Name: Totstandkoming van een muismodel van waterdeficiënte droge ogen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 21 s
Description: Leer een betrouwbaar muismodel van waterdeficiënt droog oog tot stand brengen door excisie van extraorbitale en infraorbitale traanklieren. Deze methode bootst ernstige droge oogsyndromen na met minimale schade.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Deze studie werd gedeeltelijk ondersteund door de Guizhou Provincial Science and Technology Projects (QKHJC-ZK[2024]ZD043), Fujian Provincial Science Fund voor Distinguished Young Scholars (2023J06053 [naar S.O]), de Natural Science Foundation van China (nr. 82101084 [naar S.O.] en China Scholarship Council (CSC, 202306310049 [naar Y.W]).

Vrouwelijke C57BL/6 (C57) muizen, 7-8 weken oud, werden gebruikt in dit onderzoek. Alle procedures volgden de ARVO-richtlijnen voor het gebruik van dieren in oogheelkundig en visueel onderzoek en werden goedgekeurd door het Animal Ethics Committee van Guizhou Medical University (Goedkeuring nr. 2305193). Geen oculaire oppervlaktelaesies werden waargenomen onder een spleetlamponderzoek.
1. Preoperatieve stappen
<ol>
	<li>Steriliseer de instrumenten met behulp van een snelle sterilisator: naaldhouders, een 5-0 naald met draad, ooglidschaar en forceps.</li>
	<li>Anesthesieer de muis met 1,25% Avertin via intraperitoneale injectie in een dosis van 0,3 mL/100 g.</li>
	<li>Nadat de anesthesie voltooid is, plaats de muis in de laterale decubituspositie en verwijder het haar van het chirurgische gebied. Dien meloxicam 20 mg/kg intraperitoneal toe 30 min voor de operatie, met daaropvolgende doses om de 8 uur postoperatief.</li>
	<li>Desinfecteer het chirurgische veld met drie afwisselende toepassingen van jodofoor en alcohol.</li>
	<li>Oprichting van het droge ogen model
	<ol>
		<li>Plaats de muis in de laterale decubituspositie. Blootstel het chirurgische gebied onder een operatiemicroscoop.</li>
		<li>Bevestig de diepte van de anesthesie via een teenprik voordat de incisie wordt gemaakt. Klem de huid aan de rechterkant van het gezicht van de muis met getande forceps en maak een incisie op het middelpunt van de lijn die het uitwendige oor en de kaaklijn naar de binnenste ooghoek kruist. Blootstel het spierweefsel; verwijder voorzichtig de ELG die zich op de spier bevindt.</li>
		<li>Verleng de huidincisiever naar de binnenste ooghoek, scheid het spierweefsel op een lichtrode klier beneden de spier. Schil en verwijder de ILG.</li>
		<li>Naai de incisie met behulp van voorgesteriliseerde 5-0 nylondraad met een aangehechte naald met behulp van een naaldhouder, ooglidschaar en forceps.</li>
		<li>Breng aan het einde van de operatie ofloxacine zalf aan om infectie te voorkomen.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Na het verwijderen van de unilaterale ELG en ILG, plaats de muizen in een omgeving met een ritmische 12:12 uur licht-donkercyclus met vrije toegang tot voedsel en water. Dit creëert een enkelzijdig droog ogen model, terwijl het contralaterale oog met interne en externe traanklieren dient als de normale controlegroep.</li>
</ol>
2. Meting van traanproductie
<ol>
	<li>Anesthesieer de muis met 1,25% Avertin intraperitoneaal in een dosis van 0,3 mL/100 g.</li>
	<li>Voer de traansecretiemeting uit met behulp van goed verpakte en commercieel gesteriliseerde fenolrode draden onder algemene anesthesie.</li>
	<li>Trek voorzichtig het onderste ooglid dat gemeten wordt naar beneden. Plaats de bovenkant van de fenolrode draad in het binnenste en buitenste derde van het onderste ooglid, en start direct de timer.</li>
	<li>Voer de test uit op één oog tegelijk gedurende een duur van 15 s.</li>
	<li>Na de toegewezen tijd, trek voorzichtig het onderste ooglid terug en verwijder de fenolrode draad voorzichtig naar beneden.</li>
	<li>Gebruik de schaal op de buitenzak van de fenolrode draad om van de bovenkant van de draad tot het gehele rode gedeelte te meten.</li>
	<li>Gebruik een elektronische stopwatch om de duur van de test nauwkeurig te registreren.</li>
</ol>
3. Bereiding van bevriezing weefselsneden
<ol>
	<li>Voer snelle cervicale dislocatie uit op de muizen na asfyxiatie met CO2.</li>
	<li>Gebruik schaar en forceps om de oogbollen voorzichtig te extraheren.</li>
	<li>Bevestig de oogbollen in optimaal snijtemperatuurscompound en gebruik een bevroren microtoom om bevriezing weefselsneden van 5-7 µm dikte28 te verkrijgen.</li>
	<li>Bewaar alle slides in een specimendoos bij kamertemperatuur gedurende ongeveer 30 min. Breng ze vervolgens over naar een ultralage temperatuurvriezer op -80 °C.</li>
</ol>
4. Hemotoxylin en eosin (H&E) kleuring
<ol>
	<li>Verwijder bevroren weefselsneden uit de ultralage temperatuurvriezer, leg ze plat in een weefseldoos en laat ze drogen in een dampkap.</li>
	<li>Was de sneden met 1x PBS, bedek gedurende 5 min, en verwijder vervolgens de PBS. Bedek het specimen met 4% paraformaldehyde, zorg ervoor dat het deksel gesloten is om verdamping te voorkomen. Na 15 min bij kamertemperatuur, spoel de specimens gedurende 3 x 5 min in 1x PBS.</li>
	<li>Plaats het specimen in een rek en dompel het 5 min in 0,5% hemotoxylin kleurstof.</li>
	<li>Spoel het specimen gedurende 5 min in kraanwater om overtollige kleurstof weg te wassen. Dompel het vervolgens gedurende 1-2 s in 0,1% zoutzuuralcohol om differentiatie te vergemakkelijken.</li>
	<li>Plaats de specimenhouder gedurende 15 min in kraanwater om de niet-specifieke kleuring te verwijderen.</li>
	<li>Drein de overtollige vloeistof en dompel het specimen gedurende 3 min in 0,05% eosin kleuroplossing.</li>
	<li>Was het specimen in kraanwater en dompel het achtereenvolgens in 75%, 80%, 95%, en twee rondes van 100% alcohol voor 2 min per ronde.</li>
	<li>Dompel de specimenhouder in twee rondes van xyleen voor 2 min per ronde.</li>
	<li>Plaats de houder in een dampkap om te drogen en bevestig het specimen met montagemedium, vermijd beschadiging en bellen.</li>
	<li>Bewaar de gekleurde specimens in een doos bij kamertemperatuur en fotografeer ze met behulp van een biomicrografiesysteem.</li>
</ol

<ol><li>Stapleton, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tfos+dews+ii+epidemiology+report%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Tfos dews ii epidemiology report.</a> Ocul Surf. 15 (3), 334-365 (2017).</li>
<li>Galor, A., Levitt, R. C., Felix, E. R., Martin, E. R., Sarantopoulos, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+ocular+pain%3A+An+important+yet+underevaluated+feature+of+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Neuropathic ocular pain: An important yet underevaluated feature of dry eye.</a> Eye (Lond). 29 (3), 301-312 (2015).</li>
<li>Craig, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tfos+dews+ii+definition+and+classification+report%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Tfos dews ii definition and classification report.</a> Ocul Surf. 15 (3), 276-283 (2017).</li>
<li>Hao, R., Ding, Y., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+corneal+epithelial+dendritic+cell+in+Sjogren%27s+syndrome+dry+eye+and+clinical+correlations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Alterations in corneal epithelial dendritic cell in Sjogren's syndrome dry eye and clinical correlations.</a> Sci Rep. 12 (1), 11167(2022).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+therapeutic+strategy+based+on+oxidant-antioxidant+balance+for+fuchs+endothelial+corneal+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Evolution of therapeutic strategy based on oxidant-antioxidant balance for fuchs endothelial corneal dystrophy.</a> Ocul Surf. 34, 247-261 (2024).</li>
<li>Sekhon, A. S., He, B., Iovieno, A., Yeung, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+corneal+endothelial+cell+loss+in+dry+eye+disease+and+other+inflammatory+ocular+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Immunol+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of corneal endothelial cell loss in dry eye disease and other inflammatory ocular disorders.</a> Ocul Immunol Inflamm. 31 (1), 21-31 (2023).</li>
<li>Zuo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Akr1c1+protects+corneal+epithelial+cells+against+oxidative+stress-mediated+ferroptosis+in+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Akr1c1 protects corneal epithelial cells against oxidative stress-mediated ferroptosis in dry eye.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 63 (10), 3(2022).</li>
<li>Akdemir, M. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+pseudoexfoliation+and+pseudoexfoliation+induced+dry+eye+on+central+corneal+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of pseudoexfoliation and pseudoexfoliation induced dry eye on central corneal thickness.</a> Curr Eye Res. 41 (3), 305-310 (2016).</li>
<li>Delcroix, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+epithelial+cells+shape+immune+responses+through+the+modulation+of+inflammasomes+and+lipid+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland epithelial cells shape immune responses through the modulation of inflammasomes and lipid metabolism.</a> Int J Mol Sci. 24 (5), 4309(2023).</li>
<li>Portal, C., Gouyer, V., Gottrand, F., Desseyn, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+mucins+in+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Ocular mucins in dry eye disease.</a> Exp Eye Res. 186, 107724(2019).</li>
<li>Doctor, M. B., Basu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+insufficiency+in+aqueous+deficiency+dry+eye+disease%3A+Recent+advances+in+pathogenesis%2C+diagnosis%2C+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland insufficiency in aqueous deficiency dry eye disease: Recent advances in pathogenesis, diagnosis, and treatment.</a> Semin Ophthalmol. 37 (7-8), 801-812 (2022).</li>
<li>Rocha, E. M., Alves, M., Rios, J. D., Dartt, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+lacrimal+gland%3A+Changes+in+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">The aging lacrimal gland: Changes in structure and function.</a> Ocul Surf. 6 (4), 162-174 (2008).</li>
<li>He, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+microenvironment+changes+after+obstruction+of+lacrimal+gland+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland microenvironment changes after obstruction of lacrimal gland ducts.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 63 (3), 15(2022).</li>
<li>Zoukhri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+involved+in+injury+and+repair+of+the+murine+lacrimal+gland%3A+Role+of+programmed+cell+death+and+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Mechanisms involved in injury and repair of the murine lacrimal gland: Role of programmed cell death and mesenchymal stem cells.</a> Ocul Surf. 8 (2), 60-69 (2010).</li>
<li>Li, W., Hayashida, Y., Chen, Y. T., Tseng, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Niche+regulation+of+corneal+epithelial+stem+cells+at+the+limbus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Niche regulation of corneal epithelial stem cells at the limbus.</a> Cell Res. 17 (1), 26-36 (2007).</li>
<li>Ou, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ectodysplasin+a+on+the+ocular+surface+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of ectodysplasin a on the ocular surface homeostasis.</a> Int J Mol Sci. 23 (24), 12(2022).</li>
<li>Rolando, M., Zierhut, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ocular+surface+and+tear+film+and+their+dysfunction+in+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The ocular surface and tear film and their dysfunction in dry eye disease.</a> Surv Ophthalmol. 45 (Suppl 2), S203-S210 (2001).</li>
<li>Johnson, M. E., Murphy, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+tear+film+and+ocular+surface+from+dry+eye+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in the tear film and ocular surface from dry eye syndrome.</a> Prog Retin Eye Res. 23 (4), 449-474 (2004).</li>
<li>Masoudi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemistry+of+human+tear+film%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Biochemistry of human tear film: A review.</a> Exp Eye Res. 220, 109101(2022).</li>
<li>Dartt, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+regulation+of+lacrimal+gland+secretory+processes%3A+Relevance+in+dry+eye+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Neural regulation of lacrimal gland secretory processes: Relevance in dry eye diseases.</a> Prog Retin Eye Res. 28 (3), 155-177 (2009).</li>
<li>Garg, A., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+development%3A+From+signaling+interactions+to+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland development: From signaling interactions to regenerative medicine.</a> Dev Dyn. 246 (12), 970-980 (2017).</li>
<li>Shinomiya, K., Ueta, M., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+dry+eye+mouse+model+produced+by+exorbital+and+intraorbital+lacrimal+gland+excision%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A new dry eye mouse model produced by exorbital and intraorbital lacrimal gland excision.</a> Sci Rep. 8 (1), 1483(2018).</li>
<li>Viau, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+ocular+surface+and+lacrimal+gland+changes+in+a+new+scopolamine-induced+dry+eye+model%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Time course of ocular surface and lacrimal gland changes in a new scopolamine-induced dry eye model.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 246 (6), 857-867 (2008).</li>
<li>Burgalassi, S., Panichi, L., Chetoni, P., Saettone, M. F., Boldrini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+simple+dry+eye+model+in+the+albino+rabbit+and+evaluation+of+some+tear+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Res%22%5BJournal%5D)">Development of a simple dry eye model in the albino rabbit and evaluation of some tear substitutes.</a> Ophthalmic Res. 31 (3), 229-235 (1999).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+dry+eye+model+induced+by+topical+administration+of+benzalkonium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">A mouse dry eye model induced by topical administration of benzalkonium chloride.</a> Mol Vis. 17, 257-264 (2011).</li>
<li>Honkanen, R. A., Huang, L., Rigas, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rabbit+model+of+aqueous-deficient+dry+eye+disease+induced+by+concanavalin+a+injection+into+the+lacrimal+glands%3A+Application+to+drug+efficacy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A rabbit model of aqueous-deficient dry eye disease induced by concanavalin a injection into the lacrimal glands: Application to drug efficacy studies.</a> J Vis Exp. (155), e59631(2020).</li>
<li>Barabino, S., Dana, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+dry+eye%3A+A+critical+assessment+of+opportunities+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal models of dry eye: A critical assessment of opportunities and limitations.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (6), 1641-1646 (2004).</li>
<li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+su6668+pure+nanoparticle-based+eyedrops%3A+Toward+its+high+drug+accumulation+and+long-time+treatment+for+corneal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">A su6668 pure nanoparticle-based eyedrops: Toward its high drug accumulation and long-time treatment for corneal neovascularization.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 14(2024).</li>
<li>Zhu, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synergistic+therapy+with+antioxidant+and+anti-vegf%3A+Toward+its+safe+and+effective+elimination+for+corneal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">A synergistic therapy with antioxidant and anti-vegf: Toward its safe and effective elimination for corneal neovascularization.</a> Adv Healthc Mater. 13 (5), 10(2024).</li>
<li>Mao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+p38+mapk+signaling+pathway+ameliorates+tissue-engineered+corneal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Downregulation of p38 mapk signaling pathway ameliorates tissue-engineered corneal epithelium.</a> Tissue Eng Part A. 28 (23-24), 977-989 (2022).</li>
<li>Mcnamara, N. A., Gallup, M., Porco, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+pax6+as+a+biomarker+to+detect+early+loss+of+ocular+phenotype+in+human+patients+with+sjogren%27s+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Establishing pax6 as a biomarker to detect early loss of ocular phenotype in human patients with sjogren's syndrome.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (11), 7079-7084 (2014).</li>
<li>Thacker, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Benzalkonium+chloride-induced+dry+eye+disease+animal+models%3A+Current+understanding+and+potential+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Benzalkonium chloride-induced dry eye disease animal models: Current understanding and potential for translational research.</a> Indian J Ophthalmol. 71 (4), 1256-1262 (2023).</li>
<li>Singh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+model+for+aqueous+deficient+dry+eye+secondary+to+periglandular+cicatrizing+conjunctivitis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Developing a model for aqueous deficient dry eye secondary to periglandular cicatrizing conjunctivitis.</a> Exp Eye Res. 244, 109949(2024).</li>
<li>Singh, S., Sharma, S., Basu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+models+of+dry+eye+disease%3A+Current+understanding+and+unmet+needs+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit models of dry eye disease: Current understanding and unmet needs for translational research.</a> Exp Eye Res. 206, 108538(2021).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

We hebben met succes een muismodel van watergebrek droge oogziekte gevestigd door chirurgisch zowel de ELG als de ILG te verwijderen, met als doel veranderingen in het oculaire oppervlak onder omstandigheden van watergebrek droge oogziekte te onderzoeken. We hebben nauwkeurig de morfologische en fysiologische veranderingen gedocumenteerd die werden waargenomen in dit muismodel van droge ogen als gevolg van de dubbele excisie van de ELG en ILG. Twee weken na het modelleren, observeerden en bemonsterden we het gevestigde m...

Droog oog is wereldwijd de meest voorkomende oogoppervlakteziekte geworden, met naar schatting 5% tot 50% van de bevolking die lijdt aan de ziekte1. Oogdroogheid en ongemak veroorzaakt door droog oog kunnen, indien aanhoudend, leiden tot visuele stoornissen en onstabiele traanfilms, wat op zijn beurt leidt tot schade aan het oogoppervlak2. Sommige patiënten met droog oog kunnen zelfs lijden aan chronische pijn2.
Volgens de TFOS DEWS II Dry Eye Consensus uit 2017 is droog oog een complexe aandoening die meerdere factoren omvat en wordt gekenmerkt door de verstoring van de natuurlijke balans van de traanfilm. Deze aandoening gaat gepaard met een reeks oculaire symptomen, instabiliteit van de traanfilm, verhoogde osmolariteit van de tranen, ontsteking en schade aan het oogoppervlak, en neuropathische pijn, die cruciaal zijn voor het begrijpen van de progressie van de ziekte3. In deze feedbacklus kan droog oog schade veroorzaken aan de epitheliale cellen van het hoornvlies, de dikte van het hoornvliesstroma en de dichtheid van de endotheelcellen verminderen, activering en aggregatie van immuuncellen op het hoornvliesoppervlak veroorzaken, de mucinesecretie door bekercellen verminderen en immuundisfunctie veroorzaken in de traanklier, waardoor de aandoening verder wordt verergerd4,5,6,7,8,9,10. De consensus beschrijft drie primaire vormen van droog oogsyndroom: droog oog door traandeficiëntie, evaporatieve droogheid en een combinatie van beide, bekend als gemengde droogheid3. Droog oog door traandeficiëntie is geassocieerd met structurele en functionele veranderingen in de traanklieren11. Deze veranderingen omvatten acinare atrofie, ductale occlusie die de traanstroom blokkeert, lymfocytinfiltratie die op een immuunrespons duidt, en een vermindering van de secretie van eiwitten die essentieel zijn voor het behoud van de gezondheid en stabiliteit van de traanfilm12,13.
De traanklier is een tubulaire exocriene klier die verantwoordelijk is voor de productie van watercomponenten in de traanfilm13,14, inclusief water, elektrolyten en eiwitten, en draagt bij aan het behoud van de stabiliteit van de micro-omgeving van het oogoppervlak15,16. De gezondheid en visuele helderheid van het oog zijn afhankelijk van de aanwezigheid van de traanfilm, die een kritische optische laag vormt op het oppervlak van het hoornvlies en zorgt voor een soepele smering van het hoornvlies en de conjunctiva17. De traanfilm bevordert de metabolische activiteit van de cellen van het oogoppervlak en fungeert als een reiniger, die effectief onzuiverheden en mogelijke irriterende stoffen van het oogoppervlak verwijdert en zo het fysiologische evenwicht en comfort van het oog handhaaft18,19.
Bij knaagdieren, zoals ratten en muizen, bestaan de traanklieren uit twee lobben: de interne en externe orbitale lobben. De externe orbitale lob bevindt zich onder het oor en het functionele deel ervan is verbonden met het oog door een verlengde ductus. Deze ductus maakt contact met de traanklierlob in de orbita voordat hij het oog bereikt en is betrokken bij de traanproductie20. De interne orbitale lob, ook bekend als de intraorbitale traanklier, bevindt zich onder de bulbaire conjunctiva van de buitenste canthus. De ILG is kleiner dan de ELG. Verminderde traanklierfunctie kan leiden tot droog oog door traandeficiëntie, dat, indien onbehandeld, kan progresseren tot hoornvlieszweren en gezichtsverlies21.
Dierenmodellen van droog oog door traandeficiëntie kunnen worden ingedeeld in drie interventiemethoden: chirurgische inductiemodellen, door geneesmiddelen geïnduceerde modellen en transgene modellen. Het chirurgische inductiemodel omvat het verwijderen van de ELG. Dit model is echter niet stabiel vanwege de aanwezigheid van ILG22. De systemische injectie van de cholinerge receptorblokker scopolamine is gebruikelijk in het door geneesmiddelen geïnduceerde model23. Topische toepassingen van atropine24 en benzalkoniumchloride25 kunnen ook de mucine- en traansecretie verminderen. Concanavalin-A kan lokaal in de traanklieren van konijnen worden geïnjecteerd om immuun lacrimale adenitis te veroorzaken, waardoor een model van droog oog door traandeficiëntie wordt gecreëerd26. Bovendien kunnen transgene dieren, zoals NOD, Aly/aly, NFS/sld, IQI/Jic, Id3 KO en andere muizenstammen, de symptomen en fenotipen van primair Sjögren-syndroom27 nabootsen om droog oog door traandeficiëntie te repliceren.
In deze studie omvatte het kernexperimentele ontwerp een chirurgische procedure om pijnloos en nauwkeurig de ELG en de ILG van de muis te verwijderen. Deze traanklieren zijn essentieel voor het handhaven van oogvocht en smering; hun verwijdering resulteert in een significante vermindering van de traansecretie, waardoor droog oog door traandeficiëntie bij muizen wordt nagebootst. Deze aanpak maakt het mogelijk om het gedrag, de fysiologische reacties en de veranderingen in het oculaire weefsel van de muis in de droge oogtoestand waar

<table><tbody><tr><td>10 mL spuit</td><td>Zhejiang KDL Medical Devices Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 Sutuurnaald</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Absoluut ethanol</td><td>Shanghai Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, Ezel anti-muis IgG</td><td>Invitrogen</td><td>811493</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594, Ezel anti-konijn IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A21207</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Keratine 12 antilichaam EPR17882</td><td>Abcam</td><td>ab185627</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PAX6 antilichaam</td><td>Abcam</td><td>ab5790</td><td></td></tr><tr><td>Autoclaaf</td><td>Hirayama. Japan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 muis</td><td>Shanghai Slack Laboratory Animal Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeer bij kamertemperatuur</td><td>Eppendorf. Duitsland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ddH2O</td><td>Shanghai Bioengineering Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektronische weegschalen</td><td>Shanghai Auhaus Biotech Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluorescentie omgekeerde fasecontrast micrografie systeem</td><td>TE-2000U,Nikon. Japan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vries de cassette</td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vries de snijbladen</td><td>Xiamen Taijing Biotechnology Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>H-1200 met DAPI montagemedium</td><td>Xiamen Juin Biotechnology Co., Ltd. China</td><td></td><td>montagemedium met DAPI</td></tr><tr><td>H-5000 Tablet Mountant</td><td>Vector. VS</td><td></td><td>montagemedium</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Shanghai Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylinen-eosine kleurkit</td><td>Auragene. VS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jodium</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ki-67 antilichaam</td><td>Abcam</td><td>ab16667</td><td></td></tr><tr><td>Vloeibare stikstof</td><td>Xiamen Yidong Gas Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopische naaldhouder</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopische gekartelde pincet</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopische pincet zonder tanden</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Model 3050 bevroren slicer</td><td>Leica, Deerfield, IL. VS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>OCT</td><td>Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ofloxacine zalf</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oftalmische natriumfluoresceine teststrips</td><td>Tianjin Jingming New Technology Development Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde poeder</td><td>Sigma. VS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fenolroder katoenen draad</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Snelle sterilisator</td><td>Suzhou 66 Vision Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human SPRR1b eiwit&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab167925</td><td></td></tr><tr><td>Gekoelde tafelcentrifuge</td><td>Eppendorf. Duitsland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glijbanen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spleetlamp</td><td>Topcon. Japan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Specimendoos</td><td>Lambolide (Fuzhou) Biotechnology Co., Ltd. China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tert-Amyl alcohol</td><td>Shanghai. Macklin Biochemical, China</td><td>A800283</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma. VS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultra-lage temperatuur vriezer</td><td>Thermo Fisher Scientific. VS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rechtopstaande fluorescentiemicrograaf</td><td>Leica DM2500. VS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rechtopstaand normaal biomicrografie systeem</td><td>Eclipse 50i, Nikon. Japan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xyleen</td><td>Shanghai Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zeiss chirurgisch microscoop</td><td>VISU150, Carl ZEISS. Duitsland</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

totstandkoming van een muismodel van waterdeficiënte droge ogen

Establishment of A Mouse Model of Aqueous Deficiency Dry Eye

Drooge ogen-ziekte is een veelvoorkomende aandoening die 5%-50% van de wereldbevolking treft. Onderzoek met diermodellen speelt een cruciale rol bij het begrijpen van de onderliggende mechanismen. Daarom ontwikkelden we een muismodel van droge ogen-ziekte door chirurgisch beide extraorbitale traanklieren (ELG) en intraorbitale traanklieren (ILG) te verwijderen om de pathologie van het oculaire oppervlak in de context van drukogende droge ogen te onderzoeken. Twee weken na de operatie vertoonden de muizen ernstige manifestaties van droge ogen, waaronder verminderde traanafscheiding, onregelmatigheden in het hoornvliesepitheel, positieve fluoresceïne-natriumkleuring en nieuwe bloedvatvorming. Histologisch onderzoek via hemotoxylin- en eosinkleuring onthulde inflammatoire celinfiltratie en dysplasie van het hoornvliesepitheel. Immunofluorescentiekleuring en kwantitatieve omgekeerde transcriptie-polymerasekettingreactie onthulden verminderde expressie van de normale hoornvlies-epitheelmarkers K12 en Pax6 en verhoogde expressie van Sprr1b in het hoornvliesepitheel. Deze oculaire manifestaties duidden op abnormale differentiatie van het hoornvliesepitheel. Verder onthulde immunofluorescentiekleuring van Ki67 de toenemende celproliferatie. Kortom, het ELG plus ILG excisiemodel bleek geschikt voor het bestuderen van veranderingen in het oculaire oppervlak en het verduidelijken van de mechanismen die ten grondslag liggen aan drukogende droge ogen.

Om de effecten en onderliggende mechanismen van droge ogen door traanvochttekort op het oogoppervlak te onderzoeken, hebben we een muismodel voor droge ogen door traanvochttekort opgezet door chirurgisch zowel de ELG als de ILG te verwijderen (Figuur 1A). Na een periode van 2 weken na de resectie van de traanklieren was de traansecretie bij de muizen met droge ogen (na verwijdering van de traanklieren) aanzienlijk afgenomen in vergelijking met de normale groep (Figuur 1B...

Hier presenteren we een methode om een muismodel van waterarm droog oog te vestigen door de extraorbitale en infraorbitale traanklieren te verwijderen en de veranderingen in het oculaire oppervlak bij waterarm droog oog te evalueren.

Totstandkoming van een muismodel van waterdeficiënte droge ogen

Dry eye disease is a prevalent condition affecting 5%-50% of the global population. Animal model investigations play a crucial role in understanding its ...

establishment-of-a-mouse-model-of-aqueous-deficiency-dry-eye

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video demonstrates a technique to induce chronic experimental autoimmune dry eye disease in rats. Upon injecting an antigen-adjuvant emulsion containing autoantigens and foreign antigens into a rat at predefined intervals, chronic eye inflammation is induced in the immunized rat by injecting the same antigens into the ocular surface tissues.

A Technique to Induce Chronic Experimental Autoimmune Dry Eye in Rats

Without using anesthesia, subcutaneously inject the emulsion at the base of the rat tails. Then, on day 14 in a similar manner, inject 200 microliters of the same antigen and incomplete Freund's Adjuvant. On the same day, intraperitoneally inject 300 nanograms of pertussis toxin in 100 microliters of PBS.

This video demonstrates a method for assessing corneal smoothness and tear film stability in an autoimmune rat model. It highlights the impact of gland dysfunction on tear film stability, crucial for understanding dry eye disease.

Assessment of Cornea and Tear Smoothness in an Autoimmune Dry Eye Rat Model

Dit rapport beschrijft een methode om chronische experimentele auto-immuun droge ogen in Lewis-ratten te induceren door middel van immunisatie met een emulsie van ratlakakalextract, ovalbumine en complete Freund's adjuvans, gevolgd door de injectie van lacrimale klier extract en ovalbumine in de forniceal subconjunctiva en lacrimale klieren Zes weken later.

Een Chronisch Autoimmuun Droog Oog Rat Model Met Toename In Effector Geheugen T Cellen In Oogappel Weefsel

Dit artikel beschrijft de ontwikkeling van een methode om acute of chronische droge oogziekte bij konijnen te veroorzaken door concanavalin A te injecteren in alle delen van het orbitale traankliersysteem. Deze methode, superieur aan de reeds gemelde, genereert een reproduceerbaar, stabiel model van droge ogen geschikt voor de studie van farmacologische middelen.

Een konijn model van waterige-deficiënte droge oogziekte geïnduceerd door Concanavalin Een injectie in de lacrimal klieren: Toepassing op drug werkzaamheid Studies

Een nieuwe aanpak wordt gepresenteerd voor het opwekken van chronische droge ogen ziekte bij konijnen door chirurgisch verwijderen van alle orbitale traanklieren. Deze methode, die verschilt van de eerder gerapporteerde, produceert een stabiel, reproduceerbaar model van waterige deficiënte droge ogen dat goed geschikt is voor het bestuderen van scheur fysiologie en pathofysiologie en oculaire therapieën.

Oprichting van een ernstig droog Oogmodel met volledige Dacryoadenectomie bij konijnen

Hier stellen we een rattenmodel op van traanklierdisfunctie om een basis te leggen voor de studie van waterdeficiënte droge ogen.

Een rattenmodel met droge ogen bij traanklierdisfunctie veroorzaakt door scopolamine

Het hoornvlies is uniek omdat het ontbreekt vaatweefsel. Echter, robuuste groei van bloedvaten en overleving worden geïnduceerd in het hoornvlies door de krachtige angiogene factoren. Daarom kan het hoornvlies te voorzien van ons een waardevol hulpmiddel voor angiogene studies. Dit protocol laat zien hoe u de muis-model van het hoornvlies pocket test en hoe de angiogenese veroorzaakt door angiogene factoren het gebruik van dit model te beoordelen.

Een muis model van het hoornvlies Pocket Assay voor Angiogenese Study

De mogelijkheid om urineweginfecties (UTI) te modelleren is cruciaal om bacteriële pathogenese te begrijpen en de ontwikkeling van nieuwe therapeutische methoden te stimuleren. Het doel van dit werk is om muismodellen van experimentele UTI en katheter-geassocieerde UTI te demonstreren die bevindingen naspelen en voorspellen die bij mensen worden gezien.

Oprichting en karakterisering van UTI en Cauti in een muismodel

Leer een betrouwbaar muismodel van waterdeficiënt droog oog tot stand brengen door excisie van extraorbitale en infraorbitale traanklieren. Deze methode bootst ernstige droge oogsyndromen na met minimale schade.

Totstandkoming van een muismodel van waterdeficiënte droge ogen

Meer video's verkennen