Name: Uitgebreide analyse van de geneesmiddelrespons met behulp van de FLICK-test (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Leer de FLICK-test voor uitgebreide analyse van geneesmiddelrespons in kankercellen. Deze methode meet groei- en celdoodsnelheden nauwkeurig voor beter begrip van anti-kankermedicijnen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Hafner, M., Niepel, M., Sorger, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+drug+sensitivity+metrics+improve+preclinical+cancer+pharmacogenomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Alternative drug sensitivity metrics improve preclinical cancer pharmacogenomics.</a> Nat Biotechnol. 35 (6), 500-502 (2017).</li>
<li>Dixon, S. J., Lee, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+tips+for+interpreting+cell+death+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Quick tips for interpreting cell death experiments.</a> Nat Cell Biol. 25 (12), 1720-1723 (2023).</li>
<li>Schwartz, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+GRADE%3A+An+Integrated+Analysis+of+Population+Growth+and+Cell+Death+Reveals+Drug-Specific+and+Cancer+Subtype-Specific+Response+Profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Drug GRADE: An Integrated Analysis of Population Growth and Cell Death Reveals Drug-Specific and Cancer Subtype-Specific Response Profiles.</a> Cell Rep. 31 (12), 107800(2020).</li>
<li>Hafner, M., Niepel, M., Chung, M., Sorger, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+rate+inhibition+metrics+correct+for+confounders+in+measuring+sensitivity+to+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Growth rate inhibition metrics correct for confounders in measuring sensitivity to cancer drugs.</a> Nat Methods. 13 (6), 1-11 (2016).</li>
<li>Galluzzi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+cell+death+recommendations+of+the+Nomenclature+Committee+on+Cell+Death+2018%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of cell death recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2018.</a> Cell Death Differ. 25 (3), 486-541 (2018).</li>
<li>Tsvetkov, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+induces+cell+death+by+targeting+lipoylated+TCA+cycle+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Copper induces cell death by targeting lipoylated TCA cycle proteins.</a> Science. 375 (6586), 1254-1261 (2022).</li>
<li>Holze, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxeiptosis%2C+a+ROS-induced+caspase-independent+apoptosis-like+cell-death+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Oxeiptosis, a ROS-induced caspase-independent apoptosis-like cell-death pathway.</a> Nat Immunol. 19 (2), 130-140 (2018).</li>
<li>Maltese, W. A., Overmeyer, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methuosis+Nonapoptotic+Cell+Death+Associated+with+Vacuolization+of+Macropinosome+and+Endosome+Compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Methuosis Nonapoptotic Cell Death Associated with Vacuolization of Macropinosome and Endosome Compartments.</a> Am J Pathol. 184 (6), 1630-1642 (2014).</li>
<li>Inde, Z., Forcina, G. C., Denton, K., Dixon, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+Heterogeneity+of+Cancer+Cell+Fractional+Killing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Kinetic Heterogeneity of Cancer Cell Fractional Killing.</a> Cell Rep. 32 (1), 107845(2020).</li>
<li>Forcina, G. C., Conlon, M., Wells, A., Cao, J. Y., Dixon, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Quantification+of+Population+Cell+Death+Kinetics+in+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Syst%22%5BJournal%5D)">Systematic Quantification of Population Cell Death Kinetics in Mammalian Cells.</a> Cell Syst. 4 (6), 1-18 (2017).</li>
<li>Gelles, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Cell+and+Population-Level+Analyses+Using+Real-Time+Kinetic+Labeling+Couples+Proliferation+and+Cell+Death+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-Cell and Population-Level Analyses Using Real-Time Kinetic Labeling Couples Proliferation and Cell Death Mechanisms.</a> Dev Cell. 51 (2), 277-291.e4 (2019).</li>
<li>Richards, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+antagonism+and+single-agent+dominance+result+from+differences+in+death+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Drug antagonism and single-agent dominance result from differences in death kinetics.</a> Nat Chem Biol. 16 (7), 791-800 (2020).</li>
<li>Richards, R., Honeywell, M. E., Lee, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLICK%3A+an+optimized+plate+reader-based+assay+to+infer+cell+death+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">FLICK: an optimized plate reader-based assay to infer cell death kinetics.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100327(2021).</li>
<li>Honeywell, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+screens+with+death+rate+analyses+reveal+mechanisms+of+drug+action%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional genomic screens with death rate analyses reveal mechanisms of drug action.</a> Nat Chem Biol. 20 (11), 1443-1452 (2024).</li>
<li>Jannoo, R., Xia, Z., Row, P. E., Kanamarlapudi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+the+Interleukin-13+Receptor+%28IL-13R%29%CE%B12+Expressing+Prostate+Cancer+by+a+Novel+Hybrid+Lytic+Peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Targeting of the Interleukin-13 Receptor (IL-13R)α2 Expressing Prostate Cancer by a Novel Hybrid Lytic Peptide.</a> Biomolecules. 13 (2), 356(2023).</li>
<li>Gelles, J. D., Chipuk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+not+add+some+SPARKL+to+your+life+%28and+death%29%21%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Oncol%22%5BJournal%5D)">Why not add some SPARKL to your life (and death)!</a> Mol Cell Oncol. 7 (1), 1685841(2020).</li>
</ol>

```html
<table><tbody><tr><td>Belinostat</td><td>ApexBio</td><td>A4612</td><td></td></tr><tr><td>Camptothecin</td><td>ApexBio</td><td>A2877</td><td></td></tr><tr><td>Conical centrifuge tube, 15mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-269</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>10017CV</td><td>Voor het zaaien en mediceren van cellen</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT-25950CQC</td><td>Voor het zaaien en mediceren van cellen</td></tr><tr><td>Fisherbrand 96-Well, Cell Culture-Treated, U-Shaped-Bottom Microplate</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012932</td><td>Voor het zaaien en mediceren van cellen (pin plate)</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One&nbsp;CELLSTAR &mu;Clear 96-well, Cell Culture-Treated, Flat-Bottom Microplate</td><td>Greiner</td><td>655090</td><td>Voor het zaaien en mediceren van cellen</td></tr><tr><td>IncuCyte S3</td><td>Essen Biosciences</td><td></td><td>Elke fase microscoop werkt</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td><td>MATLAB versie R2023b, een licentie is vereist</td></tr><tr><td>Microplate fluorescentie lezer</td><td>Tecan</td><td>Spark</td><td>Voor het meten van dode cel fluorescentie</td></tr><tr><td>Palbociclib</td><td>ApexBio</td><td>A8316</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CM</td><td>Elke PBS werkt</td></tr><tr><td>Spark Multimode Microplate Reader</td><td>Tecan</td><td>https://www.tecan.com/spark-overview</td><td>SparkControl software versie 2.2</td></tr><tr><td>Steriele reservoir, 25 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-681-508</td><td>Voor het zaaien en mediceren van cellen</td></tr><tr><td>Sytox Green nucleic acid kleurstof</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S7020</td><td>DNA kleurstof voor het meten van dode cel fluorescentie</td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J66624-AP</td><td>Voor het permeabiliseren van cellen</td></tr><tr><td>U2OS</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td>Een voorbeeld van een cellijn die in dit protocol wordt gebruikt</td></tr><tr><td>Z-VAD-FMK</td><td>ApexBio</td><td>A1902</td><td></td></tr></tbody></table>
```

uitgebreide analyse van de geneesmiddelrespons met behulp van de flick-test

Comprehensive Analysis of Drug Response using the FLICK Assay

Uitgebreide analyse van de geneesmiddelrespons met behulp van de FLICK-test

For understanding drug efficacy, a critical need is to characterize the extent of drug-induced cell death. Efforts to quantify the level of drug-induced ...

comprehensive-analysis-of-drug-response-using-the-flick-assay

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video biedt een gedetailleerd protocol voor het bestuderen van het farmacologische profiel van menselijke TRPA1-kanalen met behulp van FlexStation 3. Het protocol behandelt details over de celvoorbereiding, het laden van de kleurstof en het bedienen van de microplaatlezer, FlexStation 3.

Cel-gebaseerde Calcium Assay voor medium tot hoge throughput screening van TRP Channel functies met behulp van FlexStation 3

We beschrijven de procedure en de data-analyse van een chemische screening systeem voor glucocorticoïde stresshormoon signaleren met behulp van zebravis larven: de Glucocorticoid Responsive In vivo zebravis luciferaseactiviteit (Grizly) test. De test gevoelig en specifiek detecteert effecten op glucocorticoïd signalering door verbindingen die metabolization nodig hebben of van invloed endogene glucocorticoïden productie.

Een chemische Screening Procedure voor Glucocorticoid Signalering met een zebravis larve luciferasereporter System

We beschrijven een hoge-doorvoer geneesmiddelgevoeligheidstest voor primaire multiple myeloomcellen. Het bestaat uit een reconstructie van de beenmergomgeving (inclusief extracellulaire matrix en stroma) in platen met meerdere putjes, en een niet-invasieve methode voor longitudinale kwantificering van celviabiliteit.

Een Organotypische High Throughput systeem voor de karakterisering van de Drug gevoeligheid van Primary Multiple Myeloma cellen

Eenvoudige methoden om de selectieve activering van G-eiwitten door G-eiwit-gekoppelde receptoren te detecteren, blijven een grote uitdaging in celsignalering. Hiervoor zijn Fӧrster resonantie-energieoverdracht (FRET) biosensoren ontwikkeld door een GPCR paarsgewijs vast te maken aan G-eiwitpeptiden om conformationele veranderingen te onderzoeken bij gecontroleerde concentraties in levende cellen.

G Protein-selectieve GPCR Conformaties gemeten met behulp van FRET sensoren in een Live Cell Suspension Fluorometer Assay

We presenteren een open source hoog gehalte analyse (HCA) instrument gebruik te maken van geautomatiseerde fluorescentie lifetime imaging (FLIM) voor het testen van eiwit interacties met behulp van Förster resonance energy transfer (FRET) op basis van uitlezingen. Data-acquisitie voor deze openFLIM-HCA instrument wordt bestuurd door software geschreven in μManager en data-analyse wordt uitgevoerd in FLIMfit.

Open Source High Content Analysis Door gebruik te maken van de automaten Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

De beschreven cellulaire assay is ontworpen voor de identificatie van CXC chemokine receptor 4 (CXCR4)-interagerende agenten die remmen of deze te stimuleren, concurrerend of allosterically, de intracellulaire Ca2 + release geïnitieerd door CXCR4 activering.

Een kinetische fluorescentie gebaseerde Ca2 + mobilisatie Assay te identificeren van G eiwit-gekoppelde Receptor agonisten en antagonisten Allosteric modulatoren

Synergetische drug combinaties zijn moeilijk en tijdrovend te identificeren empirisch. Hier beschrijven we een methode voor het vaststellen en valideren van synergetische kleine moleculen.

High-throughput identificatie van synergetische Drug combinaties door de overlapping2 methode

We introduceren een protocol voor het meten van real-time reactie van geneesmiddelen in organotypic tumorweefsel plakjes. De hier geschetste experimentele strategie biedt een platform voor het uitvoeren van medium-high throughput drug schermen op weefselsegmenten afgeleid van klinische of muistumoren in ex vivo omstandigheden.

Het meten van real-time drug respons in organotypic Tumor Tissue Slices

In dit werk wordt een high-throughput, intracellulaire calciumfluorescentietest voor 384-well platen beschreven om kleine molecuulbibliotheken te screenen op recombinante G-eiwitgekoppelde receptoren (GPCR's). Het doelwit, de kininereceptor van de runderkoortsteek, Rhipicephalus microplus, komt tot expressie in CHO-K1-cellen. Deze test identificeert agonisten en antagonisten die dezelfde cellen gebruiken in één "dual-addition" assay.

Een "Dual-Addition" Calcium Fluorescentie Assay voor de High-Throughput Screening van Recombinant G Protein-Coupled Receptors

Tumororganoïden van patiënten zijn een geavanceerd modelsysteem voor fundamenteel en translationeel onderzoek. Dit methodeartikel beschrijft het gebruik van gemultiplexte fluorescerende beeldvorming van levende cellen voor gelijktijdige kinetische beoordeling van verschillende organoïde fenotypes.

Meervoudige beeldvorming met levende cellen voor geneesmiddelresponsen in van patiënten afgeleide organoïdemodellen van kanker

Leer de FLICK-test voor uitgebreide analyse van geneesmiddelrespons in kankercellen. Deze methode meet groei- en celdoodsnelheden nauwkeurig voor beter begrip van anti-kankermedicijnen.

Uitgebreide analyse van de geneesmiddelrespons met behulp van de FLICK-test

Meer video's verkennen