Name: Spatiotemporele controle van eiwitactiviteit door optogenetische allosterische regulatie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:45:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Ontdek optogenetische methoden voor ruimtelijk-temporele controle van eiwitactiviteit met behulp van LightR en Src kinase. Deze techniek biedt inzicht in cellulaire signaalprocessen en ondersteunt preklinisch onderzoek naar ziektes.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Optogenetische controle van enzymactiviteit met behulp van lichtgereguleerde allosterische schakelaar

<table><tbody><tr><td>#1.5 Glass Coverslips 25 mm Round</td><td>Warner Instruments&nbsp;</td><td>64-0715&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL Tubes&nbsp;</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>cc7682-3394</td><td></td></tr><tr><td>2x Laemmli Buffer</td><td></td><td></td><td>Voor 500 mL: 5,18 g van&nbsp; Tris-HCL, 131,5 mL glycerol, 52,5 mL van 20% SDS, 0,5 g bromofenolblauw, eind-pH 6,8</td></tr><tr><td>4-20% Mini-PROTEAN TGX Precast Gel</td><td>Biorad</td><td>4561096</td><td></td></tr><tr><td>5x Phusion Plus Buffer&nbsp;</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>F538L</td><td></td></tr><tr><td>60 LED Microscoop Ring Light</td><td>Boli Optics</td><td>ML46241324</td><td>Blauwe LED, 60 mm diameter, 5 W</td></tr><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>GoldBiotech</td><td>A-201</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Erk 1/2 Antilichaam</td><td>Cell Signaling</td><td>9102</td><td></td></tr><tr><td>Anti-GAPDH Antilichaam</td><td>invitrogen</td><td>AM4300</td><td></td></tr><tr><td>Anti-GFP</td><td>Clontech</td><td>632380</td><td></td></tr><tr><td>Anti-mCherry Antilichaam</td><td>invitrogen</td><td>M11217</td><td></td></tr><tr><td>Anti-MEK</td><td>Cell Signaling</td><td>9122</td><td></td></tr><tr><td>Anti-p130Cas</td><td>BD Biosciences</td><td>610271</td><td></td></tr><tr><td>Anti-paxillin</td><td>Cell Signaling</td><td>2542</td><td></td></tr><tr><td>Anti-phospho-Erk 1/2 T202/Y204 Antilichaam</td><td>Cell Signaling</td><td>9101</td><td></td></tr><tr><td>Anti-phospho-pY249 p130Cas</td><td>Cell Signaling</td><td>4014</td><td></td></tr><tr><td>Anti-phospho-Y118 Paxillin</td><td>Cell Signaling</td><td>2541</td><td></td></tr><tr><td>Anto-phospho-S217/221 MEK</td><td>Cell Signaling</td><td>9121</td><td></td></tr><tr><td>Arduino Compatible Voeding</td><td>Corporate Computer</td><td>LJH -186</td><td></td></tr><tr><td>Arduino Uno Rev3</td><td>Arduino</td><td>&lrm;A000066</td><td></td></tr><tr><td>Attofluor Cell Chamber</td><td>invitrogen</td><td>A7816</td><td></td></tr><tr><td>Benchmark Fetal Bovine Serum (FBS)&nbsp;</td><td>Gemini Bio-products</td><td>100-106</td><td>Heat Inactivated Triple 0,1 &micro;m sterieel gefilterd&nbsp;</td></tr><tr><td>bRaf-V600E-Venus</td><td></td><td></td><td>Gift van Dr. John O'Bryan, MUSC</td></tr><tr><td>BSA&nbsp;</td><td>GoldBiotech</td><td>A-420&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Carbenicillin (Disodium)</td><td>Gold Biotechnology</td><td>C-103-25</td><td></td></tr><tr><td>CellMask Deep Red plasma membraandye</td><td>invitrogen</td><td>c10046</td><td></td></tr><tr><td>Colony Screen MasterMix&nbsp;</td><td>Genesee</td><td>42-138</td><td></td></tr><tr><td>DH5a competent cellen&nbsp;</td><td>NEB&nbsp;</td><td>C2987H</td><td></td></tr><tr><td>DMEM&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>15-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>DNA Ladder&nbsp;</td><td>GoldBio&nbsp;</td><td>D010-500</td><td></td></tr><tr><td>dNTPs&nbsp;</td><td>NEB</td><td>N04475</td><td></td></tr><tr><td>Dpn1 Enzym&nbsp;</td><td>NEB</td><td>R01765</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>GoldBio</td><td>DTT10</td><td>DL-Dithiothreitol, Cleland's Reagents&nbsp;</td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Acros&nbsp;</td><td>409910250</td><td></td></tr><tr><td>FastLightR-bRaf-mVenus</td><td>Addgene</td><td>#162155</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectin van bovien plasma&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>FuGENE(R) 6 Transfectie Reagens&nbsp;</td><td>Promega</td><td>E2692</td><td>Transfectiereagens</td></tr><tr><td>Gel Green Nucleic Zuur Stain&nbsp;</td><td>GoldBio</td><td>G-740-500</td><td></td></tr><tr><td>Gel Loading Dye Purple 6x&nbsp;</td><td>NEB</td><td>B7024A</td><td></td></tr><tr><td>GeneJET Gel Extractie Kit&nbsp;</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>K0692</td><td>Gel Extractie Kit&nbsp;</td></tr><tr><td>GeneJET Plasmid Miniprep Kit</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>K0502</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>GlutaMAX-l (100x) 100 mL&nbsp;</td></tr><tr><td>HEK 293T Cellen&nbsp;</td><td>ATCC&nbsp;</td><td>CRL-11268</td><td></td></tr><tr><td>HeLa Cellen&nbsp;</td><td>ATCC&nbsp;</td><td>CRM-CCL-2</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fischer&nbsp;</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>Iot Relay</td><td>Digital Loggers</td><td>DLI 705020645490</td><td>AC/DC control relais voor verlichting</td></tr><tr><td>Kanamycin Monosulfaat</td><td>Gold Biotechnology</td><td>K-120-25</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P-4504</td><td></td></tr><tr><td>L-15 1x</td><td>Corning&nbsp;</td><td>10-045-CV&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>BP1425-2</td><td></td></tr><tr><td>LED Grow Light Systeem</td><td>HQRP</td><td>884667106091218</td><td>LED paneel lamp systeem&nbsp;</td></tr><tr><td>LightR-bRaf-mVenus</td><td>Addgene</td><td>#162154</td><td></td></tr><tr><td>LightR-iCre-miRFP670</td><td>Addgene</td><td>#162158</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>Mathworks</td><td>R2024a</td><td>Software voor het uitvoeren van CellGEO Scripts</td></tr><tr><td>Metamorph</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td>Beeldanalyse Software</td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp;</td><td>Fisher Chemical</td><td>M33-500</td><td></td></tr><tr><td>Mineral Oil</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>M5310</td><td></td></tr><tr><td>MiniPrep Kit&nbsp;</td><td>Gene Choice&nbsp;</td><td>96-308</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN TGX Precast Gels 12 well</td><td>Bio-Rad</td><td>4561085</td><td></td></tr><tr><td>Molecular Biology Grade Water&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>46-000-CV&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Multiband Polychroic Spiegel</td><td>89903BS</td><td>Chroma</td><td></td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Fisher Chemical</td><td>S271-3&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PBS w/o Ca en Mg&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>pCAG-iCre</td><td>Addgene</td><td>#89573</td><td></td></tr><tr><td>pcDNA3.1_Floxed-STOP mCherry</td><td>Addgene</td><td>#122963</td><td></td></tr><tr><td>pCEFL-ER

spatiotemporele controle van eiwitactiviteit door optogenetische allosterische regulatie

Spatiotemporal Control of Protein Activity through Optogenetic Allosteric Regulation

Spatiotemporele controle van eiwitactiviteit door optogenetische allosterische regulatie

Optogenetics offers the potential for mimicking complex spatiotemporal control of enzyme activity down to a subcellular resolution. However, most ...

spatiotemporal-control-protein-activity-through-optogenetic

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Werkwijze voor tijdruimtelijke controle kleine GTPase activiteit licht beschreven. Deze methode is gebaseerd op rapamycine-geïnduceerde FKBP-FRB heterodimerisatie en foto-kooien systemen. Optimalisatie van het licht-bestraling kan de ruimtelijk-tijdelijk bestuurd activering van kleine GTPases op het subcellulaire niveau.

Spatio-temporele Manipulatie van kleine GTPase activiteit bij subcellulaire niveau en op de tijdschaal van seconden in levende cellen

Hier wordt een procedure gepresenteerd om selectief een neuronaal eiwit te activeren met een korte lichtpuls door genetisch een foto-reactieve onnatuurlijke aminozuur te coderen in een doelneuronaal eiwit dat tot expressie wordt gebracht in neuronen in cultuur of in vivo.

Optische controle van een neuronaal proteïne met behulp van een genetisch gecodeerde Onnatuurlijke aminozuren in neuronen

Dit protocol beschrijft een optogenetische strategie voor het moduleren van mitogeen-geactiveerde proteïne kinase (MAPK) activiteit tijdens celdifferentiatie en Xenopus embryonale ontwikkeling. Deze methode maakt het mogelijk om de omkeerbare activering van de MAPK signalering weg in zoogdiercelcultuur en in multicellulaire levende organismen, zoals Xenopus embryo's, met een hoge ruimtelijke en temporale resolutie.

Lichtgemedieerde Terugkeerbare Modulatie van de Mitogeen-Geactiveerde Proteïne Kinase Pathway tijdens Cell Differentiatie en<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonale Ontwikkeling

Dit protocol beschrijft een imaging gebaseerde methode om te activeren met behulp van photoactivatable peptide-MHC, waardoor nauwkeurige Spatio controle van T cel activatie van T-lymfocyten.

Ruimtelijke en temporele controle van T cel activatie met behulp van een Photoactivatable-Agonist

Hier presenteren we een protocol te analyseren van cel naar cel overdracht van oscillerende informatie door optogenetic control en live monitoring van genexpressie. Deze aanpak biedt een uniek platform om te testen een functionele betekenis van dynamische gen expressie programma's in meercellige systemen.

Een Optogenetic methode te controleren en analyseren van gen expressiepatronen in cel-naar-cel interacties

Dit protocol beschrijft hoe optogenetische experimenten kunnen worden uitgevoerd voor het beheersen van genexpressie met rood en verrood licht met behulp van PhyB en PIF3. Inbegrepen zijn stapsgewijze instructies voor het bouwen van een eenvoudig en flexibel verlichtingssysteem, dat de controle van genexpressie of andere optogenetica met een computer mogelijk maakt.

Het bouwen van een eenvoudig en veelzijdig verlichtingssysteem voor optogenetische experimenten

Het betrouwbaar controleren van lichtgevoelige zoogdiercellen vereist de standaardisatie van optogenetische methoden. In de richting van dit doel schetst deze studie een pijplijn van gencircuitconstructie, celtechnologie, optogenetische apparatuur en verificatietests om de studie van door licht geïnduceerde genexpressie te standaardiseren met behulp van een negatief feedback optogenetisch gencircuit als casestudy.

Betrouwbare engineering en controle van stabiele optogenetische gencircuits in zoogdiercellen

Optogenetische controle van microbieel metabolisme biedt flexibele dynamische controle over fermentatieprocessen. Het protocol hier laat zien hoe blauw licht-gereguleerde fermentaties voor chemische en eiwitproductie op verschillende volumetrische schalen kunnen worden opgezet.

Lichtgestuurde fermentaties voor microbiële chemische en eiwitproductie

Dit protocol schetst de stappen voor het gebruik van het geautomatiseerde platform Lustro om high-throughput karakterisering van optogenetische systemen in gist uit te voeren.

High-throughput optogenetica-experimenten in gist met behulp van het geautomatiseerde platform Lustro

Deze video toont de dissectie en verwijdering van de foetale thymus en de voorbereiding van de ex vivo kweken van 2-dGuo behandeld thymus.

Bereiding van 2-dGuo behandelde Thymus Organ culturen

Ontdek optogenetische methoden voor ruimtelijk-temporele controle van eiwitactiviteit met behulp van LightR en Src kinase. Deze techniek biedt inzicht in cellulaire signaalprocessen en ondersteunt preklinisch onderzoek naar ziektes.

Spatiotemporele controle van eiwitactiviteit door optogenetische allosterische regulatie

Meer video's verkennen