Name: Het beoordelen van neurale stamcellen Motiliteit Met behulp van een agarosegel-based Microfluïdische Device (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-02-11T02:20:00.000+00:00
Duration: 12 min 55 s
Description: Leer neurale stamcellenmotiliteit beoordelen met een agarosegel-microfluïdisch apparaat. Deze methode onderzoekt EGFR-overexpressie en chemische gradiënten voor regeneratieve neurowetenschap.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk wordt ondersteund door de New York State Office of Science, Technology en Wetenschappelijk Onderzoek (NYSTAR) (in de vorm van een Center for Advanced Technology subsidie), en door subsidies van de Nanobiotechnologie Center (NBTC), een STC-programma van de Nationale Science Foundation onder arbeidsovereenkomst nr. ECS-9876771, en de Amerikaanse hersentumor Association en de New York Academy of Medicine (JAB).

Procedure Coating dia&#39;s met fibronectine Voorafgaand aan de montage van de microfluïdische apparaat, steriliseren glazen dia&#39;s met fibronectine. De vacht van de dia&#39;s in een biohood om de steriliteit te behouden. Breng een steriel PDMS spacer langs de randen van de dia en markeer de kant die is omhoog geconfronteerd met een permanent marker. Pipetteer 1 ml van een 5 ug / ml-oplossing van fibronectine (Sigma) in het PDMS spacer over het geheel van het glas dia. Laat de dia&#39;s ongestoord gedurende een uur, daarna drogen met behulp van een N-2 geweer. De dia&#39;s kunnen worden opgeslagen bij 4 ° C voor latere experimenten. Montage van het apparaat Het gehele apparaat de montage-protocol wordt gedaan in een biohood onder steriele omstandigheden, met behulp van de volgende procedures: <ol><li> Reinig de silicium meester met de microkanalen patroon op door af te vegen naar beneden met 70% ethanol en drogen met de N 2 pistool. Plaats een steriel PDMS spacer van 1 mm hoogte met behulp van een tang om het reliëf kenmerken van de meester. </li><li> Bereid de agarose gel wordt gebruikt in het apparaat door weging 0,3 g agarose poeder (Fisher Scientific) en 10 ml van de CO 2-onafhankelijke media (Invitrogen) in een 50 ml beker. Roer het mengsel met een spatel en warmte in een magnetron 20 seconden op HIGH. Als niet-opgeloste korrels aanwezig zijn, breng dit mengsel nog 10 seconden en draai het hete mengsel om zich te ontdoen van de laatst overgebleven korrels. Herhaal dit proces met een opwarmtijd van 8 seconden en 5 seconden. </li><li> Snel giet de agarose oplossing op het silicium meester omringd door de PDMS spacer en onmiddellijk de agarose mengsel te bedekken met een steriele glazen dia. Breng een constante, zachte druk op de glijbaan voor ongeveer 2 minuten om ervoor te zorgen dat de agarose gel zal aan dezelfde constante 1 mm hoogte als de PDMS spacer. </li><li> Na de agarose gels, haal het patroon agarose gel met de PDMS spacer van het silicium master en over te dragen aan een fibronectine gecoat glas dia met de microkanalen in de agarosegel met uitzicht op de dia. Gebruik een 16 gauge spuit tip om gaten in het reservoir gebieden van de microkanalen voor de inlaat en uitlaat toegangen. Voeg 500 ul van CO 2-onafhankelijke media om de patroon agarosegel op de dia om uitdrogen van de microkanalen te voorkomen. </li><li> Was de acryl spruitstuk gebruikt in het toestel met 70% ethanol en spoel af met DI-water. Lijn de gaten in het spruitstuk met de gaatjes in de agarose gel met de microkanalen. Dan, lijn het spruitstuk met de gel, PDMS spacer, en de fibronectine dia met het metalen frame van het apparaat. Plaats schroeven in het apparaat en draai op het punt van weerstand met behulp van een schroevendraaier. Dit wordt gedaan om ervoor te zorgen dat het apparaat niet is over-verscherpt om de mate van vervorming van de microkanalen in de agarose. Draai de schroeven in een met de klok mee om ervoor te zorgen dat de gel in het apparaat niet verschuift. Test het apparaat op lekken en blokkades in de microkanalen met behulp van een 1 ml spuit. De spuit is voorzien van Tygon slang met een gel-loading pipetpunt aan het eind van de slang om de CO 2-onafhankelijke media te injecteren in de microkanalen. Een microkanalenplaat wordt geacht met succes gevormd wanneer de media wordt waargenomen om alleen af ​​te sluiten van de uitlaat van de microchannel wanneer media wordt geïnjecteerd in de bijbehorende inlaat. Nu, het apparaat is klaar voor gebruik. </li></ol> Het voorbereiden en zaaien van de cellen in het apparaat Wanneer de cellen 70% confluentie (cel-dichtheid rond de 100.000 cellen / ml) te bereiken, zijn ze bereid te worden gezaaid in het apparaat. Onder voorbehoud van de cellen twee DPBS (Invitrogen) wast. Voeg 200 ul van trypsine-EDTA (Invitrogen) om de cellen los te maken. Overdracht van de cellen om een ​​15 ml centrifugebuis met daarin 5 ml van de M2-medium met serum van de trypsine te inactiveren. De groei van media gecentrifugeerd met de cellen bij 1000 rpm gedurende 5 minuten. Aangezogen uit de bovendrijvende en resuspendeer de pellet van cellen 5 ml DPBS. Centrifugeer opnieuw de DPBS cellen onder dezelfde voorwaarden. Aangezogen uit de bovendrijvende weer, en resuspendeer de pellet van de cel in 500 pi van CO 2-onafhankelijke media. Zaad van de resulterende suspensie van cellen in het midden microchannel van het toestel via de zwaartekracht-stroming. Voeg de inlaat en de uitlaat van het centrum microchannel met 60 ul van de celsuspensie en 20 ul van CO 2-onafhankelijk medium, respectievelijk. Let op het centrum microchannel onder een helderveld microscopie om te zoeken naar celadhesie. De cellen hechten meestal na 10 minuten. Nadat de cellen zich te houden aan het kanaal bodem op een goede dichtheid, pipet afgescheiden van de rest van celsuspensie in de inlaat en de media in het stopcontact. Plaats 60 ul van CO 2-onafhankelijke media in zowel de inlaat en uitlaat van het centrum kanaal. Plaats PDMS bestrijkt meer dan ee midden-en uitlaat om verdamping van media uit het middenkanaal te minimaliseren. Beeldvorming van de cellen in het apparaat Voorafgaand aan de montage van het apparaat, draad de steriele peristaltische slang door het weerstation van de microscoop (Olympus x81) en verbinden met de peristaltische pomp (Watson-Marlow 205U/CA). Spoel PBS via de slang met een snelheid van 4 RPM. Na de montage van het apparaat, voor te bereiden geschikte concentraties van epidermale groeifactor (EGF) (Sigma) oplossingen in de CO 2-onafhankelijke media in een 15 ml centrifugebuis. Vortex het EFG oplossingen voor 5 seconden en verbinding maken met de slang. Sluit de leidingen gemarkeerd met bijbehorende EGF-concentraties op het apparaat. Het duurt ongeveer een uur voor het EFG te diffunderen over het kanaal nok en zorgen voor een constante chemische gradiënt. Een imaging software, Slidebook, wordt gebruikt om een ​​reeks van beelden bij elke 10 minuten voor ongeveer 5 uur in een experimentele run te nemen. De xy geautomatiseerde stadium is zo geprogrammeerd dat twee sub-gebieden (elk met een oppervlakte van 400μm x400μm) van hetzelfde centrum kanaal en een totaal van drie center kanalen worden afgebeeld op een gegeven tijdstip. Cellen in verschillende center kanalen (meestal 3 in een run) hebben verschillende EGF concentraties, zoals aangegeven op de slang. Materiaal en Uitrusting Cellijnen: C17.2 cellen NSCs afgeleid van de externe germinale laag van postnatale muis cerebellum 6, 7. Met behulp van deze cellijn, hebben we twee andere muriene stamcellen met behulp van retrovirus transfectie methode. Deze twee stabiel getransfecteerde cellijnen zijn (1) wtEGFR - dat het menselijk wildtype EGFR over-uitdrukt, en (2) ΔEGFR - dat is een constitutief actieve EGFR mutant. Voor het gemak van detectie, retrovirussen dragen een backbone met het gen van belang, gevolgd door een interne site voor ribosomale binding (IRES) en het Green Fluorescent Protein (GFP). Celcultuur: De muis C17.2 NSCs en hun varianten werden gekweekt in een 6-wells plaat in M2 media (DMEM (Invitrogen) met 10% foetaal bovine serum (FBS) (Invitrogen), 5% paard serum (HS) (Invitrogen ), en 1% penicilline / streptomycine (Invitrogen).) Cellen werden gehandhaafd bij 37 o C in 80% lucht en 5% CO 2. Microfluïdische apparaat: Een plastic spruitstuk, een PDMS spacer, en een RVS kader voor het houden van het apparaat op zijn plaats. Imaging Een omgekeerde fluorescentiemicroscoop (Olympus IX-81) wordt gebruikt, in verband met een geïntensiveerde CCD camera (Orca, Hamamatsu). De microfluïdische apparaat is gemonteerd op een geautomatiseerde xyz stadium, en het podium wordt omsloten door een milieu-kamer die een temperatuur van 37 ° C. onderhoudt Er zijn meestal 3-4 apparaten op dezelfde chip die zal gefilmd worden op hetzelfde tijdstip met behulp van de automatische xyz podium. Flow behoud van Een peristaltische pomp met acht parallelle lijnen (Watson-Marlow 205U/CA) auto wordt gebruikt om de stromen in alle van de wasbak en de bron-kanalen te behouden. <img src="/files/ftp_upload/old/674_2008_9_29_6/674_Figure-01.jpg" alt="Figuur 1" width="573" height="414" /> Fig. 1 Motiliteit van drie NSC stammen (ouders, wtEGFR, en D EGFR) in verschillende EGF concentraties Alle trajecten worden genomen van het bijhouden van een film van 5 uur (met uitzondering van wtEGF 100ng/ml, 4 uur), en de oorsprong van alle tracks zijn geherpositioneerd op (0,0) ter vergelijking doel. <img src="/files/ftp_upload/old/674_2008_9_29_7/674_Figure-02.jpg" alt="Figuur 2" width="576" height="546" /> Fig. 2 Correlatie van EGFR-expressie niveau en de beweeglijkheid (a) twee beelden van wtEGF NSCs op het oppervlak van een microfluïdische kanaal met 100ng/ml EGF. De linker afbeelding is een tl-imago, en het recht is een uitgezonden helder veld beeld. De schaal bar is 100 urn, en de Kanaalbreedte is 400 micrometer. Cellen worden gescheiden in twee populaties van de helderheid van uitdrukking de GFP. Cellen in de blauwe cirkels zijn dimmer, dus minder EGFR-expressie niveau, en cellen in de rode cirkels zijn brigher, hebben dus een hogere EGFR-expressie niveau. (B) Trajecten van cellen met lage en hoge EGFR-expressie niveau. Deze trajecten zijn afkomstig uit een vier uur durende film.

<ol><li>Blow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics%3A+in+search+of+a+killer+application%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Microfluidics: in search of a killer application.</a> Nature Methods. 4, 665-670 (2007).</li>
<li>Shing-Yi Cheng, S. H., Wassweman, M. ax, Archer, S. hivaun, Shuler, M. ichael L., Wu, M. ingming <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hydrogel-based+microfluidic+device+for+the+studies+of+directed+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Lab-on-a-chip%22%5BJournal%5D)">A hydrogel-based microfluidic device for the studies of directed cell migration.</a> Lab-on-a-chip. 7, 763-769 (2007).</li>
<li>Pedersen, M. W., Tkach, V., Pedersen, N., Berezin, V., Poulsen, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+a+naturally+occurring+constitutively+active+variant+of+the+epidermal+growth+factor+receptor+in+mouse+fibroblasts+increases+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Expression of a naturally occurring constitutively active variant of the epidermal growth factor receptor in mouse fibroblasts increases motility.</a> Int J Cancer. 108, 643-653 (2004).</li>
<li>Ayuso-Sacido, A., Graham, C., Greenfield, J. P., Boockvar, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+duality+of+EGFR+signaling+and+neural+stem+cell+phenotype%3A+Cell+enhancer+or+cell+transformer%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Stem+Cell+Research+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">The duality of EGFR signaling and neural stem cell phenotype: Cell enhancer or cell transformer.</a> Current Stem Cell Research and Therapy. 1, 231-238 (2006).</li>
<li>Eisenbach, M., Constantinou, C., Aloni, H., Shinitzky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repellents+for+Escherichia+coli+operate+neither+by+changing+membrane+fluidity+nor+by+being+sensed+by+periplasmic+receptors+during+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Repellents for Escherichia coli operate neither by changing membrane fluidity nor by being sensed by periplasmic receptors during chemotaxis.</a> J Bacteriol. 172, 5218-5224 (1990).</li>
<li>Snyder, E. Y., Deitcher, D. L., Walsh, C., Arnold-Aldea, S., Hartwieg, E. A., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+neural+cell+lines+can+engraft+and+participate+in+development+of+mouse+cerebellum%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multipotent neural cell lines can engraft and participate in development of mouse cerebellum.</a> Cell. 68, 33-51 (1992).</li>
<li>Snyder, E. Y., Yoon, C., Flax, J. D., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+neural+precursors+can+differentiate+toward+replacement+of+neurons+undergoing+targeted+apoptotic+degeneration+in+adult+mouse+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Multipotent neural precursors can differentiate toward replacement of neurons undergoing targeted apoptotic degeneration in adult mouse neocortex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 94, 11663-11668 (1997).</li>
</ol>

Fig. 1 toont trajecten van drie NSC stammen, de ouderlijke cellen, de wtEGFR en de ΔEGFR (controle). Elke set van trajecten werden verkregen uit een vijf uur lange film. Voor de ouderlijke cellen, celbeweeglijkheid bereikte een hoogtepunt toen EGF-concentratie werd ~ 10ng/ml, want wtEGFR cellen, celbeweeglijkheid piek verschoven naar 100ng/ml of hoger, voor ΔEGFR cellen, de cel beweeglijkheid was onafhankelijk van de EGF concentratie als verwacht. De wtEGF cellen met 100ng/ml waren de meest beweeglijke cellen, verhuisden ze naar ong...

<table><tbody><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM) (1X)</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>11971-025</td><td></td></tr><tr><td>CO2-onafhankelijk medium</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>18045-088</td><td>Een bedrijfseigen non-HEPES medium geschikt voor het ondersteunen van celgroei voor diverse epitheliale, fibroblasten- en lymfoïde cellijnen onder atmosferische omstandigheden, bevat geen L-glutamine</td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>25200-072</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>14190-144</td><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing, zonder calcium of magnesium</td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td>Bevat 10.000 units penicilline (base) en 10.000 g streptomycine (base)/ml met gebruik van penicilline G (natriumzout) en streptomycinesulfaat in 0,85% zoutoplossing</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td>Foetaal runderserum, gekwalificeerd</td></tr><tr><td>Paardenserum</td><td>Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>16050-130</td><td>Paardenserum, EIA-getest (negatief) serum</td></tr><tr><td>Fibronectine</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0895</td><td>Fibronectine uit menselijk plasma, ook wel koud-onoplosbaar globuline genoemd</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Reagens</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4127</td><td>Epidermale groeifactor uit muizen submaxillaire klier, gelyofiliseerd</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Reagens</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1356-500</td><td></td></tr></tbody></table>

het beoordelen van neurale stamcellen motiliteit met behulp van een agarosegel-based microfluïdische device

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

Terwijl de microfluïdische technologie is het bereiken van een nieuw niveau van volwassenheid voor macromoleculaire assays, cel-gebaseerde testen zijn nog in een prille stadium 1. Dit is grotendeels te wijten aan de moeilijkheid waarmee men kan een cel-compatibele en gestage micro-omgeving met behulp van conventionele microfabricage technieken en materialen te creëren. We pakken dit probleem aan door de invoering van een roman microfabricage materiaal, agarose gel, als het basismateriaal voor de microfluïdische apparaat. Agarose gel is zeer buigzaam, en doorlaatbaar voor gas en voedingsstoffen die nodig zijn voor de overleving van de cel, en dus een ideaal materiaal voor cel-gebaseerde testen. We hebben eerder al aangetoond dat agarose gel gebaseerde apparaten succesvol zijn geweest in het bestuderen van bacteriën en neutrofielen celmigratie 2. In dit rapport worden drie parallelle microfluïdische kanalen patroon in een agarosegel membraan van ongeveer 1mm dikte. Constante stromen met media / buffer worden onderhouden in de twee nevengeulen met behulp van een peristaltische pomp. Cellen zijn aangehouden in het centrum kanaal voor observatie. Omdat de voedingsstoffen en chemicaliën in de zijgeleiders voortdurend verspreiden van de kant tot het centrum kanaal, de chemische omgeving van het centrum kanaal is eenvoudig te bedienen via de stroming langs de zijkant kanalen. Met behulp van dit apparaat, tonen we aan dat de beweging van neurale stamcellen kan optisch worden gecontroleerd met gemak onder verschillende chemische omstandigheden, en de experimentele resultaten tonen aan dat de overexpressie van de epidermale groeifactor (EGFR) de beweeglijkheid van neurale stamcellen verbetert. Beweeglijkheid van neurale stamcellen is een belangrijke biomarker voor de beoordeling van cellen agressiviteit, waardoor tumorigene factor 3. Het ontcijferen van het onderliggende mechanisme van NSC beweeglijkheid levert inzicht in beide stoornissen van neurale ontwikkeling en in de hersenen kankerstamcel invasie.

We tonen aan dat de overexpressie van de epidermale groeifactor (EGFR) de beweeglijkheid van neurale stamcellen (NSCs) met behulp van een roman agarose gel op basis microfluïdische toestel verbetert. Deze technologie kan gemakkelijk aan te passen aan andere zoogdiercelsystemen waar mobiele bronnen zijn schaars, zoals menselijke neurale stamcellen, en de doorlooptijd is van cruciaal belang.

Het beoordelen van neurale stamcellen Motiliteit Met behulp van een agarosegel-based Microfluïdische Device

Hoewel microfluidische technologie een nieuw niveau van volwassenheid bereikt voor macromoleculaire assays, bevinden celgebaseerde assays zich nog in een beginstadium1. Dit is ...

Hallo, ik ben Kevin Won. Ik ben een masterstudent engineering in het Biofluids Lab aan Cornell University. Vandaag ga ik het hebben over het gebruik van een microfluïdisch apparaat op basis van agarose om het effect van EGF (epidermale groeifactor) op neurale stamcellen van muizen te bestuderen.Het apparaat bestaat in essentie uit drie microfluïdische kanalen, elk 150 micron breed. De EGF wordt in een van de zijkanaal gepompt en de buffer wordt in het andere zijkanaal gepompt. Hiermee wordt in feite een statische lineaire chemische gradiënt over het middenkanaal gecreëerd.Aangezien EGF gemakkelijk door de agarosegel diffundeert, worden de neuronale stamcellen in het middenkanaal gezaaid en wordt de voortgang van hun migratie via een microscoop gevolgd. De apparaten bestonden in essentie uit een bovenlaag van plexiglas met alle in- en uitlaten voor de aansluiting op de buisjes. Daaronder bevindt zich een agarosegelmembraan met daarin vier patroongestuurde apparaten.Dit wordt omringd door een PDMS-afstandhouder, wat garandeert dat we over het gehele apparaat een constante dikte hebben. De PDMS en de gel worden gemonteerd op een glazen objectglas, dat is gecoat met ect. Dit helpt de c

assessing-neural-stem-cell-motility-using-an-agarose-gel-based

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een compartimentering microfluïdische apparaat voor het onderzoeken van kanker stamcellen migratie wordt beschreven. Deze roman platform creëert een levensvatbare cellulaire micro-omgeving en maakt microscopische visualisatie van levende cellen voortbewegen. Zeer beweeglijke kankercellen worden geïsoleerd om moleculaire mechanismen van agressieve infiltratie, wat kan leiden tot een meer doeltreffende toekomstige therapieën te bestuderen.

Evaluatie van kankerstamcel Migratie Met behulp van compartimentering microfluïdische apparaten en live cell imaging

In dit protocol we zien hoe aangepaste kamers die de toepassing van een gelijkstroom elektrisch veld op time-lapse beeldvorming van volwassen hersenen afgeleide neurale voorlopercel translocatie in galvanotaxis schakelen mogelijk te construeren.

Een Galvanotaxis Assay voor Analyse van neurale precursoren celmigratie Kinetics in een extern aangelegd Direct Current Electric Field

Source: Scheidweiler, D., et al. Combining Fluidic Devices with Microscopy and Flow Cytometry to Study Microbial Transport in Porous Media Across Spatial Scales. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates the use of a microfluidic device to quantify bacterial motility through a porous matrix composed of randomly arranged pillars. Fluorescently labeled bacteria are introduced into the device, imaged via microscopy as they move through the porous matrix into the observation channel, and analyzed...

Assessing Bacterial Motility Using a Microfluidic Device

This video demonstrates the neural precursor cell neurosphere migration assay—an in vitro assay to study the migratory response of neural precursor cells from the neurosphere—via microscopic analysis.

NPC Neurosphere Assay: An In Vitro Assay to Assess the Migratory Response of Neural Precursor Cells from the Neurosphere

We presenteren een ex vivo celmigratie analyse die exacte kwantificering van enterische neurale celmigratie potentieel in aanwezigheid van verschillende groeifactoren maakt.

Een kwantitatieve cel-migratie test voor Muriene Enterisch neurale voorlopercellen

Hier beschrijven we live-cel beeldvormingstechnieken voor het kwantitatief meten van de migratie en invasie van de cellen van de stam van tumor van de hersenen van glioblastoma na verloop van tijd en onder meerdere behandeling voorwaarden.

Live-cel Imaging tests studie Glioblastoma Brain Tumor stamcel migratie en invasie

Mechanische krachten zijn belangrijk voor het beheersen van de Celmigratie. Dit protocol demonstreert het gebruik van elastische hydrogels die kunnen worden vervormd met behulp van een glazen micro pipet en een micro manipulator om cellen te stimuleren met een lokale stijfheids gradiënt om veranderingen in celstructuur en migratie teweeg te brengen.

Enkelvoudige cel Duro Taxis assay voor de beoordeling van de mechanische controle van cellulaire beweging en gerelateerde signalering van gebeurtenissen

We presenteren drie eenvoudige in vitro testen-de lange afstand migratie test, de co-cultuur migratie test, en chemo-attractie test-dat gezamenlijk evalueren van de functies van de menselijke stamcel afgeleid periventricular endotheliale cellen en hun interactie met GABAergic interneuronen.

Migratie, Chemo-Attraction, en Co-Culture Assays voor menselijke stamcel-afgeleide endotheelcellen en GABAergic Neuronen

We beschrijven een methode om menselijke motorische eenheden te genereren in commercieel verkrijgbare microfluïdische apparaten door door de mens geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide motorneuronen te co-cultiveren met menselijke primaire mesoangioblast-afgeleide myotubes, wat resulteert in de vorming van functioneel actieve neuromusculaire juncties.

Generatie van menselijke motorische eenheden met functionele neuromusculaire juncties in microfluïdische apparaten

Deze studie presenteert de tweedimensionale (2D) kraswondmigratietest en de driedimensionale (3D) sferoïde kiemtest, samen met hun respectievelijke stroomafwaartse analysemethoden, waaronder RNA-extractie en immunocytochemie, als geschikte tests om angiogenese in vitro te bestuderen.

Onderzoek naar angiogenese op functioneel en moleculair niveau door gebruik te maken van de Scratch Wound Migration Assay en de Spheroid Sprouting Assay

Een protocol voor de kwantitatieve evaluatie van 3D-celmigratie binnen en in het grensvlak van granulaire hydrogels wordt hier gepresenteerd.

Kwantificering van driedimensionale celmigratie binnen en in granulaire hydrogel biomaterialen

Leer neurale stamcellenmotiliteit beoordelen met een agarosegel-microfluïdisch apparaat. Deze methode onderzoekt EGFR-overexpressie en chemische gradiënten voor regeneratieve neurowetenschap.

Het beoordelen van neurale stamcellen Motiliteit Met behulp van een agarosegel-based Microfluïdische Device

Meer video's verkennen