Name: Meting van de opname van de glucose-analoog, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-deoxyglucose, in intact neuraal netvlies van muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Leer hoe je glucose-opname meet in intact muizenretina met de fluorescerende analoog 6-NBDG. Deze kosteneffectieve ex vivo methode helpt onderzoekers metabole veranderingen bij veroudering en neurodegeneratieve ziekten te begrijpen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Casson, R. J., Chidlow, G., Crowston, J. G., Williams, P. A., Wood, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+energy+metabolism+in+health+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal energy metabolism in health and glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 81, 100881(2021).</li>
<li>Daniele, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+uptake+by+GLUT1+in+photoreceptors+is+essential+for+outer+segment+renewal+and+rod+photoreceptor+survival%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Glucose uptake by GLUT1 in photoreceptors is essential for outer segment renewal and rod photoreceptor survival.</a> FASEB J. 36 (8), e22428(2022).</li>
<li>Fernandes, R., Hosoya, K. -I., Pereira, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+downregulate+glucose+transport+system+in+retinal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species downregulate glucose transport system in retinal endothelial cells.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 300 (4), C927-C936 (2011).</li>
<li>Badr, G. A., Tang, J., Ismail-Beigi, F., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+downregulates+GLUT1+expression+in+the+retina+and+its+microvessels+but+not+in+the+cerebral+cortex+or+its+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes downregulates GLUT1 expression in the retina and its microvessels but not in the cerebral cortex or its microvessels.</a> Diabetes. 49 (6), 1016-1021 (2000).</li>
<li>Kumagai, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transport+in+brain+and+retina%3A+implications+in+the+management+and+complications+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Metab+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Glucose transport in brain and retina: implications in the management and complications of diabetes.</a> Diabetes Metab Res Rev. 15 (4), 261-273 (1999).</li>
<li>Winkler, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GLUT1+reductions+exacerbate+Alzheimer%27s+disease+vasculo-neuronal+dysfunction+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GLUT1 reductions exacerbate Alzheimer's disease vasculo-neuronal dysfunction and degeneration.</a> Nat Neurosci. 18 (4), 521-530 (2015).</li>
<li>Mosconi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypometabolism+exceeds+atrophy+in+presymptomatic+early-onset+familial+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypometabolism exceeds atrophy in presymptomatic early-onset familial Alzheimer's disease.</a> J Nucl Med. 47 (11), 1778-1786 (2006).</li>
<li>Moreno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometric+changes+in+rat+optic+nerve+microvessels+in+a+glaucoma+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Soc+Esp+Oftalmol%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometric changes in rat optic nerve microvessels in a glaucoma experimental model.</a> Arch Soc Esp Oftalmol. 89 (12), 471-476 (2014).</li>
<li>Barros, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+validation+of+6-NBDG+as+a+probe+for+the+glucose+transporter+GLUT1+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic validation of 6-NBDG as a probe for the glucose transporter GLUT1 in astrocytes.</a> J Neurochem. 109 (s1), 94-100 (2009).</li>
<li>Hamilton, K. E., Bouwer, M. F., Louters, L. L., Looyenga, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+binding+and+uptake+of+fluorescent+glucose+analogs+2-NBDG+and+6-NBDG+occurs+independent+of+membrane+glucose+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Cellular binding and uptake of fluorescent glucose analogs 2-NBDG and 6-NBDG occurs independent of membrane glucose transporters.</a> Biochimie. 190, 1-11 (2021).</li>
<li>Feigenspan, A., Babai, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+horizontal+slices+of+adult+mouse+retina+for+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of horizontal slices of adult mouse retina for electrophysiological studies.</a> J Vis Exp. 119, e55173(2017).</li>
<li>Lundgaard, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+glucose+uptake+heralds+activity-dependent+increases+in+cerebral+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal glucose uptake heralds activity-dependent increases in cerebral metabolism.</a> Nat Commun. 6 (1), 6807(2015).</li>
<li>Zou, C., Wang, Y., Shen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2-NBDG+as+a+fluorescent+indicator+for+direct+glucose+uptake+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">2-NBDG as a fluorescent indicator for direct glucose uptake measurement.</a> J Biochem Biophys Methods. 64 (3), 207-215 (2005).</li>
<li>Wareham, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solving+neurodegeneration%3A+common+mechanisms+and+strategies+for+new+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Solving neurodegeneration: common mechanisms and strategies for new treatments.</a> Mol Neurodegener. 17 (1), 23(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td># 5 forceps</td><td>Katena</td><td>K5-6550</td><td>Gebruikt voor retina dissectie</td></tr><tr><td>1.5 mL microcentrifugebuizen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>26 G x 5/8" naald</td><td>sol-M</td><td>112658</td><td>Gebruikt om hoornvlies te puncteren tijdens dissectie</td></tr><tr><td>5 mL buizen</td><td>MTC bio</td><td>c2540</td><td></td></tr><tr><td>50 mL buizen</td><td>Avantor by VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>6-NBDG</td><td>Invitrogen</td><td>N23106</td><td>Fluorescente glucose analoog</td></tr><tr><td>96 well platen zwart met heldere bodem</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>265301</td><td></td></tr><tr><td>Anesthetisch koolstoffiltercartridge</td><td>ReFresh</td><td>EZ-258</td><td>Gebruikt in anesthesieset-up</td></tr><tr><td>BAY-876</td><td>Millipore Sigma</td><td>SML1774</td><td>Voor inhibitie van GLUT1.</td></tr><tr><td>Centrifuge bij 4 &deg;C</td><td>Eppendorf</td><td>EPP-5424</td><td></td></tr><tr><td>Gecomprimeerd gas (5% koolstofdioxide, 95% zuurstof)</td><td>Airgas</td><td>UN3156</td><td>Gebruikt in anesthesieset-up</td></tr><tr><td>Gebogen forceps</td><td>Roboz chirurgisch instrument</td><td>RS-5137</td><td>Gebruikt voor retina dissectie</td></tr><tr><td>DDH2O</td><td>Elga LabWater</td><td>Elga PureLab Ultra</td><td>Gebruikt na ethanol om sonicator schoon te maken tussen monsters</td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Olympus</td><td>szX12</td><td>Gebruikt voor retina dissectie</td></tr><tr><td>Ethanol 200 proof</td><td>Decon laboratories</td><td>2701</td><td>Te gebruiken om sonicator schoon te maken tussen monsters</td></tr><tr><td>Schuimzwevende buisenkast</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>36-099-2328</td><td>Voor buizen tijdens incubatie in waterbadstappen</td></tr><tr><td>Algemene schaar</td><td>Roboz chirurgisch instrument</td><td>RS-680</td><td>Gebruikt voor retina dissectie</td></tr><tr><td>Isofluraan 250 mL fles</td><td>Piramal critical care</td><td>NDC &nbsp;6679401725</td><td>Anesthesie</td></tr><tr><td>Isofluraan apparatuur</td><td>Vetequip verkocht door VWR</td><td>89012-492</td><td>Gebruikt om te anesthetiseren voorafgaand aan euthanasie</td></tr><tr><td>Kimdoekjes</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td></td></tr><tr><td>Microplaatlezer</td><td>Molecular devices</td><td>SpectraMax M2 microplaatlezer</td><td>Gebruikt om monster te lezen</td></tr><tr><td>Neurobasal- A media</td><td>Gibco</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>Neuskoker (anesthesiemasker met laag profiel)</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0801</td><td>Gebruikt om anesthesie te leveren</td></tr><tr><td>Objectief op dissectiemicroscoop</td><td>Olympus</td><td>DF plapo 1x pf</td><td>Gebruikt voor retina dissectie</td></tr><tr><td>Petrischaal</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>Gebruikt tijdens retina dissectie</td></tr><tr><td>Pierce assay reagens</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1861426</td><td></td></tr><tr><td>Pipettiptips P20</td><td>Olympus Plastics</td><td>26-404</td><td></td></tr><tr><td>Pipettiptips P200, P1000, P10 XL</td><td>VWR</td><td>76322-150, 76322-154, 76322-132</td><td></td></tr><tr><td>Pipetteman pipetten P200, P1000, P20, P10</td><td>VWR</td><td>F144055M, F144056M, F144058M, F144059M</td><td></td></tr><tr><td>SoftMax Pro software op computer</td><td>Molecular devices</td><td>SoftMax Pro 7 software</td><td>Software gebruikt om monster te lezen</td></tr><tr><td>Sonische desmembrator</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FB50110</td><td>Soniceer monster (retina)</td></tr><tr><td>Overdrachtpipetten</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-9AM</td><td>Gebruikt om retina van de ene buis naar de andere over te brengen</td></tr><tr><td>Vannas veerschaar</td><td>Katena</td><td>K4-5000</td><td>Gebruikt voor retina dissectie</td></tr><tr><td>Waterbad ingesteld op 37 &deg;C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Gebruikt voor incubatie</td></tr></tbody></table>

meting van de opname van de glucose-analoog, 6-(n-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-deoxyglucose, in intact neuraal netvlies van muizen

Measuring Uptake of the Glucose Analog, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-6-Deoxyglucose, in Intact Murine Neural Retina

Meting van de opname van de glucose-analoog, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-deoxyglucose, in intact neuraal netvlies van muizen

The retina is a highly metabolic tissue with multiple cell types requiring glucose and its derivatives to produce energy in the form of ATP. Retinal ...

measuring-uptake-glucose-analog-6-n-7-nitrobenz-2-oxa-13-diazol-4-yl

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Een eenvoudige en handige methode om de mate van gap junction tracer koppeling tussen het netvlies neuronen te bepalen is beschreven. Deze techniek laat toe om de functie van de elektrische synapsen tussen neuronen in de retina intact te onderzoeken onder verschillende belichting omstandigheden en op verschillende tijdstippen van de dag en nacht.

Cut-loading: Een handig hulpmiddel is voor de behandeling van de omvang van Gap Junction Tracer koppeling tussen het netvlies Neuronen

In this video, we demonstrate an ex vivo technique to measure extracellular glucose analog depletion in harvested mouse organs. It involves incubating the mouse tissue in a solution containing fluorescently-labeled deoxyglucose, which is taken up by the cells. The glucose analog uptake can be indirectly determined by measuring the fluorescence of the incubated medium.

Measurement of Extracellular Fluorescent Glucose Analog Depletion: A Surrogate Measurement Technique to Assess Glucose Uptake in Mouse Organs Ex Vivo

This video demonstrates the assessment of dopamine uptake in synaptosomes harvested from mouse brains. It outlines steps for preparing synaptosomes for dopamine uptake via dopamine transporters, treating them with varying concentrations of radiolabeled dopamine, isolating the synaptosomes, and measuring radioactivity to quantify dopamine uptake.

Measuring Dopamine Uptake in Mouse Brain Synaptosomes Using Radiolabeled Dopamine

De activiteit van enige neuronen uit-volwassen leeftijd muizen kunnen worden bestudeerd door te distantiëren neuronen uit specifieke gebieden van de hersenen en het gebruik van fluorescerende membraanpotentiaal kleurstof beeldvorming. Door het testen respons op veranderingen in glucose, kan deze techniek worden gebruikt om de glucose gevoeligheid van volwassen ventromediale hypothalamus neuronen te bestuderen.

Membraanpotentiaal Dye beeldvorming van ventromedial hypothalamus neuronen van volwassen muizen om te studeren Glucose Sensing

Veel visie-bedreigende oogbeschadigingen en/of ziekten worden geassocieerd met disfunctionele retinale microvessels. De meting van de retinale arteriole reacties is daarom belangrijk om te onderzoeken van de onderliggende pathofysiologische mechanismen. Dit artikel beschrijft een gedetailleerd protocol voor muis retinale arteriole isolatie en voorbereiding te beoordelen van de effecten van vasoactieve stoffen op vasculaire diameter.

Voorbereiding stappen voor meting van reactiviteit in muis retinale arteriolen Ex Vivo

Deze techniek wordt beschreven real-time opname van zuurstofverbruik en extracellulaire verzuring tarieven in het netvlies weefsel transplanteren muis met behulp van een extracellulaire flux-analyzer.

Meting van de energie-stofwisseling in transplanteren retinale weefsel met behulp van extracellulaire Flux-analyse

Glucoseopname is verhoogd in Drosophila motorneuronen die worden beïnvloed door TAR DNA-bindend eiwit (TDP-43) proteïnopathie, zoals aangegeven door een FRET-gebaseerde, genetisch gecodeerde glucosesensor.

Glucoseopname meten in Drosophila-modellen van TDP-43-proteïnopathie

Het retinale vaatstelsel van muizen is bijzonder interessant voor het begrijpen van de mechanismen van vasculaire patroonvorming. Dit protocol meet automatisch de diameter van de retinale vaten van muizen op basis van fluorescerende angiografie-fundusbeelden op een vaste afstand van de optische schijf.

Het meten van de diameter van het netvliesvat van fluorescerende angiografiebeelden van muizen

We beschrijven een methode voor het herhaaldelijk het visualiseren van muriene microglia en circulerende...

Een dunne-schedel Window Techniek voor chronische Twee-foton In vivo Imaging Murine Microglia in modellen van ontstekingsprocessen

Dit artikel geeft de registratie van de individuele cellen van fluorescent gelabelde neuronale populaties in het intacte muis netvlies. Door het gebruik van twee-foton excitatie infrarood transgenetically gelabelde cellen waren gericht voor patch-clamp opnamen om hun licht te antwoorden, receptieve veld eigenschappen, en morfologie studie.

Elektrofysiologische karakterisatie van GFP-uitdrukken celpopulaties in de Intact Retina

Leer hoe je glucose-opname meet in intact muizenretina met de fluorescerende analoog 6-NBDG. Deze kosteneffectieve ex vivo methode helpt onderzoekers metabole veranderingen bij veroudering en neurodegeneratieve ziekten te begrijpen.

Meting van de opname van de glucose-analoog, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-deoxyglucose, in intact neuraal netvlies van muizen (Video) | JoVE Journal

Meting van de opname van de glucose-analoog, 6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-deoxyglucose, in intact neuraal netvlies van muizen

Meer video's verkennen