Name: Nieuwe en efficiënte methode voor Drosophila-hartfluorescentiekleuring met cryosectie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: Leer een nieuwe methode voor fluorescentiekleuring van Drosophila-harten met cryosectie. Dit protocol verbetert weefselbehoud, antilichaampenetratie en beeldresolutie zonder complexe dissecties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Baker, K. D., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+larvae+and+obese+flies-emerging+studies+of+metabolism+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Diabetic larvae and obese flies-emerging studies of metabolism in Drosophila.</a> Cell Metab. 6 (4), 257-266 (2007).</li>
<li>Bhide, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+autophagy+and+blocking+Nrf2+suppress+laminopathy-induced+age-dependent+cardiac+dysfunction+and+shortened+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Increasing autophagy and blocking Nrf2 suppress laminopathy-induced age-dependent cardiac dysfunction and shortened lifespan.</a> Aging Cell. 17 (3), e12747(2018).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342 (1), 1-11 (2004).</li>
<li>Bodmer, R., Venkatesh, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+development+in+Drosophila+and+vertebrates%3A+conservation+of+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genet%22%5BJournal%5D)">Heart development in Drosophila and vertebrates: conservation of molecular mechanisms.</a> Dev Genet. 22 (3), 181-186 (1998).</li>
<li>Gill, S., Le, H. D., Melkani, G. C., Panda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-restricted+feeding+attenuates+age-related+cardiac+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Time-restricted feeding attenuates age-related cardiac decline in Drosophila.</a> Science. 347 (6227), 1265-1269 (2015).</li>
<li>Melkani, Y., Pant, A., Guo, Y., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+assessment+of+cardiac+dynamics+in+aging+and+dilated+cardiomyopathy+Drosophila+models+using+machine+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated assessment of cardiac dynamics in aging and dilated cardiomyopathy Drosophila models using machine learning.</a> Commun Biol. 7 (1), 702(2024).</li>
<li>Ocorr, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNQ+potassium+channel+mutations+cause+cardiac+arrhythmias+in+Drosophila+that+mimic+the+effects+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (10), 3943-3948 (2007).</li>
<li>Piazza, N., Wessells, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+models+of+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila models of cardiac disease.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 100, 155-210 (2011).</li>
<li>Wolf, M. J., Rockman, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+genetic+screens%2C+and+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Drosophila, genetic screens, and cardiac function.</a> Circ Res. 109 (7), 794-806 (2011).</li>
<li>Lee, J. H., Bassel-Duby, R., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart-and+muscle-derived+signaling+system+dependent+on+MED13+and+Wingless+controls+obesity+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Heart-and muscle-derived signaling system dependent on MED13 and Wingless controls obesity in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci. 111 (26), 9491-9496 (2014).</li>
<li>Adams, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome+sequence+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The genome sequence of Drosophila melanogaster.</a> Science. 287 (5461), 2185-2195 (2000).</li>
<li>Rotstein, B., Paululat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+morphology+of+the+Drosophila+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Dev+Dis%22%5BJournal%5D)">On the morphology of the Drosophila heart.</a> J Cardiovasc Dev Dis. 3 (2), 15(2016).</li>
<li>Alayari, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+labeling+of+Drosophila+heart+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Fluorescent labeling of Drosophila heart structures.</a> J Vis Exp. (32), e1423(2009).</li>
<li>Guo, Y., Abou Daya, F., Le, H. D., Panda, S., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diurnal+expression+of+Dgat2+induced+by+time%E2%80%90restricted+feeding+maintains+cardiac+health+in+the+Drosophila+model+of+circadian+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Diurnal expression of Dgat2 induced by time‐restricted feeding maintains cardiac health in the Drosophila model of circadian disruption.</a> Aging Cell. 23 (7), e14169(2024).</li>
<li>Melkani, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Huntington%27s+disease-induced+cardiac+amyloidosis+is+reversed+by+modulating+protein+folding+and+oxidative+stress+pathways+in+the+Drosophila+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Huntington's disease-induced cardiac amyloidosis is reversed by modulating protein folding and oxidative stress pathways in the Drosophila heart.</a> PLoS Genet. 9 (12), e1004024(2013).</li>
<li>Hartley, P. S., Coward, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+podocyte+biology+using+Drosophila+nephrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Modeling podocyte biology using Drosophila nephrocytes.</a> Methods Mol Biol. 2067, 11-24 (2020).</li>
<li>Watson, J. R., Roth, J., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+cryosectioning+of+Drosophila+heads+for+enhanced+Brain+Fluorescence+Staining+and+Immunostaining%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Direct cryosectioning of Drosophila heads for enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining.</a> J. Vis. Exp. , Press e67791(2025).</li>
<li>Kelso, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flytrap%2C+a+database+documenting+a+GFP+protein%E2%80%90trap+insertion+screen+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Flytrap, a database documenting a GFP protein‐trap insertion screen in Drosophila melanogaster.</a> Nuc Acids Res. 32 (suppl_1), D418-D420 (2004).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Mery, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+muscle+LIM+protein%2C+Mlp84B%2C+is+essential+for+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function.</a> J Exp Biol. 211 (1), 15-23 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 &micro;L Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 &micro;L Pipette Tips</td><td>Olympus Plastics</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Fisher</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris Buffered Saline</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60877.K2</td><td>pH=7.4</td></tr><tr><td>Anti-Roll Glass</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Fisher</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge Tubes 1.5 mL</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Charged Slides</td><td>Globe Scientific</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>Cryosectioning Molds</td><td>Fisher</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM 3050 S</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat Blades</td><td>C.L. Sturkey</td><td>DT554N50</td><td></td></tr><tr><td>Dry Ice</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fine Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Fly Pad</td><td>Tritech Research</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr><tr><td>Hardening mounting Media with Dapi</td><td>Vectashield</td><td>H-1800</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature Compound</td><td>Fisher</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde 20%</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin 594</td><td>Abnova</td><td>U0292</td><td></td></tr><tr><td>Razor Blades</td><td>Gravey</td><td>#40475</td><td></td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Fisher</td><td>S5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

nieuwe en efficiënte methode voor drosophila-hartfluorescentiekleuring met cryosectie

Novel And Efficient Method for Drosophila Heart Fluorescence Staining with Cryosectioning

Nieuwe en efficiënte methode voor Drosophila-hartfluorescentiekleuring met cryosectie

Drosophila heart models are widely employed in studying cardiac aging and modeling&#160;human cardiac diseases. However, the dissection of Drosophila ...

Mijn onderzoekslab gebruikt het drosophila-model om veroudering en metabole stoornissen te bestuderen, waarbij tijdsbeperkt voeden en oefening worden onderzocht als interventie voor metabolische, hartspier-, slaap- en andere verouderingsziekten. Machine learning en omic met fysiologische genetische en voedingsstrategieën stroomlijnt de drosophila-test met behulp van 3D-geprinte apparaten en machine learning-benaderingen. Fluorescerende immunohistologie van drosophila-harten maakt multi-proteïne detectie mogelijk over genotypen en leeftijden, maar staat voor uitdagingen zoals complexe dissecties, weefselbehoud en hoge-resolutie beeldvorming van specifieke eiwitexpressiepatronen.Dit protocol verbetert weefselbehoud, antilichaampenetratie en beeldresolutie, waardoor betere visualisaties van cardiale proteïnemarkers mogelijk worden. Het lost uitdagingen op zoals complexe dissectie, weefselschade en beperkte resolutie in traditionele volledige hartmontagemethoden. Dit protocol verbetert de toegankelijkheid van drosophila-hartonderzoek door complexe dissectie te elimineren, eenhandige uitvoering mogelijk te maken en dure confocale microscopie te vermijden, waardoor hoge-resolutie beeldvorming haalbaarder wordt.Om te beginnen, verdooft u 5 tot 10 vliegen met behulp van een kooldioxide vliegmat. Positioneer de vliegen binnen het zicht onder de microscoop met 1X tot 2X vergroting. Gebruik verenschaar om de vliegen te onthoofden, de vleugels af te knippen en de poten te verwijderen.Houd de borst en buik samen, aangeduid als het lichaam. Gebruik een borstel om de lichamen voorzichtig in gelabelde 1,5-milliliterbuisjes op ijs te plaatsen totdat alle experimentele groepen zijn verzameld. Nadat de buisjes uit het ijs zijn verwijderd, voegt u 100 microliters van 10-millimolair ethyleenglycoltetraazijnzuur op pH 8 toe aan elke buis.Zorg ervoor dat alle lichamen ondergedompeld zijn en plaats de buisjes 10 minuten op een orbitale schudder. Vervolgens verwijdert u de ethyleenglycoltetraazijnzuuroplossing uit de buisjes. Pipetteer 100 microliters PBS in elke buis om het weefsel 10 minuten te wassen.Plaats de buisjes op de orbitale schudder tijdens het wasproces. Na het weggooien van de PBS, pipetteer 100 microliters van 4% paraformaldehyde in PBS-oplossing in elke buis. Plaats de buisjes 15 minuten op een orbitale schudder bij 100 eenheden, waarbij u ervoor zorgt dat de weefsels in contact blijven met de oplossing.Gooi vervolgens de paraformaldehyde-oplossing weg. Zodra de laatste wasbeurt voltooid is, brengt u de lichamen over in een oplossing van 10% sucrose in PBS. Zorg ervoor dat de lichamen in contact zijn met de oplossing in de buis.Haal droog ijs uit de opslag en selecteer een paar stukken voor plaatsing in een kleine metalen of plastic lade. Kies een lade met afmetingen die het gietstelsel toelaten om te worden ingebracht en plaats het direct bovenop een enkele grote en platte plak droog ijs. Vul een gelabeld gietstelsel tot 50% met optimale snijdtemperatuur, of OCT-compound, en giet langzaam om luchtbellen te minimaliseren.Plaats met een borstel de ontlede en gefixeerde drosophila-lichamen voorzichtig op het oppervlak van de OCT-compound in het gietstelsel. Gebruik een pincet om elk lichaam naar de bodem van het gietstelsel te duwen met de dorsale wand van de borst en buik over het algemeen uitgelijnd langs de bodem. Pas de lichamen aan zodat de buik plat langs de bodem van het gietstelsel ligt.Lign de lichamen in de X-, Y- en Z-dimensies om ervoor te zorgen dat elke sectie alle onderwerpen tegelijkertijd zal bevatten. Corrigeer de kromming van de buik, vooral bij mannen, om deze zoveel mogelijk te vlakken zonder de lichamen te puncteren of te verpletteren. Zodra alle onderwerpen op hun plaats zijn, plaats u het gietstelsel zodat de bodem direct op een stuk droog ijs ligt.Zorg ervoor dat de OCT-compound begint te bevriezen bij contact en ga door totdat alle onderwerpen volledig in het gietstelsel zijn ingesloten. Na het bevriezen, brengt u het gietstelsel over naar een vriezer ingesteld op min 20 graden Celsius om volledig bevriezing mogelijk te maken. Zodra volledig bevroren, vult u het resterende deel van het gietstelsel met OCT-compound.Om een koppelstukbit aan het gietstelsel te bevestigen, brengt u een royale hoeveelheid OCT-compound aan op de blok. Druk het bit plat op de compound en laat het volledig bevriezen in de cryostat, meestal binnen vijf minuten. Laat vervolgens het koppelstukbit en het OCT-blok los van het gietstelsel.Plaats het bit in het koppelstuk en zorg ervoor dat de blok van boven naar beneden goed is gepositioneerd en draai de koppelstuksleutel vast om het bit te bevestigen. Gebruik nu de aanpassingsknoppen en koppelstukdieptebedieningen om de blok met het mes uit te lijnen en stel de sectiebreedte in op 20 micrometer of lager. Snijd elke plak uit de blok met behulp van een langzame maar constante beweging, waardoor het anti-rolglas elke plak kan vangen terwijl deze wordt gesneden.Verzamel de secties met behulp van verwarmde dia's. Verwijder met een scheermesje het overtollige OCT-compound rond de secties. Omlijn de rand van elke dia met een hydrofobe stift om was- en kleuroplossingen beperkt te houden tot het weefsel.Gebruik een 1000-microliter pipet om de dia's drie keer te wassen met PBS gedurende vijf minuten elk zonder het weefsel aan te raken. Na het weggegooien van de laatste wasbeurt, pipet de fluorescente kleurstofoplossing op de weefsels en incubeer een uur bij kamertemperatuur in het donker. Gooi vervolgens de fluorescente kleurstof weg en was de dia's drie keer vijf minuten met PBS.Verwijder daarna de laatste PBS-was en laat een kleine hoeveelheid oplossing op de dia. Gebruik een 1000-microliter pipet om drie tot vijf druppels montagemedium op de dia te pipetten, vermi

novel-efficient-method-for-drosophila-heart-fluorescence-staining

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetica

Hier beschrijven we een basisprotocol voor TL-etikettering van de verschillende elementen van het hart buizen van larven en...

TL-etikettering van Drosophila Hart Structuren

We beschrijven een proces voor fixatie, inbedden, snijden, en de beeldvorming van laat...

De voorbereiding van embryo&#39;s voor Elektronenmicroscopie van de Drosophila Embryonale hart buis

We beschrijven een gestroomlijnde protocol voor het genereren van "filet" bereidingen van Drosophila embryo's van bepaalde genotypen. Dit protocol maakt een efficiënte uitvoering van een variëteit van genetische screens. Het maakt ook een uitstekende visualisatie van structuren in de late embryo.

Live-dissectie van Drosophila Embryo&#39;s: Gestroomlijnde methoden voor het screenen Mutant Collections door antilichaam kleuring

Identificatie van mechanismen die ten grondslag liggen aan spierschade is cruciaal. Hier presenteren we de histologische techniek voor het bereiden van in paraffine ingebedde en bevroren delen van Drosophila thoracale spieren. Dit maakt analyse van de spier-morfologie en lokalisatie van eiwitten en andere spiercel componenten.

Paraffine ingebedde en vriescoupes van Drosophila Adult Spieren

Hier beschrijven we een geheel gemonteerde...

Hele Mount RNA TL<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisatie van<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryo&#39;s

Immuunkleuring is een effectieve techniek voor het visualiseren van specifieke celtypen en eiwitten in weefsels. Door het gebruik van sonicatie vermindert het hier beschreven protocol de noodzaak om Drosophila melanogaster weefsels van laat-stadium embryo's en larven te dissekeren voordat immunokleuring wordt uitgevoerd. We bieden een efficiënte methodologie voor de immunokleuring van formaldehyde-gefixeerde hele larven.

-Sonicatie vergemakkelijkt immunofluorescentiekleuring van Late-fase embryonale en larvale<em&gt; Drosophila</em&gt; Weefsels<em&gt; In Situ</em

We beschrijven een protocol voor het volumetrisch afbeelden van met fluorescente eiwitten gelabelde cellen diep in intacte embryonale en postnatale harten. Door gebruik te maken van weefselklaringsmethoden in combinatie met gehele montagekleuring, kunnen enkele met fluorescente eiwitten gelabelde cellen in een embryonaal of postnataal hart duidelijk en nauwkeurig worden afgebeeld.

Imaging Ontruimde embryonale en postnatale Hearts bij Single-cell Resolution

Hebben we een eenvoudige en flexibele workflow om kwantitatieve gegevens extract van fluorescentie imaging-gebaseerde cel biologische studies van aggregatie van eiwitten en autophagic flux in het centrale zenuwstelsel van Drosophila modellen van neurodegeneratie.

Kwantitatieve celbiologie van neurodegeneratie in Drosophila door onbevooroordeelde analyse van Fluorescently Tagged eiwitten met behulp van ImageJ

Hier beschrijven we een protocol voor detectie en lokalisatie van Drosophila embryo-eiwit en RNA van verzameling tot pre-embedding en embedding, immunostaining en mRNA in situ hybridisatie.

Een protocol voor immunohistochemie en RNA-in-situ distributie binnen vroege drosophila-embryo's

Expansie-ondersteunde iteratieve fluorescentie in situ hybridisatie (EASI-FISH) is een robuuste techniek die expansiemicroscopie combineert met fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) om de expressie van meerdere genen in dik weefsel te detecteren. Dit protocol schetst recente vorderingen in de methode en de aanpassing ervan voor het labelen van het intacte Drosophila centrale zenuwstelsel..

Multiplex detectie van genexpressie in de intacte Drosophila hersenen met behulp van expansie-ondersteunde iteratieve fluorescentie in situ hybridisatie

Deze studie presenteert een vereenvoudigd protocol voor weefselverwerking met onthoofding, fixatie, cryosectie, fluorescentiekleuring, immunokleuring en beeldvorming, dat kan worden uitgebreid tot confocale en multifotonbeeldvorming. De methode behoudt een werkzaamheid die vergelijkbaar is met complexe dissecties, waarbij de noodzaak van geavanceerde motorische vaardigheden wordt omzeild. Kwantitatieve beeldanalyse biedt een uitgebreid onderzoekspotentieel.

Directe cryosectie van Drosophila-koppen voor verbeterde kleuring en immunokleuring van de hersenen

Leer een nieuwe methode voor fluorescentiekleuring van Drosophila-harten met cryosectie. Dit protocol verbetert weefselbehoud, antilichaampenetratie en beeldresolutie zonder complexe dissecties.

Nieuwe en efficiënte methode voor Drosophila-hartfluorescentiekleuring met cryosectie

Meer video's verkennen