en IVF-resultaten. Ons protocol verbetert de IVF-efficiëntie door de hand-in-tijd te verkorten en de blootstelling aan het milieu te minimaliseren en mogelijk de embryokwaliteit te verbeteren.

Het biedt een gestroomlijnde en effectieve aanpak in vergelijking met traditionele technieken. Plaats om te beginnen de eicelopraapschaaltjes een nacht in de broedmachine bij 37 graden Celsius. Incubeer 12 milliliter follikelmanipulerend medium in 14 milliliter reageerbuisjes met ronde bodem bij 37 graden Celsius 's nachts.

Breng de buisjes vervolgens 30 minuten voor het ophalen van de eicel over naar het voorverwarmde reageerbuisrek. Voeg vervolgens negen milliliter follikelmanipulerend medium toe aan een reageerbuis van 14 milliliter met ronde bodem en incubeer deze een nacht bij 37 graden Celsius. Breng op de dag van het ophalen van de eicel 4,5 milliliter van het medium over naar een voorbebroede eicel-opraapschaal bedekt met twee milliliter 100% paraffineolie.

Voeg vervolgens 4,5 milliliter bevruchtingsmedium toe aan een eicel-opraapschaal en broed een nacht bij 37 graden Celsius. Voeg daarna een milliliter bemestingsmedium toe aan een schaal van zes centimeter bedekt met 100% paraffineolie. Om de punten van de glazen pasteurpipetten bot te maken en af te ronden, brandt u ze ongeveer vijf seconden op een alcohollamp.

Bevestig een zuigkop aan de punt van de pasteurpipetten zodat deze de bodem van de schaal kan raken zonder te krassen. Spoel het glas langs uw pipetten in schaaltjes van 10 centimeter met follikelmanipulatiemedium. Gebruik in het kort een naald van 17 gauge om de eicellen op te halen onder transvaginale echografie.

Giet het follikelvocht dat is verzameld in de reageerbuis met ronde bodem van 14 milliliter in een schaaltje van 10 centimeter. Plaats de schaal op een platform met constante temperatuur. Observeer de OCCC onder een stereomicroscoop om de aanwezigheid van eicellen te bevestigen en hun rijpheid te beoordelen.

Bevestig of er eicellen in het OCCC zijn en maak een voorlopige beoordeling van de rijping van de eicellen. Bereid een siliconen aspiratiepipet voor met een ronde, vlamgepolijste pasteurpipet. Zuig de OCCC aan terwijl u de cultuurschaal voorzichtig met de linker ringvinger optilt in de positie van negen tot 10:00 uur en deze ongeveer 15 graden naar links kantelt.

Tijdens het uitspugen van de aangezogen OCCC op de 11:00 positie van de schaal, schuift u deze voorzichtig horizontaal naar rechts. Observeer vervolgens de grootte van de granulosacellen rond de geëxpandeerde OCCC. Gebruik nu een pasteuspipet om overtollige granulosecellen voorzichtig te verwijderen met een snelle neerwaartse snede op de juiste plaats op de langwerpige OCCC.

Breng de gesneden OCCC over in een opvangschaaltje met OCCC-spoeloplossing. Giet de resterende follikelvloeistof in een steriele monstercontainer. Evalueer om te beginnen de spermaconcentratie, beweeglijkheid en morfologie van het verzamelde spermamonster onder een lichtmicroscoop.

Breng vervolgens de spermakorrel over in een nieuwe centrifugebuis en spoel deze twee keer in het bevruchtingsmedium. Incubeer ze bij 6% koolstofdioxide en 37 graden Celsius tot ze nodig zijn. Voeg na het verwijderen van overtollige granulosecellen zes tot acht OCCC en één milliliter bemestingsmedium toe aan de bemestingsschaal.

Inseminaat OCCC's met modale spermatozoa in een enkele druppel, ongeveer twee tot drie uur na het ophalen in de bevruchtingsschaal. Voor kortdurende bevruchting co-incubeer OCCC's met spermatozoa gedurende vier tot zes uur. Verwijder na de incubatie mechanisch de cumuluscellen die de eicellen omringen.

Zuig de eicellen op met behulp van een pipet met een binnendiameter die iets kleiner is dan de eicellen om volledige verwijdering van cellen te garanderen. Om de bevruchting te bevestigen, observeert u de aanwezigheid van twee poollichamen. Eicellen, die een tweede poollichaam vertonen, worden als bevrucht beschouwd.

Voor regelmatige bevruchting verwijdert u cumuluscellen met behulp van de pipetten na 18 tot 20 uur co-incubatie voor bevruchtingsbeoordeling. Kweek de bevruchte eicellen gedurende drie tot vijf dagen na het ophalen van de eicel. Beoordeel de bevruchting 20 uur na de inseminatie om het aantal pronuclei te bepalen.

Kweek vervolgens elke zygote afzonderlijk in een mediumdruppel en breng de embryo's na de bevruchting over naar een splitsingsmedium. Breng de embryo's van dag drie over naar het blastocytenmedium en evalueer op dag vijf. Rapporteer continue gegevens als het gemiddelde en de standaarddeviatie, en druk ordinale gegevens uit als verhoudingen.

Van de 47 patiënten die een kortdurende inseminatie kregen, werden geen significante verschillen waargenomen in termen van leeftijd van de patiënt en het aantal opgehaalde eicellen. De gemiddelde proceduretijd was significant korter bij de gedeeltelijke verwijdering van de OCC-groep, vergeleken met de controlegroep, ondanks dat er geen significante verschillen werden gevonden in de splitsingssnelheid, optimale embryosnelheid en optimale blastocytensnelheid. Bij patiënten die traditionele IVF ondergingen, werden overeenkomsten opgemerkt in de leeftijd van de patiënt en het aantal opgehaalde eicellen tussen de twee groepen.

Hoewel een iets kortere gemiddelde operatietijd werd waargenomen bij de gedeeltelijke verwijdering van de OCCC-groep, was er geen statistisch significant verschil duidelijk. Net als bij de vorige groep werden er geen significante discrepanties vastgesteld in de splitsingssnelheid, de optimale embryosnelheid en de optimale blastocytensnelheid.