Name: Een niet-virale benadering om voorbijgaande chimere antigeenreceptor-T-cellen te genereren met behulp van mRNA voor immunotherapie bij kanker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Leer een niet-virale methode om voorbijgaande CAR-T-cellen te genereren met mRNA voor kankerimmunotherapie. Deze aanpak biedt een veilig en kosteneffectief alternatief voor virale transductie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>7-AAD viability dye&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>420404</td><td></td></tr><tr><td>ACEA Novocyte flow cytometer</td><td>Agilent</td><td>NovoCyte 3000</td><td></td></tr><tr><td>AIM-V medium</td><td>Gibco</td><td>12055083</td><td></td></tr><tr><td>APC goat anti-human IgG F(ab')2 antibody</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories</td><td>109-136-097</td><td></td></tr><tr><td>BglII Restriction Enzyme</td><td>New England BioLabs (NEB)</td><td>R0144L</td><td></td></tr><tr><td>3&acute;-O-Me-m7G(5')ppp(5')G RNA Cap Structure Analog</td><td>NEB</td><td>S1411S</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, high glucose</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads Human T-Activator CD3/CD28 beads</td><td>Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>E-Plate 96</td><td>Agilent</td><td>5232376001</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma</td><td>459844-4L</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Lonza.com</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>HiScribe SP6 RNA Synthesis Kit</td><td>New England BioLabs (NEB)</td><td>E2070S</td><td></td></tr><tr><td>Human IL-2 Recombinant Protein</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Millennium RNA Markers</td><td>Invitrogen</td><td>AM7150</td><td></td></tr><tr><td>Monarch RNA Cleanup Kit (500 &mu;g)</td><td>NEB</td><td>T2050L</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methylpseudo-UTP</td><td>Trilink</td><td>N-1081-10</td><td></td></tr><tr><td>Neon Transfection Instrument</td><td>Invitrogen</td><td>MPK5000</td><td></td></tr><tr><td>Neon Transfection System 100-&mu;L Kit</td><td>Invitrogen</td><td>MPK10096</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>Gibco</td><td>11875135</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red</td><td>Gibco</td><td>25300120</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Phenol:Chloroform:Isoamyl Alcohol (25:24:1, v/v)</td><td>Invitrogen</td><td>15593049</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence Real-Time Cell Analysis (RTCA) instrument</td><td>Agilent</td><td>RTCA MP</td><td></td></tr><tr><td>ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit</td><td>Zymo Research</td><td>D4201</td><td></td></tr></tbody></table>

een niet-virale benadering om voorbijgaande chimere antigeenreceptor-t-cellen te genereren met behulp van mrna voor immunotherapie bij kanker

A Nonviral Approach to Generate Transient Chimeric Antigen Receptor T Cells Using mRNA for Cancer Immunotherapy

Een niet-virale benadering om voorbijgaande chimere antigeenreceptor-T-cellen te genereren met behulp van mRNA voor immunotherapie bij kanker

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy has emerged as a pioneering cancer treatment, achieving unprecedented success in treating certain ...

a-nonviral-approach-to-generate-transient-chimeric-antigen-receptor-t

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

This video demonstrates a technique to manufacture chimeric antigen receptor (CAR) T cells ex vivo. Human T cells are incubated with magnetic beads coated with anti-CD3 and anti-CD28 antibodies, along with a medium supplemented with interleukin-2 (IL-2), leading to T cell activation and proliferation. Transgenic lentiviral vectors are introduced, allowing the transgenic RNA to integrate into the host genome and express the transgene. This results in the transduced T cells expressing chimeric...

An Ex Vivo Technique to Manufacture Chimeric Antigen Receptor T Cells

This video demonstrates a technique for the ex vivo generation of tumor antigen-specific chimeric antigen receptor (CAR) T cells. Retroviral vectors carrying transgenic RNA are mixed with spleen cells in a medium supplemented with interleukin-2 to promote T-cell survival and proliferation. The mixture is then transferred to a plate coated with recombinant human fibronectin fragments and centrifuged to facilitate the fusion of the virus with the cell, allowing the RNA to integrate into the host...

An Ex Vivo Technique to Generate Tumor-Specific Chimeric Antigen Receptor T Cells

This video demonstrates a technique for generating antigen-specific chimeric antigen receptor (CAR) T cells through retroviral transduction. Activated murine CD8+ T cells are added to a microwell plate coated with recombinant fibronectin fragments. Retroviral vectors containing transgenic RNA encoding an antigen-specific chimeric antigen receptor (CAR) are then introduced, and the plate is centrifuged to facilitate transduction. After incubation, the transduced cells express antigen-specific...

A Technique for the Generation of Antigen-Specific CAR T Cells

De huidige protocol combineert eencellige gekoppeld menselijke TCR alpha en beta keten sequencing met gestroomlijnd generatie van retrovirale vectoren compatibel met in vitro en in vivo TCR expressie.

Gestroomlijnd eencellige TCR isolatie en generatie van retrovirale vectoren voor In Vitro en In Vivo expressie van menselijke TCRs

We beschrijven een aanpak om betrouwbaar te genereren chimeer antigeen receptor (auto) T cellen en testen hun differentiatie en functie in vitro en in vivo.

Productie van Chimerische antigeen receptor (auto) T cellen voor adoptie immunotherapie

Dit protocol beschrijft de methodologie voor het niet-invasief volgen van T-cellen die genetisch gemanipuleerd zijn om chimere antigeenreceptoren in vivo tot expressie te brengen met een klinisch beschikbaar platform.

Dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met [18F]Tetrafluoroboraat positronemissietomografie/computertomografie

Dit artikel beschrijft het productieproces voor chimere antigeenreceptor-T-cellen voor klinisch gebruik, met name met behulp van een geautomatiseerde celprocessor die virale transductie en kweek van T-cellen kan uitvoeren. We geven aanbevelingen en beschrijven valkuilen waarmee rekening moet worden gehouden tijdens de procesontwikkeling en implementatie van een klinische studie in een vroege fase.

Chimere antigeenreceptor T-celproductie op een geautomatiseerde celprocessor

Dit protocol stroomlijnt de productie van retrovirale vectoren en de transductie van T-cellen bij muizen, waardoor de efficiënte generatie van CAR-T-cellen van muizen wordt vergemakkelijkt.

Efficiënte generatie van muizen chimere antigeenreceptor (CAR)-T-cellen

Dit protocol biedt een gestroomlijnde workflow voor het genereren en testen van menselijke chimere antigeenreceptorregulerende T-cellen (CAR Tregs).

Generatie van menselijke chimere antigeenreceptorregulerende T-cellen

Er is een gedetailleerd protocol voorzien voor het gebruik van CRISPR/Cas9-technologie om zeer efficiënte, gerichte knock-in van grote, multicistronische constructies in primaire menselijke T-cellen te bereiken via de homologie-gemedieerde eindjoining (HMEJ) DNA-reparatieroute. T-cellen die met dit cGMP-aanpasbare protocol zijn ontwikkeld, behouden een uitstekende celexpansie, cytotoxiciteit en cytokineproductie.

Niet-virale engineering van primaire menselijke T-cellen via homologie-gemedieerde end-joining gerichte integratie van grote DNA-sjablonen

Dit protocol beschrijft de essentiële stappen voor de kweek van primaire T-cellen, waaronder hun isolatie, activatie, expansie en tijdelijke transfectie door mRNA-elektroporatie. Daarnaast worden een workflow en antilichaampanel voorgesteld voor flowcytometrische analyse van fenotype, activatiemarkers, levensvatbaarheid en chimere antigeenreceptor (CAR)-expressie.

Isolatie, cultivatie en tijdelijke transfectie van primaire menselijke T-cellen om chimerische antigeenreceptoren (CAR) T-cellen te genereren

Leer een niet-virale methode om voorbijgaande CAR-T-cellen te genereren met mRNA voor kankerimmunotherapie. Deze aanpak biedt een veilig en kosteneffectief alternatief voor virale transductie.

Een niet-virale benadering om voorbijgaande chimere antigeenreceptor-T-cellen te genereren met behulp van mRNA voor immunotherapie bij kanker (Video) | JoVE Journal

Een niet-virale benadering om voorbijgaande chimere antigeenreceptor-T-cellen te genereren met behulp van mRNA voor immunotherapie bij kanker

Meer video's verkennen