Name: Innervatie van menselijke darmorganoïden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Ontdek hoe je het enterische zenuwstelsel integreert in menselijke darmorganoïden voor weefselengineering. Deze methode verbetert de ruimtelijke organisatie en cellulaire diversiteit voor toekomstige therapieën bij darmfalen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+bowel+syndrome%3A+epidemiology+and+etiology%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Short bowel syndrome: epidemiology and etiology.</a> Semin Pediatr Surg. 19 (1), 3-9 (2010).</li>
<li>Spencer, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+short+bowel+syndrome%3A+redefining+predictors+of+success%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Pediatric short bowel syndrome: redefining predictors of success.</a> Ann Surg. 242 (3), discussion 409-412 403-409 (2005).</li>
<li>Goulet, O., Pigneur, B., Charbit-Henrion, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+enteropathies+involving+defects+in+enterocyte+structure+or+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract+Res+Clin+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Congenital enteropathies involving defects in enterocyte structure or differentiation.</a> Best Pract Res Clin Gastroenterol. 56-57, 101784(2022).</li>
<li>Koglmeier, J., Lindley, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+diarrhoeas+and+enteropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Congenital diarrhoeas and enteropathies.</a> Nutrients. 16 (17), 2971(2024).</li>
<li>Duggan, C. P., Jaksic, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+intestinal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pediatric intestinal failure.</a> N Engl J Med. 377 (7), 666-675 (2017).</li>
<li>Spence, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+intestinal+tissue+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells into intestinal tissue in vitro.</a> Nature. 470 (7332), 105-109 (2011).</li>
<li>McCracken, K. W., Howell, J. C., Wells, J. M., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+human+intestinal+tissue+from+pluripotent+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating human intestinal tissue from pluripotent stem cells in vitro.</a> Nat Protoc. 6 (12), 1920-1928 (2011).</li>
<li>Bajpai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHD7+cooperates+with+PBAF+to+control+multipotent+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">CHD7 cooperates with PBAF to control multipotent neural crest formation.</a> Nature. 463 (7283), 958-962 (2010).</li>
<li>Workman, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+human+pluripotent-stem-cell-derived+intestinal+tissues+with+a+functional+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Engineered human pluripotent-stem-cell-derived intestinal tissues with a functional enteric nervous system.</a> Nat Med. 23 (1), 49-59 (2017).</li>
<li>Schlieve, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cell+implantation+restores+enteric+nervous+system+function+and+alters+the+gastrointestinal+transcriptome+in+human+tissue-engineered+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Neural crest cell implantation restores enteric nervous system function and alters the gastrointestinal transcriptome in human tissue-engineered small intestine.</a> Stem Cell Rep. 9 (3), 883-896 (2017).</li>
<li>Fattahi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deriving+human+ENS+lineages+for+cell+therapy+and+drug+discovery+in+Hirschsprung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Deriving human ENS lineages for cell therapy and drug discovery in Hirschsprung disease.</a> Nature. 531 (7592), 105-109 (2016).</li>
<li>Barber, K., Studer, L., Fattahi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+enteric+neuron+lineages+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Derivation of enteric neuron lineages from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 14 (4), 1261-1279 (2019).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome-wide+analysis+reveals+hallmarks+of+human+intestine+development+and+maturation+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Transcriptome-wide analysis reveals hallmarks of human intestine development and maturation in vitro and in vivo.</a> Stem Cell Rep. 4 (6), 1140-1155 (2015).</li>
<li>Boyle, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+transplantation+of+human+intestinal+organoids+enhances+select+tight+junction+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo transplantation of human intestinal organoids enhances select tight junction gene expression.</a> J Surg Res. 259, 500-508 (2021).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tissue-engineered+small+intestine+using+embryonic+stem+cell-derived+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Generation of tissue-engineered small intestine using embryonic stem cell-derived human intestinal organoids.</a> Biol Open. 4 (11), 1462-1472 (2015).</li>
<li>Mahe, M. M., Brown, N. E., Poling, H. M., Helmrath, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+model+of+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo model of small intestine.</a> Methods Mol Biol. 1597, 229-245 (2017).</li>
<li>McNeill, E. P., Gupta, V. S., Sequeira, D. J., Shroyer, N. F., Speer, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+murine+host+sex+as+a+biological+variable+in+transplanted+human+intestinal+organoid+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of murine host sex as a biological variable in transplanted human intestinal organoid development.</a> Dig Dis Sci. 67 (12), 5511-5521 (2022).</li>
<li>Singh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+transplantation+sites+for+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of transplantation sites for human intestinal organoids.</a> PLoS One. 15 (8), e0237885(2020).</li>
<li>Watson, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+human+small+intestine+using+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of human small intestine using pluripotent stem cells.</a> Nat Med. 20 (11), 1310-1314 (2014).</li>
<li>Cortez, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+human+intestinal+organoids+into+the+mouse+mesentery%3A+A+more+physiologic+and+anatomic+engraftment+site%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of human intestinal organoids into the mouse mesentery: A more physiologic and anatomic engraftment site.</a> Surgery. 164 (4), 643-650 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100x Non-Essential Amino Acids Solution (NEAA)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>15 mL conical tubes</td><td>Thermo Scientific</td><td>12565269</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>07920</td><td>"enzymatic cell detachment reagent"</td></tr><tr><td>B-27 Supplement (50x), minus vitamin A</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>12587010</td><td>Voor ENCC</td></tr><tr><td>B-27 Supplement (50x), serum free</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>Voor HIO</td></tr><tr><td>Bright-Line Hemacytometer</td><td>Hausser Scientific</td><td>3120</td><td></td></tr><tr><td>Corning Costar Ultra-Low Attachment Microplates</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-601</td><td></td></tr><tr><td>Corning Flat-Bottom Plate 24-well, TC treated</td><td>VWR</td><td>29442-044</td><td></td></tr><tr><td>Corning Flat-Bottom Plate 3516 6 well</td><td>VWR</td><td>29442-042</td><td></td></tr><tr><td>Essential 6 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A1516401</td><td></td></tr><tr><td>Essential 8 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A2858501</td><td>Alternatief stamcelmedium, gebruikt voor ENCC platen.&nbsp;</td></tr><tr><td>Fine-tip forceps</td><td>Dumont</td><td>11223-20</td><td></td></tr><tr><td>Forma Steri-Cycle i160</td><td>Thermo Scientific</td><td>50145522</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Advanced DMEM/F12</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>Gibco HEPES 1 M</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Neurobasal Medium</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>Glutagro, 200 mM, 100x</td><td>Corning</td><td>25-015-CI</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>H9 human ESC</td><td>Wicell International Stem Cell Bank</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>HyCloneTM FBS Defined</td><td>VWR</td><td>16777-002</td><td></td></tr><tr><td>LabGard Biological Safety Cabinet</td><td>Nuaire</td><td>Nu-430-400</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel GFR Basement Membrane Matrix, Phenol Red-Free, LDEV-Free</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>"Clear 3D basement membrane matrix"</td></tr><tr><td>Matrigel hESC-Qualified Matrix, LDEV-Free</td><td>Corning</td><td>354277</td><td>"3D basement membrane matrix"</td></tr><tr><td>Micropipettes</td><td>Eppendorf (100-1000, 20-200, 10-100, 2-20, 0.5-10, 0.1-2.5 uL)</td><td>2231300008</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR 1</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>85850</td><td>"stamcelmedium" Catalognummer omvat het 5x supplement, dat vooraf in bulk moet worden toegevoegd.&nbsp;</td></tr><tr><td>N-2 Supplement (100x)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>Voor HIO</td></tr><tr><td>N-2 Supplement, CTS (Cell Therapy Systems)</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1370701</td><td>Voor ENCC. Iets andere formulering.</td></tr><tr><td>Nikon DS-Fi2 TS-100 microscope</td><td>Nikon</td><td>TS100</td><td></td></tr><tr><td>Noggin-conditioned media</td><td>Texas Medical Center Digestive Disease Center GEMS Core, Enteroid/Organoid Sub-core</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human Activin A</td><td>Cell Guidance Systems</td><td>GFH6-100</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human BMP-4</td><td>Fisher Scientific</td><td>314BP010</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human EGF Protein, CF</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>236-EG-200</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human FGF basic/FGF2 (146 aa) Protein</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>233-FB-010</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human FGF-4</td><td>Peprotech</td><td>100-31</td><td></td></tr><tr><td>ReLeSR</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>5872</td><td>"Stamceldissociatiereagens"</td></tr><tr><td>Retinoic acid</td><td>SIGMA</td><td>R2625-50MG</td><td></td></tr><tr><td>Rnase-free Microfuge tubes, 2 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM12425</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin conditioned media</td><td>Texas Medical Center Digestive Disease Center GEMS Core, Enteroid/Organoid Sub-core</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>SB 431542, Tocris Bioscience</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-141-0</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall ST 16R Centrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standard Wide Orifice Pipettor Tips</td><td>VWR</td><td>89049-166</td><td></td></tr><tr><td>Stemolecule Chir99021 in Solution</td><td>Stemgent</td><td>04-0004-02</td><td></td></tr><tr><td>Sterile filter pipette tips</td><td>VWR (1000uL, 200uL, 10uL)</td><td>76322-154, 76322-150, 89174-520</td><td></td></tr><tr><td>Vitronectin XF</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>7180</td><td>Alternatieve 3D basement membrane matrix, gebruikt voor ENCC platen.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

innervatie van menselijke darmorganoïden

Innervation of Human Intestinal Organoids

Innervatie van menselijke darmorganoïden

The complexity of intestinal cytoarchitecture and function poses significant challenges for the creation of the bioengineered small intestine. Techniques ...

Ons onderzoek richt zich op de generatie van weefselgeengineerde darmen als oplossing voor het syndroom van korte darm. Ons lab is gericht op het optimaliseren van de integratie van een enterisch zenuwstelsel en het optimaliseren van ruimtelijke organisatie, cellulaire diversiteit en functie. We hopen dat we op een dag een levensveranderende oplossing kunnen creëren voor kinderen die lijden aan darmfalen door het creëren van een bio-geengineerde darm.Het innerveren van humane intestinale organoïden vereist het nabootsen van de menselijke darmontwikkeling, en dit kan een uitdaging zijn. De ontwikkeling van het enterische zenuwstelsel vereist zowel biochemische signalering als biomechanische krachten. De toekomstige studies van ons lab zijn gericht op het optimaliseren van de ontwikkeling van het enterische zenuwstelsel binnen humane intestinale organoïden.We bestuderen zowel ruimtelijke organisatie als cellulaire diversiteit, en we hebben recentelijk een nieuwe 3D-beeldvormingstechniek gebruikt die is ontwikkeld door Dr. Herath, die het ENS binnen onze intestinale organoïden robuust kan karakteriseren en kwantificeren. Dit zal ons helpen ons model te verfijnen en de menselijke darmontwikkeling en functie na te bootsen. Neem eerst de plaat van dag 15 tot 21 gekweekte enterische neurale crestcellen of ENCC-sferoïden en verwijder voorzichtig het medium uit de put.Voeg een milliliter van een warm enzymatisch celdetacheringsreagens toe aan de put en incubeer gedurende 30 minuten bij 37 graden Celsius. Tik vervolgens op de zijkant van de plaat om de sferoïddissociatie te vergemakkelijken. Gebruik een P1000 micropipet met een breedmondige tip om het mengsel te titraten door voorzichtig op en neer te pipetten totdat de cellen homogeen zijn.Breng de ENCC-suspensie over naar een 15-milliliter conische buis. Was de put met een milliliter warm medium voor neurale crestcellen om eventuele resterende cellen te verzamelen, voeg dit vervolgens toe aan de conische buis. Centrifugeer nu de celsuspensie gedurende één minuut bij 300 G.Zuig vervolgens het supernatant op met een steriele pipettetip. Gebruik vervolgens een breedmondige pipettetip om het celpelletje te resuspenderen in een milliliter warm medium voor neurale crestcellen. Verzamel de gekweekte mid-hindgut-sferoïden uit alle putten van een humane intestinale organoïdplaat met behulp van een breedmondige pipettetip en breng ze over naar een 15-milliliter conische buis.Voeg het berekende volume ENCC-suspensie toe aan de conische buis die de mid-hindgut-sferoïden bevat. Gebruik een breedmondige pipettetip om het mengsel voorzichtig te triteren om de sferoïdjes en ENCC's uniform te mengen. Centrifugeer de gecombineerde celsuspensie gedurende één minuut bij 300 G.Zuig voorzichtig het supernatant op met een steriele pipettetip. Resuspendeer vervolgens het resulterende celpelletje in een koude fenol-vrije groeifactor gereduceerde basement membraan matrix. Pipet vervolgens de 30 microliter druppel van de gesuspendeerde mid-hindgut-sferoïden en ENCC's in de heldere basement membraan matrix naar het centrum van elke droge put.Zodra alle druppels zijn geplaatst, dek de plaat af, draai deze om en plaats deze in een incubator bij 37 graden Celsius met 5% koolstofdioxide gedurende 30 minuten. Op dag nul, zodra het heldere basement membraan matrix is gepolymeriseerd, bedek elke druppel met 500 microliter warm dag nul tot drie HIO-medium. Op dag drie, zuig voorzichtig het dag nul tot drie HIO-medium van de zijkant van elke put zonder de druppel van het heldere basement membraan matrix te verstoren.Vervang het door 500 microliter warm dag drie tot 14 HIO-medium en plaats de plaat terug in de incubator. Op dag 14, bekijk elke put onder een microscoop om het aantal zich ontwikkelende HIO+ENS-structuren in elke druppel van heldere 3D-basement membraan matrix te beoordelen. Voeg 30 microliter heldere basement membraan matrix toe aan twee milliliter microcentrifugebuisjes en bewaar ze op ijs.Gebruik onder een laminaire stroomkap fijne pincetten om voorzichtig de heldere 3D-basement membraan matrix druppel te verwijderen die de gesuspendeerde HIO+ENS bevat. Gebruik de pincetten om de individuele HIO+ENS-structuren voorzichtig uit elkaar te halen. Gebruik of fijne pincetten of een breedmondige pipettetip om elke geïsoleerde HIO+ENS-structuur in de microcentrifugebuisjes te plaatsen die 30 microliter heldere basement membraan matrix bevatten.Pipet vervolgens een 30 microliter druppel van de gesuspendeerde HIO+ENS in een heldere basement membraan matrix naar het centrum van elke droge put. Zodra de druppels zijn gepolymeriseerd, voeg 500 microliter warm vers dag drie tot 14 HIO+ENS-medium toe aan elke put en incubeer de plaat een nacht lang. Op dag 15, zuig voorzichtig het dag drie tot 14 medium van de zijkant van elke put zonder de gepolymeriseerde druppel te verstoren.Vervang het medium door 500 microliter warm dag 15 tot 28 HIO+ENS-medium. De HIO-ENS-cocultuur vertoonde significante groei met de ontwikkeling van mesenchymale structuren, waardoor dunne, wazige projecties ontstonden, waardoor een halo-achtige rand ontstond rond epitheliale involuties tegen dag 30. ENCC's migreerden naar de HIO's, integreerden in het mesenchym en overleefden in vitro, zoals aangetoond door GFP-fluorescentie binnen HIO's, wat adequate overleving en differentiatiesignalen van het mesenchym bevestigde.Getransplanteerde HIO+ENS-coculturen drukten neuronale markers uit, waaronder HuCD, en gliale markers zoals S100 beta na in vivo-groei, wat de differentiatie in zowel neuronen als gliacellen bevestigde.

innervation-of-human-intestinal-organoids

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

This video demonstrates the method of creating motor nerve organoids by first culturing human induced pluripotent stem cells in a special medium to form spheroids, then differentiating them into motor neurons using specific inhibitors, and finally cultivating them in a microfluidic chip to extend axons and form motor nerve organoids.

Developing Human iPSC-Derived Motor Nerve Organoids Using a Microfluidic Chip

Dit protocol maakt het mogelijk om menselijke pluripotente cellen te differentiëren tot darmorganoïden. Het protocol bootst de normale menselijke ontwikkeling na door cellen te differentiëren in een populatie van definitief endoderm, endoderm van de dikke darm en vervolgens darmepitheel. Dit maakt het protocol geschikt voor het bestuderen van zowel darmontwikkeling als toepassingen voor ziektemodellering.

Generatie van hiPSC-afgeleide darmorganoïden voor ontwikkelings- en ziektemodelleringstoepassingen

Hier presenteren we twee protocollen die het modelleren van intestinale apicale-specifieke interacties mogelijk maken. Organoïde-afgeleide intestinale monolagen en Air-Liquid Interface (ALI) culturen vergemakkelijken de generatie van goed gedifferentieerde epithelia toegankelijk vanaf zowel luminale als basolaterale zijden, terwijl polariteit-omgekeerde intestinale organoïden hun apicale kant blootstellen en vatbaar zijn voor hoge doorvoertesten.

Kweekmethoden om apicale-specifieke interacties te bestuderen met behulp van intestinale organoïde modellen

Hier worden gedetailleerde methoden beschreven voor het genereren, onderhouden en karakteriseren van menselijke pluripotente stamcel-afgeleide dunne darm- en colonorganoïden. Deze methoden zijn ontworpen om de reproduceerbaarheid te verbeteren, de schaalbaarheid uit te breiden en de werktijd te verkorten die nodig is voor het plateren en passeren van organoïden.

Generatie, onderhoud en karakterisering van menselijke pluripotente stamcel-afgeleide darm- en colonorganoïden

Dit protocol biedt gedetailleerde instructies voor het vaststellen van muriene dunne darm organoïden, het isoleren van type-1 aangeboren lymfoïde cellen uit de muriene dunne darm lamina propria, en het vaststellen van 3-dimensionale (3D) co-culturen tussen beide celtypen om bi-directionele interacties tussen intestinale epitheelcellen en type-1 aangeboren lymfoïde cellen te bestuderen.

Co-cultuur van murine dunne darm epitheliale organoïden met aangeboren lymfoïde cellen

Biopsie-afgeleide intestinale organoïden en organ-on-a-chips technologieën worden gecombineerd in een microfysiologisch platform om regiospecifieke darmfunctionaliteit te recapituleren.

Het combineren van menselijke organoïden en organ-on-a-chip-technologie om intestinale regiospecifieke functionaliteit te modelleren

Hier presenteren we een protocol om darmorganoïden van ratten te genereren en deze te gebruiken in verschillende stroomafwaartse toepassingen. Ratten zijn vaak een geprefereerd preklinisch model, en het robuuste intestinale organoïdesysteem voorziet in de behoefte aan een in vitro systeem om in vivo studies te begeleiden.

Generatie en manipulatie van darmorganoïden van ratten

Het protocol combineert menselijke darmorganoïdetechnologie met transcriptomische analyse van één cel om aanzienlijk inzicht te geven in voorheen onontgonnen darmbiologie.

Menselijke darmorganoïden gebruiken om het epitheel van de dunne darm te begrijpen op transcriptioneel niveau van één cel

Deze studie schetst een protocol voor het genereren van 2D-monolagen van varkensorganoïden afkomstig van de dunne en dikke darm. De groei van deze monolagen wordt gekenmerkt door toenemende TEER-waarden, wat wijst op een robuuste epitheliale integriteit. Bovendien vertonen deze monolagen fysiologische secretoire reacties in Ussing-kamerexperimenten na de toepassing van forskolin.

Tweedimensionale darmorganoïden van varkens die de fysiologische eigenschappen van de inheemse darm weerspiegelen

Het modelleren van de ontwikkeling van de menselijke hersenen is belemmerd door de ongekende complexiteit van neurologisch epitheelweefsel. Hier wordt een methode beschreven voor de robuuste generatie van hersenorganoïden om vroege gebeurtenissen van de menselijke hersenontwikkeling af te bakenen en om microcefalie in vitro te modelleren.

Genereren van iPSC afgeleide Human Brain Organoids naar Early Neurodevelopmental Disorders Model

Ontdek hoe je het enterische zenuwstelsel integreert in menselijke darmorganoïden voor weefselengineering. Deze methode verbetert de ruimtelijke organisatie en cellulaire diversiteit voor toekomstige therapieën bij darmfalen.

Innervatie van menselijke darmorganoïden

Meer video's verkennen