Verbeterde methodologie voor het bestuderen van postnatale osteogenese via intramembraneuze ossificatie in een beenmergletselmodel bij muizen

Ons onderzoek is gericht op het begrijpen van botherstelmechanismen met behulp van het beenmergletselmodel. We willen ontdekken hoe intramembraneuze ossificatie tijdens genezing wordt gereguleerd en therapeutische benaderingen onderzoeken die kunnen worden gebruikt om de botregeneratie te verbeteren. Recente studies in het veld hebben oppervlaktemarkers vastgesteld die skeletstam- en voorlopercellen definiëren en hun cruciale rol bij de ontwikkeling en het herstel van botten onthullen.

Ons protocol maakt het mogelijk om de bijdragen van deze cellen tijdens intramembraneuze ossificatie te onderzoeken, waardoor we hun regulatie en potentieel voor therapeutische targeting tijdens botherstel kunnen onderzoeken. Ons protocol pakt de kloof aan in het begrijpen van botherstel uitsluitend door intramembraneuze ossificatie in een postnatale context, met behulp van een model dat klinisch relevant is. In tegenstelling tot andere letselmodellen die worden gebruikt om intramembraneuze verbening te bestuderen, biedt ons protocol een meer gecontroleerde omgeving en reproduceerbare letselreacties, met name in de lange botten.

In de toekomst zal ons laboratorium het beenmergletselmodel gebruiken naast gelokaliseerde farmacologische benaderingen om epigenetische regulatoren van osteogenese tijdelijk te moduleren. Ons doel is om de regeneratie en genezing van botten te verbeteren door middel van nieuwe therapeutische benaderingen. Bereid om te beginnen alle werkoppervlakken voor en desinfecteer ze met een desinfecterende reiniger van klinische kwaliteit.

Bedek het verwarmingsplatform met een steriel chirurgisch kussen. Verzamel en rangschik alle steriele instrumenten en reagentia. Weeg nu de muis met behulp van een precisieweger.

Bereken op basis van de beschikbare formulering van buprenorfine het vereiste volume voor analgetische toediening. Nadat u de muis hebt verdoofd, haalt u deze voorzichtig uit de inductiekamer. Plaats het dier in rugligging op het steriele chirurgische kussen en plaats de neuskegel over het hoofd van de muis.

Haal de muis kort uit de neuskegel en injecteer de berekende dosis buprenorfine-pijnstiller met verlengde afgifte via de subcutane route. Plaats de muis vervolgens voorzichtig terug in de anesthesie-eenheid van de neuskegel. Vul een spuit van drie milliliter uitgerust met een naald van 26 gauge met steriele zoutoplossing en plaats deze opzij.

Verwijder de vacht van de achterpoot waar de procedure zal worden uitgevoerd met behulp van een elektrische tondeuse of tondeuse op batterijen. Breng met behulp van steriele applicators met wattenstaafjes een scrub van 10% povidon-jodium aan op de plaats van de operatie, gevolgd door het aanbrengen van scrub met 70% isopropylalcohol en laat het gebied volledig drogen. Plaats nu de muis op zijn rug en buig de knie van het operatiebeen.

Houd het been met de niet-dominante hand zo vast dat de knie over de middelvinger gebogen is. De tweede vinger rust op het dijbeen en de duim rust op het scheenbeen. Maak met een scalpel een kleine, ondiepe horizontale incisie net onder de knieschijf.

Zoek de gewrichtsruimte met de naald horizontaal over de gebogen knie geplaatst en voel de ruimte tussen het dijbeen en het scheenbeen. Gebruik deze anatomische handleiding om handmatig in het distale dijbeen te boren vanaf de knie naar de proximale zijde met een naald van 25 gauge. Steek de naald door of rond de patella.

Bevestig de juiste plaatsing van de naald in de medullaire holte met een röntgenfoto en zorg ervoor dat deze zich zo dicht mogelijk bij het midden bevindt. Steek na het verwijderen van de 25-gauge naald onmiddellijk een 26-gauge naald in hetzelfde gat in de mergholte. Ruim de zijkanten van de mergholte minstens vijf keer in een cirkelvormige beweging totdat deze glad aanvoelt.

Verwijder vervolgens de 26-gauge naald en spoel de holte door met 1,5 tot 2 milliliter zoutoplossing totdat de terugstroom helder is. Gooi de spuit en naald veilig weg in een daarvoor bestemde container. Sluit vervolgens de huidwond met een actuele hechtdraad.

Dien onmiddellijk na de operatie de resterende dosis buprenorfine met verlengde afgifte toe, zoals eerder berekend. Houd het dier op het verwarmingskussen in de gaten op tekenen van een normale, onbelemmerde ademhaling.