Name: High-throughput geautomatiseerde multiplex immunofluorescentietesten voor translationeel onderzoek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Leer een geautomatiseerd protocol voor multiplex immunofluorescentie op een automatische slide-stainer. Deze methode maakt snelle, reproduceerbare spatial proteomics mogelijk voor translationeel onderzoek met FFPE-weefsels.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>McGinnis, L. M., Ibarra-Lopez, V., Rost, S., Ziai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+research+applications+of+multiplexed+immunohistochemistry+and+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Clinical and research applications of multiplexed immunohistochemistry and in situ hybridization.</a> J Pathol. 254 (4), 405-417 (2021).</li>
<li>Tan, W. C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+multiplex+immunohistochemistry%2Fimmunofluorescence+techniques+in+the+era+of+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Comm%22%5BJournal%5D)">Overview of multiplex immunohistochemistry/immunofluorescence techniques in the era of cancer immunotherapy.</a> Cancer Comm. 40 (4), 135-153 (2020).</li>
<li>Huss, R., Schmid, C., Manesse, M., Thagaard, J., Maerkl, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+tumor+heterogeneity+and+diagnostic+profiling+for+advanced+and+immune+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Cell+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Immunological tumor heterogeneity and diagnostic profiling for advanced and immune therapies.</a> Adv Cell Gene Ther. 4 (3), e113(2021).</li>
<li>Singhal, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaiso+%28ZBTB33%29+subcellular+partitioning+functionally+links+LC3A%2FB%2C+the+tumor+microenvironment%2C+and+breast+cancer+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">Kaiso (ZBTB33) subcellular partitioning functionally links LC3A/B, the tumor microenvironment, and breast cancer survival.</a> Comm Biol. 4 (1), 1-13 (2021).</li>
<li>Patil, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratumoral+plasma+cells+predict+outcomes+to+PD-L1+blockade+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Intratumoral plasma cells predict outcomes to PD-L1 blockade in non-small cell lung cancer.</a> Cancer Cell. 40 (3), 289-300.e4 (2022).</li>
<li>Hong, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+T+cell+therapy+for+MAGE-A4%2B+solid+cancers+in+HLA-A%2A02%2B+patients%3A+a+phase+1+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Autologous T cell therapy for MAGE-A4+ solid cancers in HLA-A*02+ patients: a phase 1 trial.</a> Nat Med. 29 (1), 104-114 (2023).</li>
<li>Robbins, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-institutional+Assessment+of+Pathologist+Scoring+HER2+Immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">Multi-institutional Assessment of Pathologist Scoring HER2 Immunohistochemistry.</a> Mod Pathol. 36 (1), 100032(2023).</li>
<li>Ko, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+HER2-Low+a+New+Clinical+Entity+or+Merely+a+Biomarker+for+an+Antibody+Drug+Conjugate%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Ther%22%5BJournal%5D)">Is HER2-Low a New Clinical Entity or Merely a Biomarker for an Antibody Drug Conjugate.</a> Oncol Ther. 12 (1), 13-17 (2024).</li>
<li>Fundytus, A., Booth, C. M., Tannock, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+low+can+you+go%3F+PD-L1+expression+as+a+biomarker+in+trials+of+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">How low can you go? PD-L1 expression as a biomarker in trials of cancer immunotherapy.</a> Ann Oncol. 32 (7), 833-836 (2021).</li>
<li>Im, K., Mareninov, S., Diaz, M. F. P., Yong, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Introduction+to+Performing+Immunofluorescence+Staining%5BTitle%5D)+AND+%22Method+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">An Introduction to Performing Immunofluorescence Staining.</a> Method Mol Biol. 1897, 299-311 (2019).</li>
<li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+Immunofluorescence%3A+A+Powerful+Tool+in+Cancer+Immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiplex Immunofluorescence: A Powerful Tool in Cancer Immunotherapy.</a> Int Mol Sci. 24 (4), 3086(2023).</li>
<li>Taube, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Society+for+Immunotherapy+of+Cancer+statement+on+best+practices+for+multiplex+immunohistochemistry+%28IHC%29+and+immunofluorescence+%28IF%29+staining+and+validation%5BTitle%5D)+AND+%22J+ImmunoTher+Cancer%22%5BJournal%5D)">The Society for Immunotherapy of Cancer statement on best practices for multiplex immunohistochemistry (IHC) and immunofluorescence (IF) staining and validation.</a> J ImmunoTher Cancer. 8 (1), e000155(2020).</li>
<li>Myers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+automated+slide+stainers+for+immunohistochemistry+and+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Medl+Lab+Obser%22%5BJournal%5D)">A review of automated slide stainers for immunohistochemistry and in situ hybridization.</a> Medl Lab Obser. 40 (1), 41-44 (2008).</li>
<li>Schwarze, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratumoral+administration+of+CD1c+%28BDCA-1%29%2B+and+CD141+%28BDCA-3%29%2B+myeloid+dendritic+cells+in+combination+with+talimogene+laherparepvec+in+immune+checkpoint+blockade+refractory+advanced+melanoma+patients%3A+a+phase+I+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+ImmunoTher+Cancer%22%5BJournal%5D)">Intratumoral administration of CD1c (BDCA-1)+ and CD141 (BDCA-3)+ myeloid dendritic cells in combination with talimogene laherparepvec in immune checkpoint blockade refractory advanced melanoma patients: a phase I clinical trial.</a> J ImmunoTher Cancer. 10 (9), e005141(2022).</li>
<li>Bankhead, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QuPath%3A+Open+source+software+for+digital+pathology+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">QuPath: Open source software for digital pathology image analysis.</a> Sci Rep. 7 (1), 16878(2017).</li>
<li>Koppel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+validation+of+PD-L1+immunohistochemistry+staining+protocols+using+the+antibody+clone+28-8+on+different+staining+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">Optimization and validation of PD-L1 immunohistochemistry staining protocols using the antibody clone 28-8 on different staining platforms.</a> Mod Pathol. 31 (11), 1630-1644 (2018).</li>
<li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+Requirements+and+Recommendations+for+Multiplex+Immunofluorescence+Tyramide+Signal+Amplification+Assays+to+Support+Translational+Oncology+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Procedural Requirements and Recommendations for Multiplex Immunofluorescence Tyramide Signal Amplification Assays to Support Translational Oncology Studies.</a> Cancers. 12 (2), 255(2020).</li>
<li>Surace, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+Multiplex+Immunofluorescence+Panel+for+Immuno-oncology+Studies+on+Formalin-fixed+Carcinoma+Tissue+Specimens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens.</a> J Vis Exp. (143), e58390(2019).</li>
<li>Hinck, L., Näthke, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+cell+and+tissue+organization+in+cancer+of+the+breast+and+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Changes in cell and tissue organization in cancer of the breast and colon.</a> Curr Opin Cell Biol. 0, 87-95 (2014).</li>
<li>Alturki, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+the+Immune+Checkpoint+Inhibitors+in+the+Context+of+Cancer+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Review of the Immune Checkpoint Inhibitors in the Context of Cancer Treatment.</a> J Clin Med. 12 (13), 4301(2023).</li>
<li>Sun, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+checkpoint+therapy+for+solid+tumours%3A+clinical+dilemmas+and+future+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Targeted+Ther%22%5BJournal%5D)">Immune checkpoint therapy for solid tumours: clinical dilemmas and future trends.</a> Signal Transduct Targeted Ther. 8 (1), 1-26 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anti-CD3</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clone BC33 (BioCare). Onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Anti-CD4</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clone SP35 (Abcam). Onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Anti-CD68</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clone KP1 (BioCare). Onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Anti-CD8</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clone C8/144B (BioCare). Onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Anti-Cytokeratin + Anti-SOX10</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clones AE1/AE3 (Bethyl Labs) en BC34 (BioCare). Onderdeel van ULT50801, geleverd als mengsel</td></tr><tr><td>Anti-FOXP3</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clone 236A/E7 (Thermo). Onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Anti-PD1</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clone CAL20 (Abcam). Onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Anti-PDL1</td><td>Ultivue</td><td></td><td>Clone 73-10 (Abcam). Onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Axioscan.Z1 Microscoop</td><td>Zeiss</td><td></td><td>genoemd als fluorescentiemicroscoop in tekst</td></tr><tr><td>Bond Dewax Solution</td><td>Leica</td><td>AR9222</td><td></td></tr><tr><td>Bond Epitope Retrieval Solution 2</td><td>Leica</td><td>AR9640</td><td></td></tr><tr><td>Bond Open Containers, 30 mL</td><td>Leica</td><td>OP309700</td><td></td></tr><tr><td>Bond Research Detection Kit</td><td>Leica</td><td>DS9455</td><td></td></tr><tr><td>Bond Titration Inserts</td><td>Leica</td><td>OPT9049</td><td></td></tr><tr><td>Bond Titration Kit</td><td>Leica</td><td>OPT9719</td><td></td></tr><tr><td>Bond Universal Covertiles</td><td>Leica</td><td>S21.4611</td><td></td></tr><tr><td>Bond Wash Solution 10x Concentrate</td><td>Leica</td><td>AR9590</td><td></td></tr><tr><td>BondRX Autostainer</td><td>Leica</td><td></td><td>genoemd als "autostainer" in tekst</td></tr><tr><td>BondRX Software</td><td>Leica</td><td></td><td>Versie 6.0 of hoger</td></tr><tr><td>Coverslips, #1.5 dikte</td><td>Corning</td><td>2980-244</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, 200 proof</td><td>VWR</td><td>89370-084</td><td></td></tr><tr><td>FFPE weefselblokken</td><td>BioIVT</td><td></td><td>weefseltypen variëren</td></tr><tr><td>OmniVUE 8-plex assay (CD3, CD4, CD8, CD68, FOXP3, PD-1, PD-L1, pan-Cytokeratin/SOX10)</td><td>Ultivue</td><td>ULT50801</td><td>bevat alle andere Ultivue componenten</td></tr><tr><td>Fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Boston BioProducts</td><td>C-9911F</td><td>(pH 7.4 met 2.7 mM KCl en 137 mM NaCl)</td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifade Mountant</td><td>Thermo</td><td>P10144</td><td>genoemd als "montagemedium" in tekst</td></tr><tr><td>UltiAnalyzer.AI</td><td>Ultivue</td><td></td><td></td></tr><tr><td>UltiStacker.AI</td><td>Ultivue</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultivue Amplification Buffer</td><td>Ultivue</td><td></td><td>onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Antibody Diluent</td><td>Ultivue</td><td></td><td>onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Exchange Buffer</td><td>Ultivue</td><td></td><td>onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Exchange Initiator</td><td>Ultivue</td><td></td><td>onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Exchange Neutralizer</td><td>Ultivue</td><td></td><td>onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Fluorescent Probes 1</td><td>Ultivue</td><td></td><td>onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Fluorescent Probes 2</td><td>Ultivue</td><td></td><td>onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Pre-Amplification Mix</td><td>Ultivue</td><td></td><td>onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Ultivue Probe Buffer</td><td>Ultivue</td><td></td><td>onderdeel van ULT50801</td></tr><tr><td>Ultrapure water</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td></td></tr></tbody></table>

high-throughput geautomatiseerde multiplex immunofluorescentietesten voor translationeel onderzoek

High-Throughput Automated Multiplex Immunofluorescence Assays for Translational Research

High-throughput geautomatiseerde multiplex immunofluorescentietesten voor translationeel onderzoek

Multiplex immunofluorescence (mIF) is an advanced technique that allows for detailed, spatially resolved analysis of tissue samples by visualizing ...

high-throughput-automated-multiplex-immunofluorescence-assays-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Hier beschrijven we een geoptimaliseerde multiplex reverse transcriptase kwantitatieve PCR (qRT-PCR)-protocol in combinatie met een microfluïdisch platform als een kost en tijd efficiënte high-throughput screening tool voor microRNA (miRNA) expressie niveaus, in het bijzonder bij het werken met beperkte hoeveelheden van het monster.

High Throughput MicroRNA Profiling: Geoptimaliseerd Multiplex qRT-PCR op nanoliter Schaalverdeling op de Fluidigm Dynamic ArrayTM IFCS

Met behulp van Luminex Corporation xMAP microsfeer technologie, hebben we de multiplexverzending fluorometrische immunoassay (MFIA) voor serologische tests van de verschillende proefdier. De MFIA een suspensie microarray waar antigen, weefselcontrole of immunoglobulinen covalent gekoppeld aan gekleurde polystyreen microsferen. De MFIA testmethode, evenals verschillende onderwerpen voor problemen oplossen is gericht.

Multiplexed fluorometrische Immunoassay Methodiek en problemen oplossen

We presenteren in de huidige studie een nieuwe fluorescentie gebaseerde assay middels lymfocyten afkomstig van een transgene muis. Deze test is geschikt voor high-throughput screening (HTS) van kleine moleculen begiftigd met de hoedanigheid van het remmen of bevorderen van lymfocyt activering.

Een fluorescentie gebaseerde lymfocyt Assay geschikt voor high-throughput screening van kleine moleculen

Een gedetailleerd protocol voor een zes-marker multiplex immunofluorescentie paneel is geoptimaliseerd en uitgevoerd, met behulp van een geautomatiseerde stainer voor meer consistente resultaten en een kortere tijd van de procedure. Deze aanpak kan direct worden aangepast door elk laboratorium voor immuno-oncologie studies.

Geautomatiseerde Multiplex immunofluorescentie paneel voor Immuno-oncologie Studies over formaline-vaste Carcinoma weefsel Specimens

Hier beschrijven we een protocol voor multiplex fluorescerende immunohistochemische kleuring en imaging voor de gelijktijdige localisatie van meerdere kanker-geassocieerde antigenen in lymfoom. Dit protocol kan worden uitgebreid tot de colocalization analyse van biomarkers binnen alle weefselsecties.

Multiplexed fluorescerende immunohistochemische kleuring, Imaging en analyse in histologische monsters van lymfoom

Multiplex fluorescerende immunohistochemie is een opkomende technologie die het mogelijk maakt de visualisatie van meerdere celtypen binnen intact formalin-vaste, paraffine ingesloten (FFPE) weefsel. Gepresenteerd zijn richtlijnen voor het waarborgen van een succesvol 7-kleuren multiplex met instructies voor het optimaliseren van antilichamen en reagentia, het voorbereiden van dia's, ontwerp en tips voor het vermijden van veelvoorkomende problemen.

Optimalisatie, ontwerp en Vermijd valkuilen in handmatige multiplex fluorescerende immunohistochemie

We beschrijven een snelle kleuringsmethode om multispectrale beeldvorming op bevroren weefsels uit te voeren.

Een snelle methode voor multispectrale fluorescentiebeeldvorming van bevroren weefselsecties

Geautomatiseerde assays met behulp van multi-well microplaten zijn voordelige benaderingen voor het identificeren van pathway-regulatoren door de beoordeling van een groot aantal omstandigheden in één experiment mogelijk te maken. Hier hebben we het gevestigde macropinosoombeeldvormings- en kwantificeringsprotocol aangepast aan een 96-well microplaatformaat en bieden we een uitgebreid overzicht voor automatisering met behulp van een multi-mode plaatlezer.

Geautomatiseerde beeldvorming en analyse voor de kwantificering van fluorescerend gelabelde macropinosomen

In dit artikel wordt een protocol beschreven voor handmatige tyramide signaalversterking (TSA) multiplex immunofluorescentie (mIF) in combinatie met beeldanalyse en ruimtelijke analyse. Dit protocol kan worden gebruikt met formaline-vaste paraffine-ingebedde (FFPE) secties voor de kleuring van twee tot zes antigenen per dia, afhankelijk van de diascanner die beschikbaar is in het laboratorium.

Multiplex immunofluorescentie gecombineerd met ruimtelijke beeldanalyse voor de klinische en biologische beoordeling van de micro-omgeving van de tumor

De implementatie van een goedkope, veelzijdige fotobestralingstechniek met de handmatige IBEX-methode zorgt voor een optimale beeldvorming van menselijk weefsel met aanzienlijke natuurlijke autofluorescentie. Dit protocol beschrijft hoe gemultiplexte beelden van hele dia's kunnen worden verkregen uit gearchiveerde klinische monsters met behulp van een omgekeerde microscoop, algemeen verkrijgbare reagentia en open-source software voor beelduitlijning en -verwerking.

Geoptimaliseerde workflow voor iteratief bleken breidt multiplexiteitsbeeldvorming van sterk autofluorescerende klinische monsters uit

Multiplexed immunofluorescentie maakt sequentiële labeling van meerdere antilichaammarkers binnen één weefselsectie mogelijk om ruimtelijke analyse van weefselarchitectuur en celpopulaties te ondersteunen. Hier wordt een workflow gepresenteerd voor multiplexdetectie van senescentie-geassocieerde, structurele en immuunmarkers, inclusief handmatige en geautomatiseerde preparat, iteratieve beeldvorming en single-cell analyse met behulp van digitale pathologiesoftware.

Multiplexed Immunofluorescentietest voor ruimtelijke beoordeling van senescence-markers in vivo

Leer een geautomatiseerd protocol voor multiplex immunofluorescentie op een automatische slide-stainer. Deze methode maakt snelle, reproduceerbare spatial proteomics mogelijk voor translationeel onderzoek met FFPE-weefsels.

High-throughput geautomatiseerde multiplex immunofluorescentietesten voor translationeel onderzoek

Meer video's verkennen