Name: Preparaat van gewassen menselijke bloedplaatjes voor kwantitatieve metabole fluxstudies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T14:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Leer een betrouwbaar protocol voor de isolatie van gewassen menselijke bloedplaatjes en metabole fluxanalyse. Deze methode onderzoekt hoe acute oestrogeenblootstelling het trombotische risico bij orale anticonceptiegebruik beïnvloedt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Isolerende rustplaatjes voor metabool onderzoek

<ol><li>Versteeg, H. H., Heemskerk, J. W., Levi, M., Reitsma, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+fundamentals+in+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">New fundamentals in hemostasis.</a> Physiol Rev. 93 (1), 327-358 (2013).</li>
<li>Webera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+platelet+aggregation+with+trap-6+and+collagen+in+platelet+aggregometry+in+patients+with+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Enhanced platelet aggregation with trap-6 and collagen in platelet aggregometry in patients with venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 107, 325-328 (2002).</li>
<li>Herbert, J. M., Bernat, A., Maffrand, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+platelets+in+experimental+venous+thrombosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Importance of platelets in experimental venous thrombosis in the rat.</a> Blood. 80 (9), 2281-2286 (1992).</li>
<li>Puurunen, M. K., Hwang, S. J., O'donnell, C. J., Tofler, G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+function+as+a+risk+factor+for+venous+thromboembolism+in+the+framingham+heart+study%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Platelet function as a risk factor for venous thromboembolism in the framingham heart study.</a> Thromb Res. 151, 57-62 (2017).</li>
<li>Montoro-Garcia, S., Schindewolf, M., Stanford, S., Larsen, O. H., Thiele, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelets+in+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Thromb+Hemost%22%5BJournal%5D)">The role of platelets in venous thromboembolism.</a> Semin Thromb Hemost. 42 (3), 242-251 (2016).</li>
<li>Koupenova, M., Kehrel, B. E., Corkrey, H. A., Freedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombosis+and+platelets%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Thrombosis and platelets: An update.</a> Eur Heart J. 38 (11), 785-791 (2017).</li>
<li>Yeung, J., Li, W., Holinstat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+signaling+and+disease%3A+Targeted+therapy+for+thrombosis+and+other+related+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Platelet signaling and disease: Targeted therapy for thrombosis and other related diseases.</a> Pharmacol Rev. 70 (3), 526-548 (2018).</li>
<li>Ferreiro, J. L., Gomez-Hospital, J. A., Angiolillo, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+abnormalities+in+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Diab+Vasc+Dis+Res%22%5BJournal%5D)">Platelet abnormalities in diabetes mellitus.</a> Diab Vasc Dis Res. 7 (4), 251-259 (2010).</li>
<li>Buergy, D., Wenz, F., Groden, C., Brockmann, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-platelet+interaction+in+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumor-platelet interaction in solid tumors.</a> Int J Cancer. 130 (12), 2747-2760 (2012).</li>
<li>Gkaliagkousi, E., Passacquale, G., Douma, S., Zamboulis, C., Ferro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+activation+in+essential+hypertension%3A+Implications+for+antiplatelet+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Platelet activation in essential hypertension: Implications for antiplatelet treatment.</a> Am J Hypertens. 23 (3), 229-236 (2010).</li>
<li>Fidler, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+GLUT1+and+GLUT3+reveals+multiple+roles+for+glucose+metabolism+in+platelet+and+megakaryocyte+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Deletion of GLUT1 and GLUT3 reveals multiple roles for glucose metabolism in platelet and megakaryocyte function.</a> Cell Rep. 20 (4), 881-894 (2017).</li>
<li>Fidler, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+metabolism+is+required+for+platelet+hyperactivation+in+a+murine+model+of+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Glucose metabolism is required for platelet hyperactivation in a murine model of type 1 diabetes.</a> Diabetes. 68 (5), 932-938 (2019).</li>
<li>Kulkarni, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aerobic+glycolysis+fuels+platelet+activation%3A+Small-molecule+modulators+of+platelet+metabolism+as+anti-thrombotic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Aerobic glycolysis fuels platelet activation: Small-molecule modulators of platelet metabolism as anti-thrombotic agents.</a> Haematologica. 104 (4), 806-818 (2019).</li>
<li>Ghatge, M., Flora, G. D., Nayak, M. K., Chauhan, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+metabolic+profiling+reveals+glycolytic+and+1-carbon+metabolites+are+essential+for+gp+vi-stimulated+human+platelets-brief+report%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Platelet metabolic profiling reveals glycolytic and 1-carbon metabolites are essential for gp vi-stimulated human platelets-brief report.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 44 (2), 409-416 (2024).</li>
<li>Ravera, S., Signorello, M. G., Panfoli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+metabolic+flexibility%3A+A+matter+of+substrate+and+location%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Platelet metabolic flexibility: A matter of substrate and location.</a> Cells. 12 (13), (2023).</li>
<li>Hechler, B., Dupuis, A., Mangin, P. H., Gachet, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+preparation+for+function+testing+in+the+laboratory+and+clinic%3A+Historical+and+practical+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Pract+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Platelet preparation for function testing in the laboratory and clinic: Historical and practical aspects.</a> Res Pract Thromb Haemost. 3 (4), 615-625 (2019).</li>
<li>Mustard, J. F., Perry, D. W., Ardille, N. G., Packham, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+suspensions+of+washed+platelets+from+humans%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Preparation of suspensions of washed platelets from humans.</a> British Journal of Haematology. 22, 193-204 (1972).</li>
<li>Cazenave, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+washed+platelet+suspensions+from+human+and+rodent+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Preparation of washed platelet suspensions from human and rodent blood.</a> Methods Mol Biol. 272, 13-28 (2004).</li>
<li>Fine, K., Ashbrook, P., Brigden, L., Maldonado, J., Didishelm, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gel-filtered+human+platelets.+Ultrastructure%2C+function%2C+and+role+of+proteins+in+inhibition+of+aggregation+by+aspirin%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Gel-filtered human platelets. Ultrastructure, function, and role of proteins in inhibition of aggregation by aspirin.</a> Am J Pathol. 84 (1), (1976).</li>
<li>Weiss, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+protocol+to+isolate+quiescent+washed+platelets+from+human+whole+blood+and+generate+platelet+releasate+under+clinical+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">An optimized protocol to isolate quiescent washed platelets from human whole blood and generate platelet releasate under clinical conditions.</a> STAR Protoc. 4 (2), 102150(2023).</li>
<li>Burzynski, L. C., Pugh, N., Clarke, M. C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+isolation+and+activation+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Platelet isolation and activation assays.</a> Bio Protoc. 9 (20), e3405(2019).</li>
<li>Aurbach, K., Spindler, M., Haining, E. J., Bender, M., Pleines, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+collection%2C+platelet+isolation+and+measurement+of+platelet+count+and+size+in+mice-a+practical+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Blood collection, platelet isolation and measurement of platelet count and size in mice-a practical guide.</a> Platelets. 30 (6), 698-707 (2018).</li>
<li>Narciso, M. G., Nasimuzzaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+platelets+from+mouse+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Purification of platelets from mouse blood.</a> J Vis Exp. (147), (2019).</li>
<li>Aibibula, M., Naseem, K. M., Sturmey, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+metabolism+and+metabolic+flexibility+in+blood+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Glucose metabolism and metabolic flexibility in blood platelets.</a> J Thromb Haemost. 16 (11), 2300-2314 (2018).</li>
<li>Ravi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+plasticity+in+resting+and+thrombin-activated+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Metabolic plasticity in resting and thrombin-activated platelets.</a> PLoS One. 10 (4), e0123597(2015).</li>
<li>Nayak, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((an+inhibitor+of+pyruvate+dehydrogenase+kinases%2C+inhibits+platelet+aggregation+and+arterial+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">an inhibitor of pyruvate dehydrogenase kinases, inhibits platelet aggregation and arterial thrombosis.</a> Blood Advances. 2, (2018).</li>
<li>Hadley, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormones%2C+age%2C+and+sex+affect+platelet+responsiveness+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Hormones, age, and sex affect platelet responsiveness in vitro.</a> Transfusion. 62 (9), 1882-1893 (2022).</li>
<li>Paglia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+metabolomic+study+of+platelets+reveals+the+expression+of+discrete+metabolic+phenotypes+during+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Comprehensive metabolomic study of platelets reveals the expression of discrete metabolic phenotypes during storage.</a> Transfusion. 54 (11), 2911-2923 (2014).</li>
<li>Sake, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopically+nonstationary+%2813%29c+metabolic+flux+analysis+in+resting+and+activated+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Metab+Eng%22%5BJournal%5D)">Isotopically nonstationary (13)c metabolic flux analysis in resting and activated human platelets.</a> Metab Eng. 69, 313-322 (2022).</li>
<li>Antoniewicz, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+metabolic+flux+analysis+in+metabolic+engineering%3A+Methods%2C+tools+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Metab+Eng%22%5BJournal%5D)">A guide to metabolic flux analysis in metabolic engineering: Methods, tools and applications.</a> Metab Eng. 63, 2-12 (2021).</li>
<li>Larsen, M. T., Kuhlmann, M., Hvam, M. L., Howard, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Albumin-based+drug+delivery%3A+Harnessing+nature+to+cure+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Ther%22%5BJournal%5D)">Albumin-based drug delivery: Harnessing nature to cure disease.</a> Mol Cell Ther. 4 (3), (2016).</li>
<li>Balduini, C. L., Noris, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((latelet+count+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">latelet count and aging.</a> Haematologica. 9 (6), 953-955 (2014).</li>
<li>JoVE Science Education Database. Basic methods in cellular and molecular biology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Using+a+hemacytometer+to+count+cells%22">Using a hemacytometer to count cells</a>. , (2023).</li>
<li>Spurgeon, B. E. J., Naseem, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+flow+cytometry%3A+Instrument+setup%2C+controls%2C+and+panel+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Platelet flow cytometry: Instrument setup, controls, and panel performance.</a> Cytometry B Clin Cytom. 98 (1), 19-27 (2020).</li>
<li>Van Velzen, J. F., Laros-Van Gorkom, B. A., Pop, G. A., Van Heerde, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicolor+flow+cytometry+for+evaluation+of+platelet+surface+antigens+and+activation+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Multicolor flow cytometry for evaluation of platelet surface antigens and activation markers.</a> Thromb Res. 130 (1), 92-98 (2012).</li>
<li>Sake, C. L., Newman, D. M., Boyle, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+quenching+methods+for+metabolite+recovery+in+photoautotrophic+synechococcus+sp.+Pcc+7002%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Prog%22%5BJournal%5D)">Evaluation of quenching methods for metabolite recovery in photoautotrophic synechococcus sp. Pcc 7002.</a> Biotechnol Prog. 36 (5), e3015(2020).</li>
<li>Sapcariu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+extraction+of+proteins+and+metabolites+from+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Simultaneous extraction of proteins and metabolites from cells in culture.</a> MethodsX. 1, 74-80 (2014).</li>
<li>Rana, A., Westein, E., Niego, B., Hagemeyer, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shear-dependent+platelet+aggregation%3A+Mechanisms+and+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Shear-dependent platelet aggregation: Mechanisms and therapeutic opportunities.</a> Front Cardiovasc Med. 6, 141(2019).</li>
<li>Ding, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+shear-induced+platelet+activation%3A+High+shear+stresses+for+short+exposure+time%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Quantification of shear-induced platelet activation: High shear stresses for short exposure time.</a> Artif Organs. 39 (7), 576-583 (2015).</li>
<li>Ardlie, N., Perry, D., Packham, M., Mustard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+apyrase+on+stability+of+suspensions+of+washed+rabbit+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Soc+Exp+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Influence of apyrase on stability of suspensions of washed rabbit platelets.</a> Proc Soc Exp Biol Med. 136 (4), (1971).</li>
<li>Rao, G. H. R., Reddy, K. R., Hagert, K., White, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+ph+on+the+prostacyclin+%28pg12%29+mediated+inhibition+of+platelet+function%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Medicine%22%5BJournal%5D)">Influence of ph on the prostacyclin (pg12) mediated inhibition of platelet function.</a> Prostaglandins Medicine. 4, 263-273 (1980).</li>
<li>Navred, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+flow+cytometric+method+for+detection+of+inherited+platelet+disorders-a+comparison+to+the+gold+standard+light+transmission+aggregometry%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A simplified flow cytometric method for detection of inherited platelet disorders-a comparison to the gold standard light transmission aggregometry.</a> PLoS One. 14 (1), e0211130(2019).</li>
<li>Aldrighi, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+activation+status+decreases+after+menopause%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Platelet activation status decreases after menopause.</a> Gynecol Endocrinol. 20 (5), 249-257 (2005).</li>
<li>Bausset, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formulation+and+storage+of+platelet-rich+plasma+homemade+product%5BTitle%5D)+AND+%22Biores+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Formulation and storage of platelet-rich plasma homemade product.</a> Biores Open Access. 1 (3), 115-123 (2012).</li>
<li>Nayak, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+metabolic+enzyme+pyruvate+kinase+m2+regulates+platelet+function+and+arterial+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The metabolic enzyme pyruvate kinase m2 regulates platelet function and arterial thrombosis.</a> Blood. 137 (12), 1658-1668 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro;M filter Spin-X tubes</td><td>Millapore-Sigma</td><td>CLS8160</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>19 G x 3/4" naald</td><td>McKesson Corporation</td><td>448406</td><td>Flebotomie</td></tr><tr><td>21 G 1,5 inch naald met luer-lock</td><td>Amazon</td><td>B0C39PJD23</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>96 well plate, half area</td><td>Greiner Bio-One</td><td>675101</td><td>Flow cytometry</td></tr><tr><td>ACD-A vacutainers&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>364606</td><td>Flebotomie</td></tr><tr><td>Adapter</td><td>McKesson Corporation</td><td>609</td><td>Flebotomie</td></tr><tr><td>Alcoholdoekje</td><td>VWR</td><td>15648-916</td><td>Flebotomie</td></tr><tr><td>Apyrase uit aardappels</td><td>Sigma</td><td>A6410-100UN</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>CD42a monoklonaal antilichaam</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-0428-42</td><td>Flow cytometry</td></tr><tr><td>Gekoelde microcentrifuge&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>75002441</td><td>Blussing</td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma</td><td>G7021</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>FITC Anti-Fibrinogeen antilichaam</td><td>Abcam</td><td>4217</td><td>Flow cytometry</td></tr><tr><td>Flow cytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>82922828</td><td>Flow cytometry</td></tr><tr><td>Gaas</td><td>VWR</td><td>76049-110</td><td>Flebotomie</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G5516</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4034</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>Menselijke alpha-trombine</td><td>Prolytix</td><td>HCT-0020</td><td>Flow cytometry</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9333</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5655</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>Microcentrifugebuizen</td><td>VWR</td><td>87003-292</td><td>Algemeen</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S3264</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5761</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>Nauwe transferpijp</td><td>VWR</td><td>16001-176</td><td>Trombocyetwassing</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde oplossing, 4% in PBS</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-281692</td><td>Flow cytometry</td></tr><tr><td>PECy5 Muis Anti-Mens CD62P</td><td>BD Pharmingen</td><td>551142</td><td>Flow cytometry</td></tr><tr><td>Plate deksel</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AB0626</td><td>Flow cytometry</td></tr><tr><td>Polypropyleen 15 mL kegelbuizen</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>Polypropyleen 50 mL kegelbuizen</td><td>VWR</td><td>352070</td><td>Trombocyetwassing</td></tr><tr><td>Prostaglandine I2 (natriumzout)</td><td>Cayman Chemical</td><td>18220</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>SKC Inc. C-Chip Wegwerp Hemocytometers</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-600-100</td><td>Celtelling</td></tr><tr><td>Spuit</td><td>BD Pharmingen</td><td>14-823-41</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>Tourniquet</td><td>VWR</td><td>76235-371</td><td>Flebotomie</td></tr><tr><td>Vakuumflesnaaldhouder</td><td>BD</td><td>364815</td><td>Flebotomie</td></tr><tr><td>Vortexer</td><td>VWR</td><td>102091-234</td><td>Reagensvoorbereiding</td></tr><tr><td>Waterbad</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>TSGP02</td><td>Trombocyetwassing</td></tr><tr><td>Brede transferpijp</td><td>VWR</td><td>76285-362</td><td>Trombocyetwassing</td></tr></tbody></table>

preparaat van gewassen menselijke bloedplaatjes voor kwantitatieve metabole fluxstudies

Preparation of Washed Human Platelets for Quantitative Metabolic Flux Studies

Preparaat van gewassen menselijke bloedplaatjes voor kwantitatieve metabole fluxstudies

Platelets are blood cells that play an integral role in hemostasis and the innate immune response. Platelet hyper- and hypoactivity have been implicated ...

preparation-washed-human-platelets-for-quantitative-metabolic-flux

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video demonstrates a technique for the differentiation of megakaryocytes and the formation of platelets. Hematopoietic stem progenitor cells — isolated from human umbilical cord blood — differentiate into mature megakaryocytes in the presence of thrombopoietin. The mature megakaryocytes produce cytoplasmic extensions termed proplatelets, which give rise to individual platelets.

An In Vitro Method for the Differentiation of Megakaryocytes and Platelet Formation

This video demonstrates turbidimetric analysis to assess collagen-induced platelet aggregation in pre-treated, washed human platelets. Control wells show collagen-induced aggregation, whereas a high concentration of inhibitors blocks Pannexin-1 channels, thereby inhibiting collagen-induced platelet aggregation,  evident from unchanged turbidity.

A Turbidimetric Analysis to Monitor Collagen-Induced Aggregation of Pretreated Human Platelets

Bloed leukocyten en bloedplaatjes kunnen worden gebruikt als een marker van algemene bio-energetische gezondheid van een individu en dus de potentie om pathologische processen en het effect van behandeling te controleren. Hier beschrijven we een werkwijze voor het isoleren en meten mitochondriale functie en de oxidatieve uitbarsting in deze cellen.

Bio-energetica en de oxidatieve Burst: Protocollen voor de Isolatie en evaluatie van menselijke leukocyten en bloedplaatjes

Hier laten we geïsoleerde humane bloedplaatjes kan worden gebruikt als een toegankelijke ex vivo model metabole aanpassingen studeren in reactie op de remmer complex I rotenon. Deze benadering maakt gebruik van isotopische tracering en relatieve kwantificatie door middel van vloeistofchromatografie-massaspectrometrie en kan worden toegepast op een verscheidenheid van studieopzetten.

LC-MS analyse van menselijke bloedplaatjes als een platform voor het bestuderen van mitochondriaal Metabolisme

We beschrijven een eenvoudige methode voor het isoleren van gewassen bloedplaatjes uit menselijk bloed, gevolgd door agonist-geïnduceerde aggregatie van bloedplaatjes metingen door turbidimetrie. Als voorbeeld passen we deze methode voor het bestuderen van aggregatie van humane bloedplaatjes aan collageen na voorincubatie met Pannexin1 kanaal remmer Brilliant Blue FCF.

Turbidimetrie over menselijke gewassen bloedplaatjes: Het effect van de Pannexin1-remmer Brilliant Blue FCF op collageen geïnduceerde aggregatie

Dit werk beschrijft een fluorescentiemicroscopie-gebaseerde methode voor het bestuderen van bloedplaathechting, verspreiding en afscheiding onder stroming. Dit veelzijdige platform maakt het mogelijk om bloedplaatjesfunctie te onderzoeken voor mechanistisch onderzoek naar trombose en hemostase.

Live-cel beeldvorming van bloedplaatjes Degranulatie en afscheiding onder stroming

In deze paper beschrijven we een methode om te beoordelen endothelial von Willebrand factor release en de daaropvolgende bloedplaatjes vangen onder vloeistof shear stress in reactie op inflammatoire stimuli met behulp van een in vitro kamer-stroomsysteem.

Onderzoeken van von Willebrand Factor pathofysiologie met behulp van een Flow kamer Model van von Willebrand Factor-bloedplaatjes String vorming

Leukocyten interactie gretig met vasculaire cellen en trombocyten na vaartuig muur letsel of tijdens ontsteking. Hier beschrijven we een eenvoudig laminaire flow gebaseerde assay karakteriseren de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de interacties tussen leukocyten en hun cellulaire partners.

Laminaire stroming gebaseerde testen te onderzoeken Leukocyte aanwerving op gekweekte vasculaire cellen en aanhangend bloedplaatjes

Hier, muis bloed werd verzameld in de aanwezigheid van een anti-coagulant. De bloedplaatjes werden gezuiverd door iohexol gradiënt medium met behulp van lage snelheid centrifugeren. De bloedplaatjes werden geactiveerd met trombine om te onderzoeken of ze levensvatbaar waren. De kwaliteit van de gezuiverde bloedplaatjes werd geanalyseerd door stromings Cytometry en microscopie.

Zuivering van bloedplaatjes van muis Blood

De vorming van procoagulerende bloedplaatjes is gecorreleerd met een verhoogd risico op trombose. Hier wordt een nauwkeurig protocol gepresenteerd voor het isoleren van gewassen bloedplaatjes uit menselijk bloed, bedoeld om de blootstelling aan fosfatidylserine en de afgifte van microvesikels te kwantificeren, die onderscheidende kenmerken zijn van procoagulerende bloedplaatjes.

Karakterisering van procoagulerende bloedplaatjes door meting van de blootstelling aan fosfatidylserine en de afgifte van microblaasjes uit menselijke gezuiverde bloedplaatjes

Hier beschrijven we in detail methoden voor het extraheren van macrofagen uit het beenmerg, de milt en het hartinfarct, en vervolgens het beoordelen van de metabole flux in levende cellen.

Analyse van ex vivo metabole flux in milt- en cardiale macrofagen en beenmergmonocyten

Leer een betrouwbaar protocol voor de isolatie van gewassen menselijke bloedplaatjes en metabole fluxanalyse. Deze methode onderzoekt hoe acute oestrogeenblootstelling het trombotische risico bij orale anticonceptiegebruik beïnvloedt.

Preparaat van gewassen menselijke bloedplaatjes voor kwantitatieve metabole fluxstudies

Meer video's verkennen