Name: Identificatie van slapende cellen in een zebravis T-cel acute lymfoblastische leukemiemodel met behulp van celproliferatiekleuring (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-19T14:55:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Leer cell proliferatiekleuring voor het identificeren van slapende leukemiestamcellen in een zebravis T-ALL model. Deze methode helpt onderzoekers kwiescente cellen te isoleren voor verdere analyse en therapieontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Schatting van de LSC-frequentie in Zebrafish T-ALL met behulp van celproliferatiekleurstofsortering

<ol><li>Reya, T., Morrison, S. J., Clarke, M. F., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells%2C+cancer%2C+and+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Stem cells, cancer, and cancer stem cells.</a> Nature. 414 (6859), 105-111 (2001).</li>
<li>Arai, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tie2%2Fangiopoietin-1+signaling+regulates+hematopoietic+stem+cell+quiescence+in+the+bone+marrow+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tie2/angiopoietin-1 signaling regulates hematopoietic stem cell quiescence in the bone marrow niche.</a> Cell. 118 (2), 149-161 (2004).</li>
<li>Li, L., Bhatia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Stem cell quiescence.</a> Clin. Cancer Res. 17 (15), 4936-4941 (2011).</li>
<li>Kreso, A., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+cancer+stem+cell+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Evolution of the cancer stem cell model.</a> Cell Stem Cell. 14 (3), 275-291 (2014).</li>
<li>Chen, W., Dong, J., Haiech, J., Kilhoffer, M. -C., Zeniou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cell+quiescence+and+plasticity+as+major+challenges+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cell quiescence and plasticity as major challenges in cancer therapy.</a> Stem Cells Int. 2016, 1740936(2016).</li>
<li>Kleffel, S., Schatton, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+dormancy+and+cancer+stem+cells%3A+Two+sides+of+the+same+coin%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor dormancy and cancer stem cells: Two sides of the same coin.</a> Adv Exp Med Biol. 734, 145-179 (2013).</li>
<li>Tuy, K., Rickenbacker, L., Hjelmeland, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+produced+by+altered+tumor+metabolism+impacts+cancer+stem+cell+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species produced by altered tumor metabolism impacts cancer stem cell maintenance.</a> Redox Biol. 44, 101953(2021).</li>
<li>Zhou, B. -B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-initiating+cells%3A+Challenges+and+opportunities+for+anticancer+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Tumour-initiating cells: Challenges and opportunities for anticancer drug discovery.</a> Nat Rev Drug Discov. 8 (10), 806-823 (2009).</li>
<li>Lyons, A. B., Blake, S. J., Doherty, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+analysis+of+cell+division+by+dilution+of+cfse+and+related+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cytom%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric analysis of cell division by dilution of cfse and related dyes.</a> Curr Protoc Cytom. 64 (1), 11-12 (2013).</li>
<li>Lyons, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysing+cell+division+in+vivo+and+in+vitro+using+flow+cytometric+measurement+of+cfse+dye+dilution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Analysing cell division in vivo and in vitro using flow cytometric measurement of cfse dye dilution.</a> J Immunol Methods. 243 (1-2), 147-154 (2000).</li>
<li>Azari, H., Deleyrolle, L. P., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+carboxy+fluorescein+succinimidyl+ester+%28cfse%29+to+identify+quiescent+glioblastoma+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse) to identify quiescent glioblastoma stem-like cells.</a> Methods Mol Biol. 1686, 59-67 (2018).</li>
<li>Deleyrolle, L. P., Rohaus, M. R., Fortin, J. M., Reynolds, B. A., Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+isolation+of+slow-dividing+cells+in+human+glioblastoma+using+carboxy+fluorescein+succinimidyl+ester+%28cfse%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse).</a> J Vis Exp. (62), e3918(2012).</li>
<li>Ebinger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+rare%2C+dormant%2C+and+therapy-resistant+cells+in+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Characterization of rare, dormant, and therapy-resistant cells in acute lymphoblastic leukemia.</a> Cancer Cell. 30 (6), 849-862 (2016).</li>
<li>Langenau, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myc-induced+t+cell+leukemia+in+transgenic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Myc-induced t cell leukemia in transgenic zebrafish.</a> Science. 299 (5608), 887-890 (2003).</li>
<li>Blackburn, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+evolution+enhances+leukemia-propagating+cell+frequency+in+t+cell+acute+lymphoblastic+leukemia+through+akt%2Fmtorc1+pathway+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Clonal evolution enhances leukemia-propagating cell frequency in t cell acute lymphoblastic leukemia through akt/mtorc1 pathway activation.</a> Cancer Cell. 25 (3), 366-378 (2014).</li>
<li>Al-Hamaly, M. A., Turner, L. T., Rivera-Martinez, A., Rodriguez, A., Blackburn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+cancer+avatars%3A+A+translational+platform+for+analyzing+tumor+heterogeneity+and+predicting+patient+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish cancer avatars: A translational platform for analyzing tumor heterogeneity and predicting patient outcomes.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2288(2023).</li>
<li>Blackburn, J. S., Liu, S., Langenau, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+the+frequency+of+tumor-propagating+cells+using+limiting+dilution+cell+transplantation+in+syngeneic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantifying the frequency of tumor-propagating cells using limiting dilution cell transplantation in syngeneic zebrafish.</a> J Vis Exp. (53), e2790(2011).</li>
<li>Borga, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+b+and+t+cell+acute+lymphoblastic+leukemias+in+zebrafish+driven+by+transgenic+myc%3A+Implications+for+oncogenesis+and+lymphopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Simultaneous b and t cell acute lymphoblastic leukemias in zebrafish driven by transgenic myc: Implications for oncogenesis and lymphopoiesis.</a> Leukemia. 33 (2), 333-347 (2019).</li>
<li>Hu, Y., Smyth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elda%3A+Extreme+limiting+dilution+analysis+for+comparing+depleted+and+enriched+populations+in+stem+cell+and+other+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Elda: Extreme limiting dilution analysis for comparing depleted and enriched populations in stem cell and other assays.</a> J Immunol Methods. 347 (1-2), 70-78 (2009).</li>
<li>Bhojwani, D., Pui, C. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relapsed+childhood+acute+lymphoblastic+leukaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncol%22%5BJournal%5D)">Relapsed childhood acute lymphoblastic leukaemia.</a> Lancet Oncol. 14 (6), e205-e217 (2013).</li>
<li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (1), 35-44 (2005).</li>
<li>Al-Hamaly, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+drug+screening+identifies+erlotinib+as+an+inhibitor+of+wnt%2F%CE%B2-catenin+signaling+and+self-renewal+in+t-cell+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Zebrafish drug screening identifies erlotinib as an inhibitor of wnt/β-catenin signaling and self-renewal in t-cell acute lymphoblastic leukemia.</a> Biomed Pharmacother. 170, 116013(2024).</li>
<li>Yan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+engrafted+human+cancer+and+therapy+responses+in+immunodeficient+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Visualizing engrafted human cancer and therapy responses in immunodeficient zebrafish.</a> Cell. 177 (7), 1903-1914 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>26 G/2&rdquo; micro-syringe</td><td>Hamilton</td><td>87930</td><td>NA</td></tr><tr><td>35 &micro;m filter cap FACS tubes</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td>NA</td></tr><tr><td>40 &micro;m cell strainer</td><td>CELLTREAT</td><td>229482</td><td>NA</td></tr><tr><td>96-well skirted PCR plate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AB0800</td><td>NA</td></tr><tr><td>Cell sorter</td><td>Sony Biotechnology</td><td>SY3200</td><td>NA</td></tr><tr><td>CellTrace Far Red</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C34564</td><td>NA</td></tr><tr><td>Conical tubes</td><td>VWR</td><td>10026-078</td><td>NA</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62248</td><td>NA</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4818</td><td>NA</td></tr><tr><td>Dulbecco'sPhosphate-buffered saline (PBS)</td><td>Caisson Labs</td><td>22110001</td><td>NA</td></tr><tr><td>Epifluorescence stereo microscope</td><td>Nikon</td><td>SMZ25</td><td>NA</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12306C</td><td>NA</td></tr><tr><td>Fish system water</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>0,03-0,05% zoutgehalte, pH 6,5-8, gebufferd met natriumbicarbonaat</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C2171</td><td>NA</td></tr><tr><td>MS-222</td><td>Pentaire</td><td>TRS-1</td><td>tricaine mesylaat, een verdovingsmiddel</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td>Corning</td><td>07-202-011</td><td>NA</td></tr><tr><td>Razor blades</td><td>American Line</td><td>66-0089</td><td>NA</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T10282</td><td>NA</td></tr></tbody></table>

identificatie van slapende cellen in een zebravis t-cel acute lymfoblastische leukemiemodel met behulp van celproliferatiekleuring 

Identification of Quiescent Cells in a Zebrafish T-Cell Acute Lymphoblastic Leukemia Model Using Cell Proliferation Staining

Identificatie van slapende cellen in een zebravis T-cel acute lymfoblastische leukemiemodel met behulp van celproliferatiekleuring 

Cellular quiescence is a state of growth arrest or slowed proliferation that is described in normal and cancer stem cells (CSCs). Quiescence may protect ...

identification-quiescent-cells-zebrafish-t-cell-acute-lymphoblastic

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Beperkende verdunning celtransplantatie assays worden gebruikt om de frequentie van de tumor voortplantende cellen te bepalen. Dit protocol beschrijft een methode voor het genereren van syngene zebravis dat fluorescent-gelabeld leukemie en details over hoe te isoleren en deze leukemie cellen transplantatie op het beperken van verdunning in de buikholte van de volwassen zebravissen ontwikkelen.

Het kwantificeren van de Frequentie van Tumor voortplantende cellen met behulp van beperkte verdunning Cell Transplantation in syngene zebravis

This protocol describes the technique of isolating fluorescently labeled T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) tumor cells from an adult zebrafish and quantifying them using trypan blue dye.

Fluorescently Labeled T-ALL Cells Isolation: A Method to Isolate T-ALL Cells from Adult Zebrafish

The following protocol describes a method for isolating the side population of T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia (T-ALL) tumor cells, consisting of stem cells, from an adult Zebrafish. The side population lacks prominent cell markers and hence we use Hoechst 33342 dye efflux assay to isolate them.

Side Population Assay: A Method to Isolate Side Population of Tumor Cells from Zebrafish

Hier beschrijven we een techniek om de zijkant populatie cellen te isoleren uit een zebravis model van myc-geïnduceerde T-cel acute lymfoblastische leukemie (T-ALL). Deze side population test is zeer gevoelig en beschreven voor zebravis T-ALL, maar kan toepasbaar zijn op andere maligne en niet-maligne types zebravis cel.

Isolatie van de side population in Myc-geïnduceerde T-cel acute lymfatische leukemie in zebravis

Transgene lck:eGFP zebrafish express GFP zeer in T lymfocyten en zijn gebruikt voor het bestuderen van de T cel ontwikkeling en acute lymfatische leukemie. Deze regel kan worden gebruikt voor studie B-cellen, die lck op lagere niveaus uitdrukken. Dit protocol beschrijft zuivering van kwaadaardige en niet-kwaadaardige B-cellen uit lck:eGFP zebrafish.

Malignant en Non-Malignant B cellen isoleren uit lck:eGFP zebravis

Hier bieden we een stapsgewijs protocol, met tips om xenograften te genereren en richtlijnen voor tumorgedragsanalyse, whole-mount immunofluorescentie en confocale beeldvorming kwantificering.

Generatie zebravislarven xenografts en tumorgedragsanalyse

Dit protocol biedt stapsgewijze instructies voor het genereren en oplossen van problemen met xenotransplantaten voor acute lymfatische leukemie (ALL) bij de mens uit cellijnen en vers patiëntenmateriaal in kortstondig immunosuppressie-zebravisembryo's, samen met richtlijnen voor de beoordeling van de geneesmiddelrespons met behulp van flowcytometrie. De experimentele pijplijn kan ook worden aangepast voor solide tumoren.

Snelle in vivo voorspelling van geneesmiddelrespons met behulp van leukemieceltransplantaten in zebravisembryo's

Detectie van minimale of meetbare residuele ziekte (MRD) is een belangrijke voorspellende biomarker voor risico-evaluatie te verfijnen en het voorspellen van herval in acute myeloïde leukemie (AML). Deze uitgebreide richtlijnen en aanbevelingen met de best practices voor consistente en accurate identificatie en opsporing van MRD, kan steun bij het maken van effectieve AML behandelingsbeslissingen.

Uitgebreide Protocol bij monster en proces beenmerg voor het meten van meetbare residuele ziekte en leukemische cellen van de stam in Acute myeloïde leukemie

Dit protocol beschrijft het gebruik van centrifugaal elutriation te scheiden van primaire acute lymfatische leukemie cellen in verschillende celcyclus fasen.

Voorbereiding van primaire Acute lymfatische leukemie cellen in verschillende celcyclus fasen door centrifugaal Elutriation

Duidelijk naar voren komt een protocol voor het detecteren van gelijktijdige uitdrukking van leukemie stamcel merkers op primaire acute myeloïde leukemie cellen door stroom cytometry. We laten zien hoe te kwantificeren drie voorlopercellen populaties en een vermeende LSC bevolking met de toenemende mate van rijping. We hebben bevestigd dat de aanwezigheid van deze populaties in overeenkomstige patiënt-afgeleid-xenografts.

Stroom Cytometry om te schatten leukemie cellen van de stam in primaire Acute myeloïde leukemie en patiënt-afgeleid-xenografts, bij diagnose en Follow Up

Leer cell proliferatiekleuring voor het identificeren van slapende leukemiestamcellen in een zebravis T-ALL model. Deze methode helpt onderzoekers kwiescente cellen te isoleren voor verdere analyse en therapieontwikkeling.

Identificatie van slapende cellen in een zebravis T-cel acute lymfoblastische leukemiemodel met behulp van celproliferatiekleuring (Video) | JoVE Journal

Identificatie van slapende cellen in een zebravis T-cel acute lymfoblastische leukemiemodel met behulp van celproliferatiekleuring

Meer video's verkennen