Name: Directe cryosectie van Drosophila-koppen voor verbeterde kleuring en immunokleuring van de hersenen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Leer een vereenvoudigde cryosectiemethode voor Drosophila-hersenweefsel met decapitatie, fixatie en immunokleuring. Deze techniek maakt kwantitatieve beeldanalyse toegankelijk zonder dure microscopie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Fabbri-Destro, M., Rizzolatti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirror+neurons+and+mirror+systems+in+monkeys+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Mirror neurons and mirror systems in monkeys and humans.</a> Physiology. 23, 171-179 (2008).</li>
<li>Faust, T. E., Gunner, G., Schafer, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+governing+activity-dependent+synaptic+pruning+in+the+developing+mammalian+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms governing activity-dependent synaptic pruning in the developing mammalian CNS.</a> Nat Rev Neurosci. 22, 657-673 (2021).</li>
<li>Roozendaal, B., McEwen, B. S., Chattarji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress%2C+memory+and+the+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stress, memory and the amygdala.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 423-433 (2009).</li>
<li>Arber, S., Costa, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Networking+brainstem+and+basal+ganglia+circuits+for+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Networking brainstem and basal ganglia circuits for movement.</a> Nat Rev Neurosci. 23, 342-360 (2022).</li>
<li>GBD 2019 Dementia Forecasting Collaborators. Estimation of the global prevalence of dementia in 2019 and forecasted prevalence in 2050: an analysis for the Global Burden of Disease Study 2019. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Lancet+Public+Health%22">Lancet Public Health</a>. 7, e105-e125 (2022).</li>
<li>Huang, Y., Li, Y., Pan, H., Han, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+neurological+disorders+in+204+countries+and+territories+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glob+Health%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of neurological disorders in 204 countries and territories worldwide.</a> J Glob Health. 13, 04160(2023).</li>
<li>Crick, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+dogma+of+molecular+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Central dogma of molecular biology.</a> Nature. 227, 561-563 (1970).</li>
<li>Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+tools+and+assays+for+the+study+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Drosophila tools and assays for the study of human diseases.</a> Dis Model Mech. 9, 235-244 (2016).</li>
<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+Fly%3A+A+primer+on+the+Drosophila+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the Fly: A primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201, 815-842 (2015).</li>
<li>Larkin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FlyBase%3A+updates+to+the+Drosophila+melanogaster+knowledge+base%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">FlyBase: updates to the Drosophila melanogaster knowledge base.</a> Nucleic Acids Res. 49, D899-D907 (2021).</li>
<li>Jeibmann, A., Paulus, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+organism+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model organism of brain diseases.</a> Int J Mol Sci. 10, 407-440 (2009).</li>
<li>Winding, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+connectome+of+an+insect+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The connectome of an insect brain.</a> Science. 379, eadd9330(2023).</li>
<li>Bargiello, T. A., Jackson, F. R., Young, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+circadian+behavioural+rhythms+by+gene+transfer+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Restoration of circadian behavioural rhythms by gene transfer in Drosophila.</a> Nature. 312, 752-754 (1984).</li>
<li>Zehring, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-element+transformation+with+period+locus+DNA+restores+rhythmicity+to+mutant%2C+arrhythmic+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">P-element transformation with period locus DNA restores rhythmicity to mutant, arrhythmic Drosophila melanogaster.</a> Cell. 39, 369-376 (1984).</li>
<li>Huang, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discoveries+of+molecular+mechanisms+for+the+circadian+rhythm%3A+The+2017+Nobel+Prize+in+Physiology+or+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+J%22%5BJournal%5D)">The discoveries of molecular mechanisms for the circadian rhythm: The 2017 Nobel Prize in Physiology or Medicine.</a> Biomed J. 41, 5-8 (2018).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4, 429-434 (2012).</li>
<li>Ong, S. E., Foster, L. J., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric-based+approaches+in+quantitative+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric-based approaches in quantitative proteomics.</a> Methods. 29, 124-130 (2003).</li>
<li>Behnke, J. A., Ye, C., Moberg, K. H., Zheng, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+detect+neurodegeneration+in+Drosophila+melanogaster+whole-brain+mounts+using+advanced+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol to detect neurodegeneration in Drosophila melanogaster whole-brain mounts using advanced microscopy.</a> STAR Protoc. 2, 100689(2021).</li>
<li>Moraes, R. C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+E+induces+lipid+accumulation+through+Dgat2+that+is+prevented+with+time-restricted+feeding+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein E induces lipid accumulation through Dgat2 that is prevented with time-restricted feeding in Drosophila.</a> Genes. 15 (11), 1376(2024).</li>
<li>Roth, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reduces+neuronal+mutant+huntingtin+aggregation+and+ameliorates+locomotor+performance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reduces neuronal mutant huntingtin aggregation and ameliorates locomotor performance in Drosophila.</a> Front Aging Neurosci. 15, 1223911(2023).</li>
<li>Currier, T. A., Pang, M. M., Clandinin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+processing+in+the+fly%2C+from+photoreceptors+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Visual processing in the fly, from photoreceptors to behavior.</a> Genetics. 224, (2023).</li>
<li>McKellar, C. E., Siwanowicz, I., Dickson, B. J., Simpson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+motor+neurons+of+every+muscle+for+fly+proboscis+reaching%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Controlling motor neurons of every muscle for fly proboscis reaching.</a> Elife. 9, (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 uL Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 uL Pipette Tips</td><td>Olympus Plastics</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Fisher</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris Buffered Saline</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60877.K2</td><td>pH=7.4</td></tr><tr><td>AF750 Goat Anti-Mouse Secondary Antibody</td><td>Alexa Fluor</td><td>A21037</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Roll Glass</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>ApoE Mouse Primary Antibody</td><td>Santa Cruz</td><td>SC13521</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Fisher</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge Tubes 1.5 mL</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Charged Slides</td><td>Globe Scientific</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>Cryosectioning Molds</td><td>Fisher</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM 3050 S</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat Blades</td><td>C.L. Sturkey</td><td>DT554N50</td><td></td></tr><tr><td>Distilled Water</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dry Ice</td><td>???</td><td>???</td><td></td></tr><tr><td>Fine Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Fly Pad</td><td>Tritech Research</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr><tr><td>Hardening mounting Media with Dapi</td><td>Vectashield</td><td>H-1800</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Nile Red&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>N3013</td><td></td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature Compound</td><td>Fisher</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>Orbital Shaker</td><td>OHAUS</td><td>SHLD0415DG</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde 20%</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>Razor Blades</td><td>Gravey</td><td>#40475</td><td></td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Fisher</td><td>S5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

directe cryosectie van drosophila-koppen voor verbeterde kleuring en immunokleuring van de hersenen

Direct Cryosectioning of Drosophila Heads for Enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining

Directe cryosectie van Drosophila-koppen voor verbeterde kleuring en immunokleuring van de hersenen

Immunostaining Drosophila melanogaster brains is essential for exploring the mechanisms behind complex behaviors, neural circuits, and protein expression ...

direct-cryosectioning-drosophila-heads-for-enhanced-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

This video demonstrates the immunofluorescence staining of a transgenic Drosophila brain for single-cell imaging of glial cells. The brain expresses membrane-targeted proteins fused with different combinations of antigenic epitopes under the control of a glial-specific recombinase system. The isolated and fixed brains are stained with primary antibodies specific to the antigenic epitopes, followed by fluorophore-conjugated secondary antibodies. This labeling enables the simultaneous imaging of...

Immunofluorescence Staining of Drosophila Brains for the Single-Cell Imaging of Glial Cells

Immuunkleuring is een effectieve techniek voor het visualiseren van specifieke celtypen en eiwitten in weefsels. Door het gebruik van sonicatie vermindert het hier beschreven protocol de noodzaak om Drosophila melanogaster weefsels van laat-stadium embryo's en larven te dissekeren voordat immunokleuring wordt uitgevoerd. We bieden een efficiënte methodologie voor de immunokleuring van formaldehyde-gefixeerde hele larven.

-Sonicatie vergemakkelijkt immunofluorescentiekleuring van Late-fase embryonale en larvale<em&gt; Drosophila</em&gt; Weefsels<em&gt; In Situ</em

De volwassen Drosophila hersenen waardevol voor de studie van neuronale circuits, hogere hersenfuncties, en complexe aandoeningen. Een efficiënte methode om hele hersenweefsel van de kleine vlieg hoofd ontleden zal brain-based studies vergemakkelijken. Hier beschrijven we een eenvoudige, een-stap dissectie protocol van volwassen hersenen met goed bewaard gebleven morfologie.

Een eenvoudige één stap Dissection protocol voor Whole-mount voorbereiding van Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

Dit protocol beschrijft de dissectie en immunokleuring van volwassen Drosophila melanogaster brain weefsels. Dit protocol benadrukt in het bijzonder het gebruik van Drosophila paddestoel lichaam en fotoreceptor neuronen als voorbeeld neuronale subsets kunt weergeven die nauwkeurig kunnen worden gebruikt voor het ontdekken van de algemene beginselen die ten grondslag liggen aan vele aspecten van neuronale ontwikkeling.

Dissectie en immunefluorescentie kleuring van Mushroom lichaam en fotoreceptor neuronen in de hersenen van de volwassen Drosophila melanogaster

Cellen weergeven van verschillende morphologies en stellen een verscheidenheid van interacties met hun buren. Dit protocol wordt beschreven hoe te onthullen van de morfologie van afzonderlijke cellen en cel-cel interactie onderzoeken met behulp van de gevestigde Gal4/UAS expressie systeem.

Toepassing van MultiColor FlpOut techniek om hoge resolutie eencellige Morphologies en cel interacties van Glia in Drosophila te studeren

Hebben we een eenvoudige en flexibele workflow om kwantitatieve gegevens extract van fluorescentie imaging-gebaseerde cel biologische studies van aggregatie van eiwitten en autophagic flux in het centrale zenuwstelsel van Drosophila modellen van neurodegeneratie.

Kwantitatieve celbiologie van neurodegeneratie in Drosophila door onbevooroordeelde analyse van Fluorescently Tagged eiwitten met behulp van ImageJ

Dit document stelt een chirurgische methode voor het ontleden van Drosophila pop netvlies samen met de protocollen voor de verwerking van weefsels voor RNA-extractie, immunohistochemistry en westelijke analyse.

Dissectie van de Drosophila pop netvlies voor Immunohistochemistry, westelijke analyse en RNA isolatie

Expansie-ondersteunde iteratieve fluorescentie in situ hybridisatie (EASI-FISH) is een robuuste techniek die expansiemicroscopie combineert met fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) om de expressie van meerdere genen in dik weefsel te detecteren. Dit protocol schetst recente vorderingen in de methode en de aanpassing ervan voor het labelen van het intacte Drosophila centrale zenuwstelsel..

Multiplex detectie van genexpressie in de intacte Drosophila hersenen met behulp van expansie-ondersteunde iteratieve fluorescentie in situ hybridisatie

Het Drosophila-protocol voor hartdoorsnede en fluorescentiebeeldvorming vereenvoudigt het bestuderen van de hartstructuur en pathologieën. Deze aanpak omvat eenvoudige secties, kleuringen en beeldvorming, waarbij de technische expertise die nodig is voor traditionele dissectie wordt omzeild. Het verbetert de toegankelijkheid, waardoor Drosophila een breder bruikbaar model wordt voor hartgerelateerd onderzoek binnen de bredere wetenschappelijke gemeenschap.

Nieuwe en efficiënte methode voor Drosophila-hartfluorescentiekleuring met cryosectie

Dubbele Fluorescentie In situ Hybridisatie in Fresh Brain secties

Leer een vereenvoudigde cryosectiemethode voor Drosophila-hersenweefsel met decapitatie, fixatie en immunokleuring. Deze techniek maakt kwantitatieve beeldanalyse toegankelijk zonder dure microscopie.

Directe cryosectie van Drosophila-koppen voor verbeterde kleuring en immunokleuring van de hersenen

Meer video's verkennen