Screening van kleine moleculen en toxiciteitstesten bij zebravislarven in een vroeg stadium
March 7th, 2025
Dit protocol beschrijft een screeningprocedure voor geneesmiddelen bij zebravislarven 3-7 dagen na de bevruchting, gevolgd door morfologische beoordeling.
Verzamel om te beginnen zebravisembryo's in een vroeg stadium drie dagen na de bevruchting in een petrischaaltje. Met een micropipet van 1000 microliter op een volume van 100 microliter, brengt u een gezond ogend uitgekomen embryo over in elk putje van een plaat met 96 putjes. Piket nu de benodigde hoeveelheid van de teststof in elk putje van een plaat met 12 putjes.
Pas vervolgens het totale volume aan op 2.4 milliliter met E3-medium. Bereid de voertuigbesturing voor op basis van het oplosmiddel dat is gebruikt om de standaard teststof op te lossen. Verwijder met een pipet van 200 microliter alle bestaande E3-oplossing uit elk putje van de plaat met 96 putjes.
Gebruik een achtkanaals micropipet om deze te vervangen door 100 microliter van het voorbereide testmedium voor elke concentratie. Zorg ervoor dat er in totaal 24 larven per concentratie worden getest. Gebruik na 24 uur een stereolichtmicroscoop om morfologische scores uit te voeren.
Scoor de morfologie met behulp van een binaire methode, waarbij afwezig een normale morfologie aangeeft en aanwezig een morfologische afwijking. Wanneer het scoren is voltooid, verwijdert u 50 microliter van het medium uit elk putje. Vervang het door 50 microliter vers bereid testmedium.
Verwijder en registreer alle dode larven, en broed de larven vervolgens uit bij 28,5 graden Celsius met een lichtcyclus van 14 uur en een donkercyclus van 10 uur. Zebravissen vertoonden vijf dagen na de bevruchting diverse fenotypes na twee dagen blootstelling aan het geneesmiddel. Onaangetaste zebravissen werden normaal waargenomen, terwijl bij sommige vissen mild pericardiaal oedeem duidelijk was.
Ernstig pericardiaal oedeem, vergezeld van dooierbloeding en dooierextensie werd bij anderen opgemerkt. Vertraagde ontwikkeling met verminderde pigmentatie, zwemblaas en totale lengte werd ook waargenomen. Andere fenotypes waren zebravissen met gezwollen dooier en geknikte staartvin, afwezige staartvin en gebogen notochord.
Ernstige gevallen vertoonden afkapping en dood met necrose.
Overzicht
Deze studie schetst een protocol voor geneesmiddelenscreening bij zebravislarven, 3-7 dagen na bevruchting, met focus op morfologische beoordelingen na blootstelling aan geneesmiddelen. Het doel is om verschillende fenotypische uitkomsten te analyseren die het resultaat zijn van verschillende chemische behandelingen.
Belangrijkste Studiecomponenten
Onderzoeksgebied
- Geneesmiddelenscreening
- Ontwikkelingsbiologie
- Zebravissen als modelorganismen
Achtergrond
- Zebravislarven zijn waardevol voor het beoordelen van ontwikkelingseffecten van geneesmiddelen.
- Morfologische beoordeling geeft inzicht in door geneesmiddelen geïnduceerde fenotypes.
- Het begrijpen van deze effecten kan helpen bij toxiciteitsscreening en farmacologisch onderzoek.
Gebruikte Methoden
- Geneesmiddelblootstelling in een gecontroleerde omgeving.
- Zebravislarven als biologisch systeem.
- Morfologische scoring met behulp van een stereolichtmicroscoop.
Belangrijkste Resultaten
- Diverse fenotypes waargenomen na geneesmiddelblootstelling, inclusief normale morfologie, licht tot ernstig pericardiaal oedeem en ontwikkelingsvertragingen.
- Specifieke afwijkingen zoals afwezigheid van de zwemblaas en veranderde vinnen morfologie werden geregistreerd.
- Toonde de impact van chemische behandelingen op de ontwikkeling van zebravissen.
Conclusies
- Dit onderzoek illustreert het gebruik van zebravissen voor het beoordelen van geneesmiddeleffecten op ontwikkeling.
- De bevindingen dragen bij aan het begrijpen van chemische toxiciteit en de implicaties ervan in biologisch onderzoek.
