Name: Zuivering van het sarco-endoplasmatisch reticulum ca2+-ATPase uit de spier van konijnen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Leer een verbeterde methode voor de zuivering van SERCA uit konijnenspier met behulp van trehalose. Deze aanpak levert hoogzuivere eiwitten met uitstekende katalytische activiteit voor structurele studies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>ATP</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>A2383</td><td></td></tr><tr><td>Azolectin from soybean</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>44924</td><td></td></tr><tr><td>Benchtop UV transilluminator&nbsp;</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-97623-08</td><td>Duale intensiteit De hoge instelling is ideaal voor analytische documentatie. De lage instelling vermindert photonicking of fotobleken van gelmonsters tijdens het doen van voorbereidend werk.</td></tr><tr><td>CaCl2 &bull; 2H2O</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>223506</td><td></td></tr><tr><td>Coolpix B500 camera&nbsp;</td><td>Nikon Corp</td><td>S210</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie brilliant blue G-250</td><td>Bio-Rad</td><td>1610406</td><td></td></tr><tr><td>Dodecyl maltoside</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>D4641</td><td></td></tr><tr><td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&prime;,N&prime;-tetraacetic acid</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid tetrasodium salt dihydrate&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>E6511</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein isothiocyanate</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>F3651</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>JT Baker</td><td>7447-40-7</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 &bull; 6H2O</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>M1254</td><td></td></tr><tr><td>NADH</td><td>Chem-Impex International Inc</td><td>230</td><td></td></tr><tr><td>N-tetradecyl-N,N- dimethyl-3-ammonium-1-propanesulfonate</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>D0431</td><td></td></tr><tr><td>Phosphoenolpyruvate (PEP)</td><td>Chem-Impex International Inc</td><td>9711</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit muscle lactate dehydrogenase</td><td>Roche</td><td>10003557103</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit muscle pyruvate kinase</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>P1506</td><td></td></tr><tr><td>Sodium deoxycholate</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Sodium dodecyl sulfate</td><td>Bio-Rad</td><td>1610302</td><td></td></tr><tr><td>Spectropolarimeter&nbsp;</td><td>Jasco Corp.</td><td>Jasco J1500&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>84100</td><td></td></tr><tr><td>Trehalose</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>T0167</td><td>Dihydraat</td></tr><tr><td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>857645</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrifuge</td><td>Beckman</td><td>Optima XPN</td><td></td></tr><tr><td>UV/VIS spectrofotometer&nbsp;</td><td>Agilent Technologies</td><td>8453</td><td>De Agilent 8453 UV-Vis spectrofotometer gebruikt een fotodiode-array voor gelijktijdige meting van het volledige ultra-violette tot zichtbare lichtspectrum</td></tr><tr><td>WiseStir HS- 30E</td><td>Daihan Scientific Co.</td><td>DH.WOS01010</td><td>Ideaal voor alle disperging en homogenisatietoepassingen, ontworpen voor weefselmolen.</td></tr></tbody></table>

zuivering van het sarco-endoplasmatisch reticulum ca2+-atpase uit de spier van konijnen

Purification of the Sarco-Endoplasmic Reticulum Ca2+-ATPase from Rabbit Muscle

Zuivering van het sarco-endoplasmatisch reticulum ca2+-ATPase uit de spier van konijnen

Some P-type ATPases, such as sarco/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase (SERCA), are inherently labile membrane proteins that require specific ...

purification-sarco-endoplasmic-reticulum-ca2-atpase-from-rabbit

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Fluorescentie-gebaseerde waardering van Store-bediende Calcium Entry in levende cellen: van Cultured Cancer Cell op Skeletal Muscle Fiber

We beschrijven een methode om de activiteit van K+-countertransporterende P-type ATPasen te kwantificeren door heterologe expressie van de enzymen in Xenopus oöcyten en het meten van Rb+ of Li+ opname in individuele cellen door middel van atomaire absorptie spectrofotometrie. De methode is een gevoelige en veilige alternatief voor radio-isotoop flux experimenten waardoor complexe kinetische studies worden vergemakkelijkt.

Meten kationtransport van Na, K en H, K-ATPase in<em&gt; Xenopus</em&gt; Eicellen door atomaire absorptiespectrometrie: Een alternatief voor Radio-isotopen Assays

Dit artikel beschrijft de gedetailleerde protocol en de apparatuur die nodig is voor dual optische kaart brengen van transmembraan potentiaal (V m) en gratis intra-sarcoplasmatisch reticulum (SR) Ca 2+ in de Langendorff-doorbloed konijn hart. Deze methode maakt directe observatie en kwantificering van Vm en SR Ca 2+ dynamiek in het intacte hart.

Optische kaart brengen van Intra-sarcoplasmareticulum Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; En Transmembrane potentieel in de Langendorff-geperfuseerde Rabbit Heart

Calciumhomeostase van het endoplasmatisch reticulum is verstoord bij verschillende pathologieën. Een uitgescheiden ER calcium-monitoring-eiwit (SERCaMP) reporter kan worden gebruikt om verstoringen in de ER calciumopslag te detecteren. Dit protocol beschrijft het gebruik van een Gaussia luciferase SERCaMP om ER calciumhomeostase in vitro en in vivo te onderzoeken.

Monitoring endoplasmatisch reticulum calciumhomeostase Met behulp van een<em&gt; Gaussia</em&gt; Luciferase SERCaMP

Momenteel worden de meeste beschikbare calciumindicatoren gebruikt om cytoplasmatische calciumtransienten te kwantificeren als indirecte maatstaven voor calcium dat vrijkomt uit het sarcoplasmatisch reticulum in gekweekte gladde spiercellen. Dit protocol beschrijft het gebruik van een specifieke FRET-gebaseerde indicator die directe meting van calciumsignalen binnen het sarcoplasmatisch reticulum lumen mogelijk maakt.

Meting van Calcium Schommelingen Binnen het sarcoplasmareticulum van gekweekte gladde spiercellen Met behulp van FRET-gebaseerde confocale Imaging

Recycling van intracellulair calcium speelt een cruciale rol in de regulering van de systolische en diastolische functie in cardiomyocytes. Hier beschrijven we een protocol om te evalueren van sarcoplasmic reticulum Ca2 + reserve en diastolische calcium functie voor het verwijderen in cardiomyocytes door een calcium imaging systeem.

Beoordeling van Sarcoplasmic Reticulum Calcium Reserve en intracellulaire diastolische Calcium verwijdering in geïsoleerde ventriculaire Cardiomyocytes

Wij presenteren protocollen voor de toepassing van onze genetisch gecodeerde calciumindicator (GECI) CatchER + voor het monitoren van snelle calcium transiënten in het endoplasmatische / sarcoplasmatische reticulum (ER / SR) van HEK293 en skeletspier C2C12 cellen met behulp van real-time fluorescentiemicroscopie. Een protocol voor de in-situ K d meting en kalibratie wordt ook besproken.

Monitoring ER / SR Calciumvrijstelling met de gerichte Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Sensor CatchER<sup&gt; +</sup

Dit protocol beschrijft de zuivering van F1-ATPase van de gekweekte insecten fase van Trypanosoma brucei. De procedure levert een zeer zuivere, homogene en actieve complex geschikt voor structurele en enzymatische studies.

Isolatie van F1-ATPase van de parasitaire Protist Trypanosoma brucei

Mitochondriën zijn belangrijke metabole organellen die een hoog niveau van fenotypische plasticiteit in de skeletspieren vertonen. De import van eiwitten uit het cytosol is een kritieke route voor organelbiogenese, essentieel voor de uitbreiding van het reticulum en het behoud van de mitochondriale functie.  Daarom dient eiwitimport als een barometer van cellulaire gezondheid.

Meting van eiwitimportcapaciteit van skeletspier mitochondriën

Functionele site-directed fluorometrie is een methode om eiwitdomeinbewegingen in realtime te bestuderen. Modificatie van deze techniek voor de toepassing ervan in native cellen maakt nu de detectie en tracking mogelijk van bewegingen van enkele spanningssensor van spanningsafhankelijke Ca2 + -kanalen in murine geïsoleerde skeletspiervezels.

Functionele site-directed fluorometrie in inheemse cellen om de prikkelbaarheid van skeletspieren te bestuderen

Dit protocol beschrijft de procedures voor het recombinant produceren van het humaan myosine-7a holo-enzym met behulp van het MultiBac Baculovirus-systeem en voor het bestuderen van de beweeglijkheid ervan met behulp van een op maat gemaakte in vitro filament glijdende test.

MultiBac-systeemgebaseerde zuivering en biofysische karakterisering van humaan myosine-7a

Leer een verbeterde methode voor de zuivering van SERCA uit konijnenspier met behulp van trehalose. Deze aanpak levert hoogzuivere eiwitten met uitstekende katalytische activiteit voor structurele studies.

Zuivering van het sarco-endoplasmatisch reticulum ca²⁺-ATPase uit de spier van konijnen

Meer video's verkennen