Name: Elektroporatie van gesneden menselijke corticale organoïden voor onderzoek naar de genfunctie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Leer elektroporatie van gesneden menselijke corticale organoïden voor genetische manipulatie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar genexpressie en neurale ontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>CRISPR/Cas9-genknock-out in gesneden menselijke corticale organoïden via elektroporatie

```html
<table><tbody><tr><td>15 mL PP Centrifuge Tubes, conical</td><td>Corning</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>4D-Nucleofector Core Unit</td><td>Lonza</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4D-Nucleofector X Unit</td><td>Lonza</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 mL polystyrene round-bottom tube with cell-strainer cap</td><td>Corning</td><td>Falcon 352235</td><td></td></tr><tr><td>6-well plate, nunclon treated</td><td>Thermo Fisher</td><td>140675</td><td>Voor hiPSC-kweek</td></tr><tr><td>6-well plate, ultra low attachment</td><td>Corning</td><td>3471</td><td>Voor organoïdkweek</td></tr><tr><td>A83-01</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>72022</td><td>Forebrain medium 1 (https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.02.002)15</td></tr><tr><td>Air compressor</td><td>Aerotec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Chicken IgY (IgG) (H+L)</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>703-545-155</td><td>Secundaire antistof, RRID: AB_2340375; verdunning 1:1000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)</td><td>Invitrogen</td><td>A-31572</td><td>Secundaire antistof, RRID: AB_162543; verdunning 1:1000</td></tr><tr><td>Alt-R CRISPR-Cas9 crRNA, 2 nmol</td><td>Integrated DNA technologies</td><td></td><td>Aangepaste ontwerp (bestel als 2 nmol)</td></tr><tr><td>Alt-R CRISPR-Cas9 tracrRNA</td><td>Integrated DNA technologies</td><td>1072532</td><td>5 nmol</td></tr><tr><td>Alt-R S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3</td><td>Integrated DNA technologies</td><td>1081060</td><td>100 &micro;g, van Streptococcus pyogenes</td></tr><tr><td>Amphotericin B (Fungizone)</td><td>Gibco</td><td>15290018</td><td>Forebrain medium 2, 3, en 4&nbsp; (https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.02.002)15</td></tr><tr><td>Anti-GFP primaire antistof (kip, polyklonaal)</td><td>Abcam</td><td>ab13970</td><td>RRID: AB_300798; verdunning 1:2000</td></tr><tr><td>Anti-PCGF4 primaire antistof (muis, monoklonaal)</td><td>Millipore</td><td>05-637&nbsp;</td><td>RRID: AB_309865; verdunning 1:300</td></tr><tr><td>ApoTome fluorescente microscoop</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ascorbic Acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1043003</td><td>Forebrain medium 4&nbsp; (https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.02.002)15</td></tr><tr><td>B27-supplement (+ vitamin A)</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>Forebrain medium 3, 4&nbsp;&nbsp; (https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.02.002)15</td></tr><tr><td>Banana to Micrograbber Cable Kit</td><td>Harvard Apparatus BTX</td><td>45-0216</td><td></td></tr><tr><td>Biometra TRIO-Thermocycler (PCR-machine)</td><td>Analytik Jena</td><td>846-2-070-723</td><td></td></tr><tr><td>Capillaries, borosilicaatglas met filament, OD 1.2 mm; ID 0.69 mm; 10 cm lengte</td><td>Science Products</td><td>BF120-69-10</td><td>Moet getrokken worden tot specifieke dikte</td></tr><tr><td>CHIR-99021</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>72052</td><td>Forebrain medium 2&nbsp; (https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.02.002)15</td></tr><tr><td>Collagenase Type IV</td><td>Gibco</td><td>17104019</td><td></td></tr><tr><td>CRTDi004-A</td><td>Stem Cell Engineering Facility at CMCB DD</td><td>https://hpscreg.eu/cell-line/CRTDi004-A</td><td>Single-cell aangepaste hiPSC-lijn van gezonde donor</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Roche</td><td>10236276001</td><td>1 mg/mL stock, gebruik 1:1000 verdund voor IF</td></tr><tr><td>Dibutyryl-cAMP</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>73884</td><td>Forebrain medium 4&nbsp; (https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.02.002)15</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>Fisher Scientific</td><td>31330095</td><td>Forebrain medium 1, 2, en 3&nbsp; (https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.02.002)15</td></tr><tr><td>Dorsomorphin</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>72102</td><td>Forebrain medium 1&nbsp; (https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.02.002)15</td></tr><tr><td>Dumont #55 Forceps, straigth, 11 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>ECM 830 Square Wave Electroporation System</td><td>Harvard Apparatus BTX</td><td>45-2052</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>32205-1L-M</td><td></td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>EDS-500G</td><td></td></tr><tr><td>Fast Green FCF</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F7252</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>GE Healthcare&nbsp;</td><td>SH30070.03&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Flaming/Brown Micropipette Puller</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97</td><td>Voor het trekken van microcapillairen</td></tr><tr><td>Geneious Prime</td><td>GraphPad Software LLC d.b.a Geneious</td><td>Software versie 2024.0.5</td><td></td></tr><tr><td>gLACZ</td><td>Kalebic et al., 2016; Platt et al., 2014</td><td></td><td>5'-TGCGAATACGCCCACGCGATCGG; onderstreepte nucleotiden = PAM</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>35050038</td><td>Forebrain medium 1, 2, 3, en 4 (https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.02.002)15</td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8898</td><td></td></tr><tr><td>gPCGF4 KO1</td><td>this paper</td><td></td><td>5'-TGAACTTGGACATCACAAATAGG (komt overeen met de KO-beelden in figuur 3I+J)</td></tr><tr><td>gPCGF4 </

elektroporatie van gesneden menselijke corticale organoïden voor onderzoek naar de genfunctie

Electroporation of Sliced Human Cortical Organoids for Studies of Gene Function

Elektroporatie van gesneden menselijke corticale organoïden voor onderzoek naar de genfunctie

Human cortical organoids have become important tools for studying human brain development, neurodevelopmental disorders, and human brain evolution. ...

electroporation-sliced-human-cortical-organoids-for-studies-gene

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Deze procedure beschrijft een methode voor de isolatie en de cultuur van het muriene orgaan van Corti, met of zonder de spiraal limbus en spiraal ganglion neuronen. We tonen ook aan een methode voor de expressie van een exogeen reportergen in het orgaan van Corti explant door elektroporatie.

Primaire Cultuur en Plasmide Elektroporatie van de muizen orgaan van Corti.

In utero elektroporatie is een waardevolle methode voor het transfecteren neuronale stamcellen in vivo. Afhankelijk van de plaatsing van de elektroden en de ontwikkeling meetpunt van elektroporatie, kunnen bepaalde subsets van corticale cellen worden gericht. Gerichte cellen kunnen vervolgens worden geanalyseerd in vivo of in vitro voor de effecten van genetische manipulatie.

In utero Elektroporatie gevolgd door primaire neuronale Cultuur voor het bestuderen van Gene Functie in subset van de corticale neuronen

Om een ​​snelle evaluatie van de functie van genen in de ontwikkeling van cerebrale cortex voeren beschrijven we werkwijzen...

Methoden voor Studie van Neuronale Morphogenesis:<em&gt; Ex vivo</em&gt; RNAi Elektroporatie in Embryonale Murine Cerebral Cortex

This video demonstrates the protocol for single-cell electroporation of genes in both excitatory and inhibitory neurons across a range of in vitro hippocampal slice cultures. The technique is useful to examine specific molecular and physiological functions of neurons, including cell autonomous mechanisms and transsynaptic protein interactions.

Single Cell Electroporation in Organotypic Brain Slice Cultures: An In Vitro Technique to Deliver Plasmids Inside Targeted Neurons in Brain Hippocampal Slices

Dit protocol beschrijft een verbeterde explantaat procedure die inhoudt...

Ex utero elektroporatie en Whole halfrond Explantaten: Een eenvoudige experimentele methode voor bestudering van vroege corticale ontwikkeling

Dubbel in utero elektroporatie maakt het richten van celpopulaties die ruimtelijk en tijdelijk gescheiden. Deze techniek is nuttig om interacties tussen die celpopulaties te visualiseren met behulp van fluorescerende eiwitten in normale omstandigheden, maar ook na functionele experimenten om genen van belang te verstoren.

Dubbel in utero-elektroporatie om tijdelijk en ruimtelijk gescheiden celpopulaties te targeten

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor eencellige elektroporatie dat genen kan leveren in zowel excitatory als remmende neuronen in een reeks in vitro hippocampale slice-cultuurleeftijden. Onze aanpak zorgt voor een nauwkeurige en efficiënte expressie van genen in individuele cellen, die kunnen worden gebruikt om cel-autonome en intercellulaire functies te onderzoeken.

Eencellige elektroporatie over verschillende organotypische slicecultuur van hippocampale excitatory en klassespecifieke remmende neuronen

De elektroporatie van cerebrale organoïden van primaten biedt een nauwkeurige en efficiënte benadering om voorbijgaande genetische modificatie (s) te introduceren in verschillende voorlopertypen en neuronen in een modelsysteem dat dicht bij de ontwikkeling van primaat (patho) fysiologische neocortex ligt. Dit maakt de studie van neurologische ontwikkelings- en evolutionaire processen mogelijk en kan ook worden toegepast voor ziektemodellering.

Gerichte micro-injectie en elektroporatie van cerebrale organoïden van primaten voor genetische modificatie

Embryonale kuiken netvlies celculturen vormen waardevolle hulpmiddelen voor de studie van fotoreceptor biologie. We hebben een efficiënte genoverdracht techniek gebaseerd op ex ovo plasmide elektroporatie van de netvliezen voorafgaand aan cultuur ontwikkeld. Deze techniek aanzienlijk vergroot transfectie-efficiënties op dit moment beschikbare protocollen, waardoor genetische manipulatie mogelijk voor dit systeem.

Efficiënte Gene Transfer in Chick netvliezen voor primaire cel Cultuurwetenschappen: An Ex-ovo Elektroporatie Aanpak

We presenteren een methode die de isolatie en kweek van cochleaire explantaten van het binnenoor van embryonale muizen beschrijft. We demonstreren ook een methode voor genoverdracht naar cochleaire explantaten via vierkantgolfelektroporatie. De in vitro explantaatkweek gekoppeld aan de genoverdrachtstechniek stelt onderzoekers in staat om de effecten van het veranderen van genexpressie tijdens de ontwikkeling te bestuderen.

Cultuur van embryonale Mouse Cochlear Explantaten en Gene Transfer door elektroporatie

Leer elektroporatie van gesneden menselijke corticale organoïden voor genetische manipulatie. Deze methode ondersteunt onderzoek naar genexpressie en neurale ontwikkeling.

Elektroporatie van gesneden menselijke corticale organoïden voor onderzoek naar de genfunctie

Meer video's verkennen