Operationele en biocontainmentprocedures van een faciliteit voor laboratoriummuizen met een natuurlijk microbioom: immunofenotyperingsprocedure

We onderzoeken de effecten van voeding op het immuunsysteem. En we zijn vooral geïnteresseerd in de anti-verouderings- en ontstekingsremmende effecten van calorierestrictie en vastenregimes en de rol van de microbiota in deze processen. Wildling muizen combineren de goed gekarakteriseerde genetische achtergrond van laboratoriummuizenstammen en de natuurlijke microbioom van vrij rondlopende muizen.

Het natuurlijke microbioom van deze wildling muizen bevat echter virussen, bacteriën en ook parasieten, en vormt daarom een uitdaging voor dierenhouderijfaciliteiten. De bijdrage van het QUEST Center for Responsible Research was de ontwikkeling van het zes R-raamwerk, dat de drie Rs die we kennen van Russell en Burch, vervanging, verfijning en reductie, versterkt door drie extra Rs robuustheid, registratie en rapportage te integreren. Dit raamwerk is gericht op het verbeteren van de reproduceerbaarheid en transparantie van preklinisch onderzoek.

En de idee is dat experimentele bevindingen betrouwbaarder, geloofwaardiger en uiteindelijk vertaalbaar zijn naar klinische contexten. In de afgelopen vier jaar hebben we het concept van een faciliteit voor wildling muizen ontwikkeld met specifieke biocontainmentprocedures. We willen onze expertise delen met onderzoekers om hen in staat te stellen muizen met een natuurlijk microbioom in hun werk op te nemen.

Beroertes komen het meest voor bij oudere mensen. Het immuunsysteem heeft geheugencellen van het bestrijden van besmettelijke deeltjes en het leven met een heterogene microbiota. Daarom is het modelleren van beroertes bij wildling muizen een verfijnd model bij knaagdieren dat de omstandigheden van patiënten beter weerspiegelt.

Na het omkleden in werkbroek, kozak en wegwerpschoenhoezen, verwijder schoenen en sokken in de wachtkamer van de luchtdouche. Trek werksokjes aan en volledig persoonlijk beschermingsmateriaal, inclusief Tyvek-overalls, haarnet, katoenen handschoenen, nitrilhandschoenen en mondkapjes. Betreed de luchtdouche met werksokjes via de zelfklevende vloerbedekking.

Tijdens het luchtdoucheproces, hef uw armen op en voer een 360-graden draai uit. Verlaat de luchtdouche en trek werkschoenen aan aan de andere kant. Breng de muis over vanuit zijn kamer in een gesloten, individueel geventileerde kooi naar de procedureruimte.

Plaats de verdoofde muis buikligging op de gedesinfecteerde tafel en grijpt de scruff van zijn nek om de halsaders te comprimeren. Grijp met één hand de kop van de muis met duim en wijsvinger vast. Plaats een nieuw capillair in de mediale canthus van het oog onder het nictitansmembraan in een hoek van 45 graden.

Roteer het capillair axiaal door het sinusmembraan aan de achterkant van de baan tot bloed begint te stromen. Verzamel minimaal 15 microliters bloed in een bloedafnamebuisje met een druppel EDTA. Verslap de greep op de scruff van de nek voordat u het capillair verwijdert om bloeding in het weefsel te minimaliseren.

Gebruik een schone gaaskompres of wattenstaafje om het bloeden te stoppen en zorg voor hemostase. Draai de buis lichtjes om het bloed en EDTA te mengen zonder te schudden en bewaar het bloedmonster op ijs. Na het voltooien van de bloedafname, verwissel handschoenen en desinfecteer alle materialen en oppervlakken.

Trek nieuwe beschermende kleding aan in de toegangslaminaire luchtstroom, of LAF, gelegen voor de LAF-cabine. Desinfecteer de monstercontainers en verwijder ze via de schuifdeur in de glazen muur van de LAF-cabine. Na het overbrengen van de monstercontainers naar persoon twee, desinfecteer alle oppervlakken.

Ontvang gedesinfecteerde monstercontainers uit het wildling-gebied zonder direct contact via de schuifdeur in de glazen muur van de LAF-cabine. Gooi daarna wegwerpoveralls en werkschoenen weg in het aangewezen gebied. Gooi het haarnet, de rubberen handschoenen en het mondkapje weg.

Betreed de luchtdouche onmiddellijk in werksokjes. Hef je armen op en voer een 360-graden draai uit tijdens het luchtdoucheproces. Verlaat de luchtdouche en plaats werksokjes in de wasverzamelaar.

Trek persoonlijke sokken, schoenen en wegwerpschoenhoezen aan. Leg werkkleding in de kleedkamer wasverzamelaar en verander in normale kleding.