Name: Scheiding en fractionering van celwand- en celmembraaneiwitten van Mycobacterium tuberculosis voor stroomafwaartse eiwitanalyse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Leer een gestroomlijnde methode voor het scheiden van onoplosbare celwand- en celmembraaneiwitten van Mycobacterium tuberculosis in eenvoudige fracties voor directe proteomische en immunologische analyses.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Seshadri, C., Turner, M. T., Lewinsohn, D. M., Moody, D. B., Van Rhijn, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoproteins+are+major+targets+of+the+polyclonal+human+T+cell+response+to+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lipoproteins are major targets of the polyclonal human T cell response to Mycobacterium tuberculosis.</a> J Immunol. 190 (1), 278-284 (2013).</li>
<li>Kunnath-Velayudhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+antibody+responses+to+the+Mycobacterium+tuberculosis+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Dynamic antibody responses to the Mycobacterium tuberculosis proteome.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14703-14708 (2010).</li>
<li>Drage, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR2+and+its+co-receptors+determine+responses+of+macrophages+and+dendritic+cells+to+lipoproteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR2 and its co-receptors determine responses of macrophages and dendritic cells to lipoproteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Cell Immunol. 258 (1), 29-37 (2009).</li>
<li>Wallin, E., von Heijne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+analysis+of+integral+membrane+proteins+from+eubacterial%2C+archaean%2C+and+eukaryotic+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Genome-wide analysis of integral membrane proteins from eubacterial, archaean, and eukaryotic organisms.</a> Protein Sci. 7, 1029-1038 (1998).</li>
<li>Almeida, J. G., Preto, A. J., Koukos, P. I., Bonvin, A. M. J. J., Moreira, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+proteins+structures%3A+A+review+on+computational+modeling+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Membrane proteins structures: A review on computational modeling tools.</a> Biochim Biophys Acta Biomembr. 1859 (10), 2021-2039 (2017).</li>
<li>Finkelstein, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structures+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structures of membrane proteins.</a> Nature. 511 ((Suppl 7509)), 21(2014).</li>
<li>Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+the+purification+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Strategies for the purification of membrane proteins.</a> Methods Mol Biol. 1485, 389-400 (2017).</li>
<li>Von Jagow, G., Link, T., Schager, H. Purification Strategies for Membrane Proteins. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVon+Jagow%2C+G+%22A+Practical+Guide+to+Membrane+Protein+Purification%22">A Practical Guide to Membrane Protein Purification</a>. , Academic Press. San Diego, CA. (1994).</li>
<li>Raja, A., Uma Devi, K. R., Ramalingam, B., Brennan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoglobulin+G%2C+A%2C+and+M+responses+in+serum+and+circulating+immune+complexes+elicited+by+the+16-kilodalton+antigen+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunoglobulin G, A, and M responses in serum and circulating immune complexes elicited by the 16-kilodalton antigen of Mycobacterium tuberculosis.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 9 (2), 308-312 (2002).</li>
<li>Covert, B. A., Spencer, J. S., Orme, I. M., Belisle, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+proteomics+in+defining+the+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">The application of proteomics in defining the T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Proteomics. 1 (4), 574-586 (2001).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoproteomic+identification+of+human+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis+that+differentiate+healthy+contacts+from+tuberculosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Immunoproteomic identification of human T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis that differentiate healthy contacts from tuberculosis patients.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (3), 538-549 (2010).</li>
<li>Sinha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenic+membrane-associated+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis+revealed+by+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Immunogenic membrane-associated proteins of Mycobacterium tuberculosis revealed by proteomics.</a> Microbiology. 151 (7), 2411-2419 (2005).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Integrated+approach+for+proteomic+and+immunological+analysis+of+cell+wall+and+cell+membrane+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Arch%22%5BJournal%5D)">An Integrated approach for proteomic and immunological analysis of cell wall and cell membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Med Res Arch. 11 (11), (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7H9 broth&nbsp;</td><td>Himedia&nbsp;</td><td>M198</td><td></td></tr><tr><td>40% Bio-Lyte 3/10 Ampholyte&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1631113</td><td></td></tr><tr><td>BCA protein assay&nbsp;</td><td>MERCK</td><td>BCA1</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 5/7 Ampholyte&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1631152</td><td></td></tr><tr><td>centrifugal concentrators 3 kDa</td><td>MERCK</td><td>Z629456</td><td></td></tr><tr><td>Digitonin.</td><td>MERCK</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Dnase</td><td>MERCK</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>MERCK</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>MERCK</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>MERCK</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>MERCK</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>MERCK</td><td>E18</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatin A</td><td>MERCK</td><td>P5318</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>MERCK</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>Rnase</td><td>MERCK</td><td>10109134001</td><td></td></tr><tr><td>Rotofor&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>170-2986</td><td>&nbsp;iso-elektrisch focusapparatuur (IEF)</td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Vibra-Cell, Sonics</td><td>VC 750</td><td></td></tr><tr><td>TLCK</td><td>MERCK</td><td>T7254</td><td></td></tr><tr><td>TPCK</td><td>MERCK</td><td>4376</td><td></td></tr><tr><td>ureum</td><td>MERCK</td><td>U5378</td><td></td></tr><tr><td>Whole Gel Eluter apparaat&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

scheiding en fractionering van celwand- en celmembraaneiwitten van mycobacterium tuberculosis voor stroomafwaartse eiwitanalyse

Separation and Fractionation of Cell Wall and Cell Membrane Proteins from Mycobacterium tuberculosis for Downstream Protein Analysis

Scheiding en fractionering van celwand- en celmembraaneiwitten van Mycobacterium tuberculosis voor stroomafwaartse eiwitanalyse

Mycobacterium cell wall and membrane proteins, which play a central role in tuberculosis pathogenesis, were successfully separated using preparative ...

separation-fractionation-cell-wall-cell-membrane-proteins-from

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Source: Gupta, S., Marcela Rodriguez, G. Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles Produced by Iron-limited Mycobacteria. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the stepwise isolation of extracellular vesicles (EVs) from Mycobacterium tuberculosis cultured under iron-limiting conditions that mimic the host environment. It outlines the use of ultrafiltration, differential centrifugation, and density gradient separation to enrich and identify EV-containing fractions.

Isolation of Siderophore-Containing Extracellular Vesicles from Mycobacterium tuberculosis

This video demonstrates the thin-layer chromatography-based separation of mycolic acids. This technique separates the different mycolic acids—long-chain lipids present in the cell wall of mycobacteria—based on their polarity.

Thin Layer Chromatography-Based Separation of Mycolic Acid Variants: A Method to Separate Mycobacterial Cell Wall Lipids Based on Polarity

This video demonstrates the size exclusion chromatography (SEC) technique for purifying bacterial extracellular vesicles (EVs) from the culture filtrate of Mycobacterium tuberculosis (Mtb). The technique utilizes a porous resin-packed column to obtain purified fractions of EVs. The porous particles selectively allow smaller proteins to enter the pores, resulting in slower elution. At the same time, EVs are excluded from entering the pores due to their larger size and are eluted first.

A Size Exclusion Chromatography Technique to Purify Mycobacterial Extracellular Vesicles

De bacteriële celwand bestaat uit peptidoglycan, een macromoleculair netwerk van suikerstrengen gekruist door peptiden. Ultra Performance Liquid Chromatography biedt een hoge resolutie en doorvoer voor nieuwe ontdekkingen van peptidoglycan samenstelling. We presenteren een procedure voor de isolatie van celwanden (sacculi) en hun daaropvolgende voorbereiding voor analyse via UPLC.

Isolatie en bereiding van bacteriële celwanden voor compositorische analyse door Ultra Performance Liquid Chromatography

Gram-negatieve bacteriën produceren twee ruimtelijk gescheiden membranen. Het buitenste membraan wordt van het binnenste membraan verdeeld door een periplasma en een peptidoglycanlaag. Het vermogen om de dubbele tweelagen van deze microben te isoleren is van cruciaal belang geweest voor het begrijpen van hun fysiologie en pathogenese.

Scheiding van de celenvelop voor gramnegatieve bacteriën in binnen- en buitenste membraanfracties met technische aanpassingen voor Acinetobacter baumannii

Er wordt een protocol gepresenteerd om het totale lipidegehalte van de celwand van een breed scala aan mycobacteriën te extraheren. Bovendien worden extractie- en analyseprotocollen van de verschillende soorten mycolzuren getoond. Een dunne-laag chromatografisch protocol om deze mycobacteriële verbindingen te controleren is ook aanwezig.

Analyse van de lipidesamenstelling van mycobacteriën door dunnelaagchromatografie

Bacteriële blaasjes spelen een belangrijke rol bij pathogenese en hebben veelbelovende biotechnologische toepassingen. De heterogeniteit van blaasjes bemoeilijkt analyse en gebruik; daarom is een eenvoudige, reproduceerbare methode nodig om verschillende groottes van blaasjes te scheiden. Hier demonstreren we het gebruik van grootte-uitsluitingschromatografie om heterogene blaasjes geproduceerd door Aggregatibacter actinomycetemcomitanste scheiden .

Grootte uitsluiting chromatografie om bacteriële buitenste membraanblaasje heterogeniteit te analyseren

Dit protocol beschrijft grootte-uitsluitingschromatografie, een gemakkelijke en reproduceerbare techniek voor het verrijken van Mycobacterium tuberculosis extracellulaire blaasjes uit kweeksupernatanten.

Mycobacterium tuberculose Extracellulaire vesikelverrijking door grootte-uitsluitingschromatografie

Dit protocol beschrijft de verrijking van inheemse mycobacteriële extracellulaire vesikels (mEV's) uit axenische culturen van Mycobacterium smegmatis (Msm) en hoe mCherry (een rode fluorescerende reporter)-bevattende recombinante MsmEV's kunnen worden ontworpen en verrijkt. Ten slotte verifieert het de nieuwe aanpak met de verrijking van MsmEV's die het EsxA-eiwit van Mycobacterium tuberculosis bevatten.

Verrijking van inheemse en recombinante extracellulaire blaasjes van mycobacteriën

Hoewel prokaryoten geen organellair systeem hebben, zijn er subcellulaire regio's met gelokaliseerde eiwitten. Kwantitatieve en kwalitatieve analyse van de enzymen en eiwitten in de subcellulaire regio's is belangrijk voor het ontwikkelen van medicijn- en vaccindoelen. Hier illustreren we de subcellulaire fractionering van leptospiraaleiwitten met behulp van Triton X-114 en de analyse ervan.

Verrijken van subcellulaire eiwitten in leptospira met behulp van een op Triton X-114 gebaseerde fractioneringsbenadering

Dit protocol beschrijft het kweken, oogsten en concentreren van uitgescheiden eiwitten van Mycobacterium tuberculosis. Cultuurfiltraateiwitten (CFP's) worden gekwantificeerd, gescheiden in 20 fracties door iso-elektrische focussering en verder opgelost in 30 fracties met behulp van een preparatief SDS-PAGE en een elektroelutiesysteem.

Scheiding en fractionering van kweekfiltraateiwitten (CFP's) van Mycobacterium tuberculosis

Leer een gestroomlijnde methode voor het scheiden van onoplosbare celwand- en celmembraaneiwitten van Mycobacterium tuberculosis in eenvoudige fracties voor directe proteomische en immunologische analyses.

Scheiding en fractionering van celwand- en celmembraaneiwitten van Mycobacterium tuberculosis voor stroomafwaartse eiwitanalyse

Meer video's verkennen