Name: Zuivering, expansie en op flowcytometrie gebaseerde fenotypering van van muizen afgeleide beenmergmesenchymale stamcellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: Leer een kosteneffectieve methode voor zuivering en expansie van muizen beenmergmesenchymale stamcellen met flowcytometrie. Dit protocol verbetert de groei en differentiatiecapaciteit voor preklinisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Chu, D. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+the+progress+of+isolation%2C+culture%2C+storage%2C+and+clinical+application+of+human+bone+marrow+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">An update on the progress of isolation, culture, storage, and clinical application of human bone marrow mesenchymal stem/stromal cells.</a> Int J Mol Sci. 21 (3), 708(2020).</li>
<li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Transl%22%5BJournal%5D)">An improved protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> J Orthop Transl. 3 (1), 26-33 (2015).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+from+apoptotic+BMSCs+ameliorate+osteoporosis+via+transporting+regenerative+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles from apoptotic BMSCs ameliorate osteoporosis via transporting regenerative signals.</a> Theranostics. 14 (9), 3583-3602 (2024).</li>
<li>Maridas, D. E., Rendina-Ruedy, E., Le, P. T., Rosen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells+and+osteoclast+progenitors+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and differentiation of bone marrow stromal cells and osteoclast progenitors from mice.</a> J Vis Exp. (131), e56750(2018).</li>
<li>Chu, D. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+stem+cells+for+therapy%3A+An+update+on+the+progress+of+isolation%2C+culture%2C+storage%2C+and+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue stem cells for therapy: An update on the progress of isolation, culture, storage, and clinical application.</a> J Clin Med. 8 (7), 917(2019).</li>
<li>Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+fibrotic+diseases%E2%80%94the+two+sides+of+the+same+coin%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in fibrotic diseases—the two sides of the same coin.</a> Acta Pharmacol Sin. 44 (2), 268-287 (2023).</li>
<li>Carbone, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+cervical+dislocation+as+a+humane+euthanasia+method+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Assessing cervical dislocation as a humane euthanasia method in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 352-356 (2012).</li>
<li>Swamydas, M., Lionakis, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+purification+and+labeling+of+mouse+bone+marrow+neutrophils+for+functional+studies+and+adoptive+transfer+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation, purification and labeling of mouse bone marrow neutrophils for functional studies and adoptive transfer experiments.</a> J Vis Exp. (77), e50586(2013).</li>
<li>Grossner, T., Haberkorn, U., Hofmann, J., Gotterbarm, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+basal+cell+culture+media+upon+the+osteogenic+response+of+hMSCs+evaluated+by+99mTc-HDP+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of different basal cell culture media upon the osteogenic response of hMSCs evaluated by 99mTc-HDP labeling.</a> Int J Mol Sci. 23 (11), 6288(2022).</li>
<li>Janda, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+Wnt+agonists+that+phenocopy+canonical+Wnt+and+%CE%B2-catenin+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Surrogate Wnt agonists that phenocopy canonical Wnt and β-catenin signalling.</a> Nature. 545 (7653), 234-237 (2017).</li>
<li>Bernar, A., Gebetsberger, J. V., Bauer, M., Streif, W., Schirmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+Alizarin+Red+S+assay+by+enhancing+mineralization+of+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optimization of the Alizarin Red S assay by enhancing mineralization of osteoblasts.</a> Int J Mol Sci. 24 (1), 723(2022).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+osteogenic+differentiation+of+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+in+mice+inhibited+by+cyclophosphamide+with+psoralen%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Tissue+Eng+Res%22%5BJournal%5D)">Restoration of osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in mice inhibited by cyclophosphamide with psoralen.</a> Chin J Tissue Eng Res. 29 (1), 16-23 (2025).</li>
<li>Papaccio, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+Cancer+cells%2C+cancer+stem+cells%2C+and+mesenchymal+stem+cells%3A+Influence+in+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Concise review: Cancer cells, cancer stem cells, and mesenchymal stem cells: Influence in cancer development.</a> Stem Cells Transl Med. 6 (12), 2115-2125 (2017).</li>
<li>Kolf, C. M., Cho, E., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells.+Biology+of+adult+mesenchymal+stem+cells%3A+Regulation+of+niche%2C+self-renewal+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells. Biology of adult mesenchymal stem cells: Regulation of niche, self-renewal and differentiation.</a> Arthritis Res Ther. 9 (1), 204(2007).</li>
<li>Soleimani, M., Nadri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).</li>
<li>Abdallah, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+reliable+protocol+for+long-term+culture+of+murine+bone+marrow+stromal+%28mesenchymal%29+stem+cells+that+retained+their+in+vitro+and+in+vivo+stemness+in+long-term+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Proced+Online%22%5BJournal%5D)">A simple and reliable protocol for long-term culture of murine bone marrow stromal (mesenchymal) stem cells that retained their in vitro and in vivo stemness in long-term culture.</a> Biol Proced Online. 21 (1), 3(2019).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+sequencing+reveals+gene+expression+signatures+associated+with+bone+marrow+stromal+cell+subpopulations+and+time+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Single cell sequencing reveals gene expression signatures associated with bone marrow stromal cell subpopulations and time in culture.</a> J Transl Med. 17 (1), 23(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1mL spuit(22G spuitnaald)</td><td>KINDLY GROUP(KDL)</td><td>60017031</td><td></td></tr><tr><td>1-Step NBT/BCIP&nbsp;</td><td>Pierce Biotechnology, Inc.</td><td>34042</td><td>Alkaline fosfataseverkleuring</td></tr><tr><td>10% neutraal gebufferd formaline</td><td>Wexis</td><td>5200250</td><td>celfixatie</td></tr><tr><td>6-well plaat</td><td>Labselect</td><td>11110</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>24-well plaat</td><td>Labselect</td><td>11310</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>40 μm Cell Strainer</td><td>Cornig</td><td>352340</td><td>Filtratie om agglomeraten te verwijderen</td></tr><tr><td>50 mL spuit</td><td>KINDLY GROUP(KDL)</td><td>60017040</td><td></td></tr><tr><td>75% ethanol&nbsp;</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>31009001</td><td>Desinfecteer de huid van muizen</td></tr><tr><td>Alizarine Rood S</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>A5533</td><td>Calciumafzettingen en verkalkte knobbeltjes detectie</td></tr><tr><td>APC CD44 monoklonaal antilichaam (klon:IM7)</td><td>eBioscience</td><td>17-0441-82</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>APC Rat IgG2b kappa Isotype Control (Klon:eB149/10H5)</td><td>eBioscience</td><td>17-4031-82</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>Autoclaaf</td><td>Japan Hiryama Company</td><td>HVE-50</td><td>Sterilisatie chirurgische instrumenten</td></tr><tr><td>CO2 incubator</td><td>Thermo Fisher Technology (China)Co., Ltd.</td><td>300583057</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Cytoflex flowmetrie</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td>A00-1-1102</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>dexamethason</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>D4902</td><td>BMSCs osteogene differentiatie</td></tr><tr><td>Schaal (100mm)</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Schaal (60mm)</td><td>Corning</td><td>430166</td><td>Plaats monsters tijdens transplantatie&nbsp;</td></tr><tr><td>Desinfecterende wattenbolletjes</td><td>Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd.</td><td>20230627</td><td>Desinfecteer de huid van muizen</td></tr><tr><td>Sterile wegwerphandschoenen</td><td>Shanghai Honglong Industrial Co.,Ltd</td><td>YT21131</td><td>Steriele operatie</td></tr><tr><td>Dubbele leeuw bestraalde knaagdier dieet</td><td>Suzhou Shuangshi Experimental Animal Feed Technology Co., Ltd.</td><td>GB 14924.3</td><td>Diervoeding</td></tr><tr><td>Fetaal runderserum&nbsp;</td><td>Shanghai Biosun Sci&amp;Tech Co.,Ltd.</td><td>BS-0002-500</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>FITC Hamster Anti-Rat CD29 (klon:Ha2/5)</td><td>BD Biosciences</td><td>555003</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>FITC Hamster IgM, &lambda;1 Isotype Control (klon:G235-1)</td><td>BD Biosciences</td><td>553960</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>gelatine (0,1%)</td><td>OriCell</td><td>GLT-11301</td><td>Verbeter de hechtingscapaciteit van cellen</td></tr><tr><td>IVC's muizenkooi</td><td>Suzhou Monkey King Animal Experimental Equipment Technology Co., Ltd.</td><td>HH-MMB-2</td><td>Dierlijke barrière</td></tr><tr><td>L-ascorbinezuur</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>A8960</td><td>BMSCs osteogene differentiatie</td></tr><tr><td>Markeerpen</td><td>Zebra Trading (Shenzhen) Co.,Ltd.&nbsp;</td><td>YYST5</td><td>Markeer de cellulaire informatie op de petrischaal</td></tr><tr><td>MEM Alpha Modificatie (1X)</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>SH30265</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Muis Botuinmerg Mesenchymale Stamcellen Adipogene Differentiatie Kit</td><td>Cyagen</td><td>MUXMX-90031</td><td>BMSCs adipogene differentiatie&nbsp;</td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ti2 Inverted Microscope Systeem</td><td>Japan Nikon Corporatin</td><td>Ti2-U</td><td>Observeer de cellen en foto's nemen</td></tr><tr><td>Oogheelkundige schaar&nbsp;</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>Y00030 JZ</td><td>Snij de huid</td></tr><tr><td>Oogheelkundige pincet</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>BS-ZER-S-100 Biosharp</td><td>Verkrijg muizenbotweefsel.</td></tr><tr><td>PASTEUR PIPETTE</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>BS-XG-03M</td><td>Zuig het kweekmedium</td></tr><tr><td>PE Rat Anti-Mouse CD31 (klon:Ha2/5)</td><td>BD Biosciences</td><td>553373</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>PE Rat IgG2a, &kappa; Isotype Control (klon:R35-95)</td><td>BD Biosciences</td><td>553930</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>PE-Cyanine7 Ly-6A/E (Sca-1) Monoclonal Antilichaam (klon:D7)</td><td>eBioscience</td><td>25-5981-82</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>PE-Cyanine7 Rat IgG2a kappa Isotype Control (klon:eBR2a)</td><td>eBioscience</td><td>25-4321-82</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>Penicilline-Streptomycine</td><td>Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd</td><td>2585636</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>PerCP-Cy5.5 Rat Anti-Mouse CD45 (klon:Ha2/5)</td><td>BD Biosciences</td><td>561869</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>PerCP-Cy5.5 Rat IgG2b, &kappa; Isotype Control (klon:A95-1)</td><td>BD Biosciences</td><td>550764</td><td>Flow cytometry&nbsp;</td></tr><tr><td>Schilfers</td><td>Surgical Instrument Factory oShanghai Medical Devices?Group?Co., Ltd.&nbsp;</td><td>J11010-10# JZ</td><td>Isoleer de achterpoten en romp van de muis, en verwijder overtollig weefsel van het bot</td></tr><tr><td>Steriele kap</td><td>Thermo Fisher Technology (China)Co., Ltd.</td><td>ECO0.9</td><td>Chirurgische operatietafel</td></tr><tr><td>steriele chirurgische schermen</td><td>Henan Huayu Medical Equipment Co., Ltd.</td><td>20160900</td><td>Zorg voor een steriele operatiegebied</td></tr><tr><td>Buis (50 mL)</td><td>Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd.&nbsp;</td><td>BLD-BL2002500</td><td>Bewaar de gefilterde celoplossing</td></tr><tr><td>trypsine-EDTA (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>verteer adhesieve cellen</td></tr><tr><td>&beta;-glycerofosfaat</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>G5422</td><td>BMSCs osteogene differentiatie</td></tr></tbody></table>

zuivering, expansie en op flowcytometrie gebaseerde fenotypering van van muizen afgeleide beenmergmesenchymale stamcellen

Purification, Expansion, and Flow Cytometry-Based Phenotyping of Mouse Derived Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

Zuivering, expansie en op flowcytometrie gebaseerde fenotypering van van muizen afgeleide beenmergmesenchymale stamcellen

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of stem cells that can self-renew and differentiate into multiple cell lineages. Among them, MSCs found in ...

purification-expansion-flow-cytometry-based-phenotyping-mouse-derived

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een methode om de verdeling van beenmerg hematopoietische stamcellen in flowcytometrie en efficiënt isoleren sterk gezuiverde hematopoietische stamcellen (HSC) analyse beschreven. De isolatie procedure is in hoofdzaak gebaseerd op magnetische verrijking van c-Kit + cellen en cel sortering tot HSCs voor cellulaire en moleculaire studies te zuiveren.

Fenotypische analyse en isolatie van Murine hematopoëtische stamcellen en Lineage-geëngageerde voorouders

We beschrijven een protocol voor isolatie en zuivering van neutrofielen van muizen beenmerg door dichtheidsgradiënt centrifugatie en neutrofielen labeling met CellTracker kleurstoffen. Dit is een eenvoudige, snelle, reproduceerbare en economische methode voor het verkrijgen van grote aantallen neutrofielen voor downstream functionele studies of adoptieve overdracht en experimenten volgen.

Isolatie, zuivering en etikettering van de Muis Bone Marrow Neutrophils voor functionele studies en adoptieve overdracht Experimenten

Duidelijk naar voren komt een protocol voor het detecteren van gelijktijdige uitdrukking van leukemie stamcel merkers op primaire acute myeloïde leukemie cellen door stroom cytometry. We laten zien hoe te kwantificeren drie voorlopercellen populaties en een vermeende LSC bevolking met de toenemende mate van rijping. We hebben bevestigd dat de aanwezigheid van deze populaties in overeenkomstige patiënt-afgeleid-xenografts.

Stroom Cytometry om te schatten leukemie cellen van de stam in primaire Acute myeloïde leukemie en patiënt-afgeleid-xenografts, bij diagnose en Follow Up

De MDS-diagnose is moeilijk in de afwezigheid van morfologische criteria of niet-informatieve cytogenetica. MFC kan helpen verfijnen van het diagnostisch proces van MDS. Om te worden nuttig zijn voor de klinische praktijk, de MFC analyse moet worden gebaseerd op parameters met voldoende gevoeligheid en specificiteit en gegevens moeten worden gereproduceerd tussen verschillende exploitanten.

Database-geleide Flow-cytometry voor evaluatie van het beenmerg myeloïde cel rijping

We laten zien hoe te identificeren en te isoleren 6 deelverzamelingen van myeloïde voorlopercellen uit lymfkliertest beenmerg met behulp van een combinatie van magnetische en fluorescentie sorteren (MACS en FACS). Dit protocol kan worden gebruikt voor in vitro cultuur assays (methylcellulose of vloeistof culturen), in vivo adoptief overdracht experimenten en RNA/eiwit analyses.

Identificatie en isolatie van de Oligopotent en Lineage-begaan myeloïde voorlopercellen uit beenmerg van de muis

Xenobiotic Efflux pompen zijn zeer actief in hematopoietische stam en voorlopercellen (Hspc's) en veroorzaken extrusie van TMRM, een mitochondriale membraan potentiële fluorescerende kleurstof. Hier presenteren we een protocol om het mitochondriale membraan potentieel in Hspc's met TMRM nauwkeurig te meten in aanwezigheid van verapamil, een effluxpomp remmer.

Verbetering van de nauwkeurigheid van de flowcytometrische beoordeling van het mitochondriale membraan potentieel in hematopoietische stam en voorlopercellen door remming van effluxpompen

Deze methode beschrijft de zuivering door flowcytometrie van MEP en MKp van muizendijbenen, tibia's en bekkenbotten.

Isolatie van muizen megakaryocyten voorlopers

Hier beschrijven we een eenvoudig protocol voor de isolatie en kleuring van muriene beenmergcellen tot fenotype hemopoietische stam- en voorlopercellen, samen met de ondersteunende niche endotheel- en mesenchymale stamcellen. Een methode om cellen in endosteale en centrale beenmerggebieden te verrijken, is ook inbegrepen.

Flowcytometrie-analyse van hematopoëtische stam- en voorlopercellen van muizenbeenmerg en stromale nichecellen

Dit protocol beschrijft het gebruik van fluorescentie-geactiveerde celsortering van menselijke mesenchymale stamcellen met behulp van de single-cell sorteermethode. In het bijzonder kan het gebruik van eencellige sortering een zuiverheid van 99% van de immunofenogetypeerde cellen uit een heterogene populatie bereiken in combinatie met een op multiparametrische flowcytometrie gebaseerde benadering.

Eencellige sortering van immunofenogetypeerde mesenchymale stamcellen van menselijke geëxfolieerde bladverliezende tanden

Hier wordt een gedetailleerd protocol gepresenteerd om micro-omgevingspopulaties in het beenmerg te isoleren en te karakteriseren op basis van muizenmodellen van myelodysplastische syndromen en acute myeloïde leukemie. Deze techniek identificeert veranderingen in de niet-hematopoëtische beenmergniche, inclusief de endotheliale en mesenchymale stromale cellen, met ziekteprogressie.

Identificatie van micro-omgevingspopulaties in het beenmerg bij myelodysplastisch syndroom en acute myeloïde leukemie

Leer een kosteneffectieve methode voor zuivering en expansie van muizen beenmergmesenchymale stamcellen met flowcytometrie. Dit protocol verbetert de groei en differentiatiecapaciteit voor preklinisch onderzoek.

Zuivering, expansie en op flowcytometrie gebaseerde fenotypering van van muizen afgeleide beenmergmesenchymale stamcellen

Meer video's verkennen