Name: Dissectie van eierstokken, middendarm en speekselklieren van muggen voor microbioomanalyses op orgaanniveau (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:25:00.000+00:00
Duration: 3 min 58 s
Description: Leer dissectietechnieken voor eierstokken, middendarm en speekselklieren van vrouwelijke muggen. Deze methode voorkomt kruisbesmetting en maakt metagenomische analyse van microbiomen op orgaanniveau mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Zeer nauwkeurige isolatie van muggenorganen voor microbioomanalyses

<ol><li>Achee, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+strategies+for+mosquito-borne+arbovirus+control%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Alternative strategies for mosquito-borne arbovirus control.</a> PLOS Negl Trop Dis. 13 (1), e0006822(2019).</li>
<li>Hoffmann, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+establishment+of+Wolbachia+in+Aedes+populations+to+suppress+dengue+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Successful establishment of Wolbachia in Aedes populations to suppress dengue transmission.</a> Nature. 476 (7361), 454-457 (2011).</li>
<li>Porter, J., Sullivan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+lives+of+Wolbachia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The cellular lives of Wolbachia.</a> Nat Rev Microbiol. 21 (11), 750-766 (2023).</li>
<li>Coon, K. L., Brown, M. R., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquitoes+host+communities+of+bacteria+that+are+essential+for+development+but+vary+greatly+between+local+habitats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ecol%22%5BJournal%5D)">Mosquitoes host communities of bacteria that are essential for development but vary greatly between local habitats.</a> Mol Ecol. 25 (22), 5806-5826 (2016).</li>
<li>Didion, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiome+reduction+prevents+lipid+accumulation+during+early+diapause+in+the+northern+house+mosquito%2C+Culex+pipiens+pipiens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Microbiome reduction prevents lipid accumulation during early diapause in the northern house mosquito, Culex pipiens pipiens.</a> J Insect Physiol. 134, 104295(2021).</li>
<li>Gabrieli, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+trilogy%3A+Microbiota%2C+immunity+and+pathogens%2C+and+their+implications+for+the+control+of+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Mosquito trilogy: Microbiota, immunity and pathogens, and their implications for the control of disease transmission.</a> Front Microbiol. 12, 630438(2021).</li>
<li>Garrigós, M., Garrido, M., Panisse, G., Veiga, J., Martínez-de La Puente, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+West+Nile+Virus+and+the+microbiota+of+Culex+pipiens+vectors%3A+A+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Interactions between West Nile Virus and the microbiota of Culex pipiens vectors: A literature review.</a> Pathogens. 12 (11), 1287(2023).</li>
<li>Zheng, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Holobiont+perspectives+on+tripartite+interactions+among+microbiota%2C+mosquitoes%2C+and+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+J%22%5BJournal%5D)">Holobiont perspectives on tripartite interactions among microbiota, mosquitoes, and pathogens.</a> ISME J. 17 (8), 1143-1152 (2023).</li>
<li>Flores, G. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wolbachia+dominance+influences+the+Culex+quinquefasciatus+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Wolbachia dominance influences the Culex quinquefasciatus microbiota.</a> Sci Rep. 13 (1), 18980(2023).</li>
<li>Hegde, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interkingdom+interactions+shape+the+fungal+microbiome+of+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Microbiome%22%5BJournal%5D)">Interkingdom interactions shape the fungal microbiome of mosquitoes.</a> Anim Microbiome. 6 (1), 11(2024).</li>
<li>Suo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+variation+of+midgut+bacterial+diversity+in+Culex+quinquefasciatus+populations+in+Haikou+city%2C+Hainan+province%2C+China%5BTitle%5D)+AND+%22Biology%22%5BJournal%5D)">Seasonal variation of midgut bacterial diversity in Culex quinquefasciatus populations in Haikou city, Hainan province, China.</a> Biology. 11 (8), 1166(2022).</li>
<li>Gruber-Vodicka, H. R., Seah, B. K. B., Pruesse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((phyloFlash%3A+Rapid+small-subunit+rRNA+profiling+and+targeted+assembly+from+metagenomes%5BTitle%5D)+AND+%22mSystems%22%5BJournal%5D)">phyloFlash: Rapid small-subunit rRNA profiling and targeted assembly from metagenomes.</a> mSystems. 5 (5), e00920-e00920 (2020).</li>
<li>Graña-Miraglia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spirochetes+isolated+from+arthropods+constitute+a+novel+genus+Entomospira+genus+novum+within+the+order+Spirochaetales%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Spirochetes isolated from arthropods constitute a novel genus Entomospira genus novum within the order Spirochaetales.</a> Sci Rep. 10 (1), 17053(2020).</li>
<li>Reveillaud, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Wolbachia+mobilome+in+Culex+pipiens+includes+a+putative+plasmid%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The Wolbachia mobilome in Culex pipiens includes a putative plasmid.</a> Nat Commun. 10 (1), 1051(2019).</li>
<li>Ghousein, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pWCP+is+a+widely+distributed+and+highly+conserved+Wolbachia+plasmid+in+Culex+pipiens+and+Culex+quinquefasciatus+mosquitoes+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+Commun%22%5BJournal%5D)">pWCP is a widely distributed and highly conserved Wolbachia plasmid in Culex pipiens and Culex quinquefasciatus mosquitoes worldwide.</a> ISME Commun. 3 (1), 40(2023).</li>
<li>Juma, E. O., Kim, C. -H., Dunlap, C., Allan, B. F., Stone, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culex+pipiens+and+Culex+restuans+egg+rafts+harbor+diverse+bacterial+communities+compared+to+their+midgut+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Parasit+Vectors%22%5BJournal%5D)">Culex pipiens and Culex restuans egg rafts harbor diverse bacterial communities compared to their midgut tissues.</a> Parasit Vectors. 13 (1), 532(2020).</li>
<li>Lee, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GToTree%3A+a+user-friendly+workflow+for+phylogenomics%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">GToTree: a user-friendly workflow for phylogenomics.</a> Bioinformatics. 35 (20), 4162-4164 (2019).</li>
<li>Parks, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complete+domain-to-species+taxonomy+for+bacteria+and+Archaea%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">A complete domain-to-species taxonomy for bacteria and Archaea.</a> Nat Biotechnology. 38 (9), 1079-1086 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alcohol 96&deg;</td><td>Fisher scientific</td><td>10332562</td><td></td></tr><tr><td>Binocular magnifier&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bleach</td><td>RAJA</td><td>145517</td><td>150 tabletten van 1,5 g</td></tr><tr><td>DNA prep kit</td><td>Illumina</td><td>Wordt geleverd door het MGX-sequencingplatform</td><td>Voorheen bekend als Nextera DNA Flex</td></tr><tr><td>DNA-RNA Shield (50 mL)</td><td>Zymo research</td><td>ZR1100-50</td><td>Conserveringsbuffer</td></tr><tr><td>DNeasy Blood and Tissue Kit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>69504</td><td>DNA-extractiekit</td></tr><tr><td>Filter tips 20 &micro;L</td><td>Starlab</td><td>S1120-3810</td><td></td></tr><tr><td>Filter tips 200 &micro;L</td><td>Starlab</td><td>S1120-8710</td><td></td></tr><tr><td>Filter tips 1000 &micro;L</td><td>Starlab</td><td>S1122-1730-C</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>FST (Fine Science Tools)</td><td>11252-20</td><td>Dumont Forceps #5</td></tr><tr><td>Library quantification kit</td><td>Roche</td><td>Wordt geleverd door het MGX-sequencingplatform</td><td>KAPA Library Quantification Kits</td></tr><tr><td>Micropipettes 2-20 &micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>6.291704</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes 20-200 &micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>6.291703</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes 100-1000 &micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>7.648488</td><td></td></tr><tr><td>Microscope slides&nbsp;</td><td>Epredia</td><td>J1800BMNZ</td><td>afmeting: 75 mm x 50 mm</td></tr><tr><td>Needles</td><td>Terumo</td><td>AN*2719R1</td><td></td></tr><tr><td>NGS kit&nbsp;</td><td>Agilent</td><td>Wordt geleverd door het MGX-sequencingplatform</td><td>Fragment Analyzer Systems HS Genomic DNA 50kb Kit</td></tr><tr><td>NovaSeq 6000</td><td>Illumina</td><td>Wordt geleverd door het MGX-sequencingplatform</td><td>Sequencer</td></tr><tr><td>PBS Phosphate Buffered Saline (Steriel)</td><td>Fisher scientific</td><td>10212990</td><td></td></tr><tr><td>Permanent zwarte marker</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriele Eppendorf&nbsp;</td><td>Dutscher</td><td>33871</td><td>1,5 mL</td></tr><tr><td>Steun voor naalden</td><td>FST (Fine Science Tools)</td><td>26016-12</td><td>Moria MC1 Pin Holder 12 cm</td></tr></tbody></table>

dissectie van eierstokken, middendarm en speekselklieren van muggen voor microbioomanalyses op orgaanniveau

Dissection of Mosquito Ovaries, Midgut, and Salivary Glands for Microbiome Analyses at the Organ Level

Dissectie van eierstokken, middendarm en speekselklieren van muggen voor microbioomanalyses op orgaanniveau

The global burden of mosquito-transmitted diseases, including malaria, dengue, West Nile, Zika, Usutu, and yellow fever, continues to increase, posing a ...

dissection-mosquito-ovaries-midgut-salivary-glands-for-microbiome

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Zodra een gen is geïdentificeerd als potentieel vuurvaste voor malaria, dient te worden geëvalueerd voor zijn rol in het voorkomen van Plasmodium besmettingen binnen de mug. Dit protocol illustreert hoe de mate van plasmodium infecties van muggen kunnen worden getest. De technieken voor de voorbereiding van de gametocyt cultuur, membraan voeden muggen menselijk bloed, en het testen van virale titers in de mug middendarm worden gedemonstreerd.

Protocol voor Plasmodium falciparum Infecties in Muggen en Infection Fenotype Bepaling

De mug middendarm en de speekselklieren zijn belangrijke in-en uitgangen voor vector ziekteverwekkers zoals Plasmodium falciparum en het dengue virus. Deze video toont de dissectie technieken voor het verwijderen van de middendarm en de speekselklieren van Aedes aegypti muggen.

Ontleding van Midgut en speekselklieren van de Ae. aegypti Muggen

Temporele en ruimtelijke genexpressie analyses moeten een cruciale rol in de functionele genomica. Whole-mount...

Hybridisatie<em&gt; In situ</em&gt; Van de speekselklieren, eierstokken, en embryo&#39;s van Vector Muggen

Source: Liu, X., et al. A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the dissection of the mosquito midgut to isolate gut bacteria. The midgut is extracted from the digestive tract, homogenized to release the bacteria, and plated on nutrient agar to culture bacterial colonies.

Isolation of Bacteria from the Mosquito Midgut

Een ribosomaal RNA (rRNA) uitputting protocol werd ontwikkeld om messenger RNA (mRNA) voor RNA-seq van de mug darm metatranscriptome verrijken. Voorbeeld specifieke rRNA probes die werden gebruikt om rRNA verwijderen via aftrekcircuit werden gemaakt van de mug en gut microben. Uitvoering van het protocol kan resulteren in de verwijdering van ongeveer 90-99% van rRNA.

Uitputting van ribosomaal RNA voor Mosquito Gut Metagenomic RNA-seq

Als gevolg van de opvallende gelijkenissen van de levenscyclus en de biologie van knaagdieren malariaparasieten voor menselijke malariaparasieten, knaagdieren malaria modellen zijn onmisbaar geworden voor malaria onderzoek. Hierin hebben we enkele van de belangrijkste technieken gestandaardiseerd die worden gebruikt in de fenotypische analyse van wild-type en transgene knaagdier malaria soorten.

Fenotypische analyse van knaagdieren malaria parasiet asexual en seksuele bloed stadia en muggen stadia

Dit artikel presenteert een protocol om het effect van individuele muggendarmbacteriën te onderzoeken, inclusief isolatie en identificatie van muggenmuisculivable microben, uitputting van muggendarmen en herintroduceren van een specifieke bacteriesoort.

Een bacteriële orale voedingstest met met antibiotica behandelde muggen

Gedetailleerd onderzoek naar muggenstadia van malariaparasieten is van cruciaal belang voor het ontwerpen van effectieve transmissieblokkeringsstrategieën. Dit protocol laat zien hoe infectieuze gametocyten effectief kunnen worden gekweekt en deze gametocyten vervolgens aan muggen kunnen worden gevoerd om muggenstadia van P. falciparumte genereren .

Plasmodium falciparum Gametocytencultuur en muggeninfectie door kunstmatige membraanvoeding

Dit protocol schetst methodologieën achter de Ramsay-assay, ionselectieve micro-elektroden, Scanning Ion-selective Electrode Technique (SIET) en in vitro contractie-assays, toegepast om het uitscheidingssysteem van volwassen muggen te bestuderen, bestaande uit de Malpighian tubuli en hindgut, om gezamenlijk ionen- en vloeistofsecretiesnelheden, contractiele activiteit en transepitheliaal ionentransport te meten.

Het bestuderen van de activiteit van neuropeptiden en andere regulatoren van het uitscheidingssysteem in de volwassen mug

De speekselklier van volwassen muggen (SG) is vereist voor de overdracht van alle door muggen overgedragen pathogenen naar hun menselijke gastheren, inclusief virussen en parasieten. Deze video toont een efficiënte isolatie van de SG's van de larvale (L4) stadium Anopheles gambiae muggen en de voorbereiding van de L4 SG's voor verdere analyse.

Dissectie en immunostaining van larvale speekselklieren van Anopheles gambiae muggen

Deze methodologie, die orale voeding en intrathoracale injectie-infectie omvatte, kon de invloed van midgut- en / of speekselklierbarrières op arbovirusinfectie effectief beoordelen.

Experimentele virale infectie bij volwassen muggen door orale voeding en micro-injectie

Leer dissectietechnieken voor eierstokken, middendarm en speekselklieren van vrouwelijke muggen. Deze methode voorkomt kruisbesmetting en maakt metagenomische analyse van microbiomen op orgaanniveau mogelijk.

Dissectie van eierstokken, middendarm en speekselklieren van muggen voor microbioomanalyses op orgaanniveau

Meer video's verkennen