Name: Celvrije dot blot als een praktisch en aanpasbaar immunoassayplatform voor de detectie van antilichaamrespons in menselijke en dierlijke sera (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Leer de celvrije dot blot-techniek voor immunoassay-ontwikkeling met antilichaamdetectie in menselijk en dierlijk serum. Deze betaalbare methode is geschikt voor instellingen met beperkte middelen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Carter, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+techniques+and+test+development+for+COVID-19+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Cent+Sci%22%5BJournal%5D)">Assay techniques and test development for COVID-19 diagnosis.</a> ACS Cent Sci. 6, 591-605 (2020).</li>
<li>Amanat, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+serological+assay+to+detect+SARS-CoV-2+seroconversion+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A serological assay to detect SARS-CoV-2 seroconversion in humans.</a> Nat Med. 26 (7), 1033-1036 (2020).</li>
<li>Stadlbauer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+seroconversion+in+humans%3A+A+detailed+protocol+for+a+serological+assay%2C+antigen+production%2C+and+test+setup%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 seroconversion in humans: A detailed protocol for a serological assay, antigen production, and test setup.</a> Curr Protoc Microbiol. 57 (1), e100(2020).</li>
<li>Pardee, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portable%2C+on-demand+biomolecular+manufacturing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Portable, on-demand biomolecular manufacturing.</a> Cell. 167 (1), 248-259.e12 (2016).</li>
<li>Norouzi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+dot+blot%3A+an+ultra-low-cost+and+practical+immunoassay+platform+for+detection+of+anti-SARS-CoV-2+antibodies+in+human+and+animal+sera%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Cell-free dot blot: an ultra-low-cost and practical immunoassay platform for detection of anti-SARS-CoV-2 antibodies in human and animal sera.</a> Microbiol Spectr. 11 (2), e0245722(2023).</li>
<li>Lam, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+evolution+of+APEX2+for+electron+microscopy+and+proximity+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Directed evolution of APEX2 for electron microscopy and proximity labeling.</a> Nat Methods. 12 (1), 51-54 (2014).</li>
<li>Norouzi, M., Panfilov, S., Pardee, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+protection+of+linear+DNA+in+cell-free+extracts+from+Escherichia+coli+and+Vibrio+natriegens%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">High-efficiency protection of linear DNA in cell-free extracts from Escherichia coli and Vibrio natriegens.</a> ACS Synth Biol. 10 (7), 1615-1624 (2021).</li>
<li>IDT codon optimization tool. , Integrated DNA Technologies. 
 <a target="_blank" href="https://www.idtdna.com/pages/tools/codon-optimization-tool">https://www.idtdna.com/pages/tools/codon-optimization-tool</a> (2025).</li>
<li>General protocol for western blotting. , Bio-Rad. 
 <a target="_blank" href="https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6376.pdf">https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6376.pdf</a> (2025).</li>
<li>Mruk, D. D., Cheng, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+chemiluminescence+%28ECL%29+for+routine+immunoblotting%5BTitle%5D)+AND+%22Spermatogenesis%22%5BJournal%5D)">Enhanced chemiluminescence (ECL) for routine immunoblotting.</a> Spermatogenesis. 1, 121-122 (2011).</li>
<li>Levine, M. Z., Gregorio, N. E., Jewett, M. C., Watts, K. R., Oza, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli-based+cell-free+protein+synthesis%3A+Protocols+for+a+robust%2C+flexible%2C+and+accessible+platform+technology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli-based cell-free protein synthesis: Protocols for a robust, flexible, and accessible platform technology.</a> J Vis Exp. (144), (2019).</li>
<li>Plasma and serum preparation. , ThermoFisher Scientific. 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/ca/en/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/elisa-protocol/elisa-sample-preparation-protocols/plasma-and-serum-preparation.html">https://www.thermofisher.com/ca/en/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/elisa-protocol/elisa-sample-preparation-protocols/plasma-and-serum-preparation.html</a> (2025).</li>
<li>Mattiuzzo, G., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMattiuzzo%2C+G+%22WHO%2FBS.2020.2403+Establishment+of+the+WHO+International+Standard+and+Reference+Panel+for+anti-SARS-CoV-2+antibody%22">WHO/BS.2020.2403 Establishment of the WHO International Standard and Reference Panel for anti-SARS-CoV-2 antibody</a>. , (2020).</li>
<li>Gong, F., Wei, H., Li, Q., Liu, L., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+and+comparison+of+serological+methods+for+COVID-19+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Evaluation and comparison of serological methods for COVID-19 diagnosis.</a> Front Mol Biosci. 8, 682405(2021).</li>
<li>Peeling, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serology+testing+in+the+COVID-19+pandemic+response%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Serology testing in the COVID-19 pandemic response.</a> Lancet Infect Dis. 20 (9), e245-e249 (2020).</li>
<li>Smith, M. T., Berkheimer, S. D., Werner, C. J., Bundy, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lyophilized+Escherichia+coli-based+cell-free+systems+for+robust%2C+high-density%2C+long-term+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Lyophilized Escherichia coli-based cell-free systems for robust, high-density, long-term storage.</a> Biotechniques. 56 (4), 186-193 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 kb DNA ladder</td><td>NEB</td><td>N3232</td><td>Gebazig als maatstaf voor agarose gels</td></tr><tr><td>20 Amino acids</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>LAA21-1KT</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing B</td></tr><tr><td>2 mm biopsy punch&nbsp;</td><td>Integra Miltex&nbsp;</td><td>33-31-P/25</td><td>Voor bereiding van CFDB master grid</td></tr><tr><td>5-aminolevulinic acid hydrochloride&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3785</td><td>Heem voorloper voor inductie van SpyCatcher2-Apex2</td></tr><tr><td>Agarose powder</td><td>BioShop</td><td>AGA002</td><td>Voor elektroforetische analyse van DNA</td></tr><tr><td>Anti-SARS-CoV2-Nucleocapsid antibody</td><td>Sinobiological</td><td>40588-T62</td><td>Voor WB detectie van celvrij geproduceerde NP antigeen</td></tr><tr><td>Bio-Rad ChemiDoc&nbsp; XRS+</td><td>Bio-Rad</td><td>N/A</td><td>Gel beeldvorming instrument</td></tr><tr><td>Centrifugal concentrators</td><td>Cytiva</td><td>28-9323-60</td><td>Voor concentratie en bufferuitwisseling van eiwitten</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>EP022628257</td><td>Voor het oogsten van bacteriële cultuur</td></tr><tr><td>Coenzyme&nbsp;A sodium salt hydrate (CoA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3144</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing A</td></tr><tr><td>Color pre-stained protein standard (broad range)</td><td>NEB</td><td>P7719</td><td>Gebazig als maatstaf voor SDS-PAGE gels</td></tr><tr><td>Covid-19 serum panel</td><td>RayBiotech</td><td>CoV-PosSet</td><td>Voor geverifieerde en geoptimaliseerde CFDB reagentia/condities</td></tr><tr><td>D-(&minus;)-3-Phosphoglyceric acid disodium salt (3-PGA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8877</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing B</td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10197777001</td><td>Component van buffers</td></tr><tr><td>E. coli 5-alpha</td><td>NEB</td><td>C2987&nbsp;</td><td>voor plasmide bereiding</td></tr><tr><td>E. coli BL21&nbsp;</td><td>NEB</td><td>C2530&nbsp;</td><td>Voor bereiding van celvrije lysaten</td></tr><tr><td>E. coli BL21 (DE3)</td><td>NEB</td><td>C2527&nbsp;</td><td>Voor expressie van SpyCatcher2-Apex2</td></tr><tr><td>EDTA-free protease inhibitor tablet</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11836153001</td><td>Een component van E. coli lysis buffer</td></tr><tr><td>Eppendorf&nbsp;New Brunswick&nbsp;Innova 43/43R Incubator Shaker</td><td>Eppendorf</td><td>EPM1320</td><td>Incubator voor groei van E. coli cellen voor eiwitexpressie en celvrije lysate bereiding</td></tr><tr><td>Folinic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47612</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing A</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9012</td><td>Component van SpyCatcher2-Apex2 opslagoplossing</td></tr><tr><td>Hemin chloride&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9039&nbsp;</td><td>Voor heem suppletie van SpyCatcher2-Apex2</td></tr><tr><td>Hydrogen peroxide 30%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009</td><td>Voor het maken van ECL reagens</td></tr><tr><td>Image Lab Software</td><td>Bio-Rad</td><td>1709690</td><td>Software voor ChemiDoc gel&nbsp; beeldvorming instrument</td></tr><tr><td>Isopropyl-b-D-1-thiogalactopyranoside&nbsp;</td><td>Bioshop</td><td>IPT001</td><td>Voor inductie van SpyCatcher2-Apex2 expressikon</td></tr><tr><td>Kanamycin Sulfate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60615</td><td>Voor bereiding van SpyCatcher2-Apex2 bacteriële cultuur</td></tr><tr><td>LB agar</td><td>BioShop</td><td>LBL406</td><td>Voor E. coli groei</td></tr><tr><td>LB broth</td><td>BioShop</td><td>LBL407</td><td>Voor E. coli groei</td></tr><tr><td>luminol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4685</td><td>Voor het maken van ECL reagens</td></tr><tr><td>Lysozyme</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6876</td><td>Voor lysis van bacteriële cellen</td></tr><tr><td>Magnesium Acetate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5661</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing B</td></tr><tr><td>NEBExpress Ni resin&nbsp;</td><td>NEB</td><td>S1428S</td><td>Voor zuivering van SpyCatcher2-Apex2</td></tr><tr><td>Non-fat dry milk</td><td>Bioshop</td><td>SKI400</td><td>Voor het blokkeren van WB en CFDB membranen</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>2099-1337410</td><td>Voor ECL-incubatie van CFDB blots</td></tr><tr><td>p-coumaric acid&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9008</td><td>Voor het maken van ECL reagens</td></tr><tr><td>pET24b-SpyCatcher2-Apex2 plasmid</td><td>Pardee Laboratory</td><td>N/A</td><td>Gebazig voor de expressie van SpyCatcher2-Apex2 eiwit</td></tr><tr><td>Petri dish</td><td>Fisherbrand</td><td>FB0875712</td><td>Container voor WB en CFDB membraan incubatie&nbsp;</td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline 10%</td><td>BioShop</td><td>PBS405</td><td>Component van buffers</td></tr><tr><td>Potassium Glutamate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1501</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing B</td></tr><tr><td>Potassium Oxalate Monohydrate (Oxalic acid)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223425</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing A</td></tr><tr><td>Precast SDS-PAGE gel</td><td>BioRad</td><td>4561036EDU</td><td>Voor elektroforetische analyse van eiwit</td></tr><tr><td>Q5 high-fidelity DNA polymerase&nbsp;</td><td>NEB</td><td>M0491&nbsp;</td><td>Voor PCR versterking van LETs</td></tr><tr><td>QIAquick PCR purification kit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>28106</td><td>Voor zuivering van LETs</td></tr><tr><td>Ribonucleotide Solution Set</td><td>NEB</td><td>N0450S</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing A</td></tr><tr><td>Skim milk powder</td><td>BioShop</td><td>SKI400</td><td>Gebazig als blokkeringsmiddel voor western blot en CFDB</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9625</td><td>Een component van eiwitzuiveringsbuffers</td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Qsonica</td><td>Q500</td><td>Voor lysis van bacteriële cellen</td></tr><tr><td>Spermidine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2626</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing A</td></tr><tr><td>Syringe filter</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLGSR33SS</td><td>Voor sterilisatie van buffers en oplossingen</td></tr><tr><td>Thermocycler</td><td>BioRad</td><td>T100</td><td>Instrument voor het incuberen van PCR reacties</td></tr><tr><td>Transfer RNA (tRNA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8759</td><td>Een component van de celvrije reactie Oplossing A</td></tr><tr><td>Tris buffered saline</td><td>Thermo Scientific</td><td>J

celvrije dot blot als een praktisch en aanpasbaar immunoassayplatform voor de detectie van antilichaamrespons in menselijke en dierlijke sera

Cell-Free Dot Blot as a Practical and Adaptable Immunoassay Platform for the Detection of Antibody Response in Human and Animal Sera

Celvrije dot blot als een praktisch en aanpasbaar immunoassayplatform voor de detectie van antilichaamrespons in menselijke en dierlijke sera

The string of global pathogenic outbreaks over the past two decades has highlighted the importance of serosurveillance strategies. Immunoassay platforms ...

cell-free-dot-blot-as-practical-adaptable-immunoassay-platform-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Met behulp van Luminex Corporation xMAP microsfeer technologie, hebben we de multiplexverzending fluorometrische immunoassay (MFIA) voor serologische tests van de verschillende proefdier. De MFIA een suspensie microarray waar antigen, weefselcontrole of immunoglobulinen covalent gekoppeld aan gekleurde polystyreen microsferen. De MFIA testmethode, evenals verschillende onderwerpen voor problemen oplossen is gericht.

Multiplexed fluorometrische Immunoassay Methodiek en problemen oplossen

This video describes an immunoassay technique using fluorescent magnetic beads or microspheres coupled with different antigens to simultaneously detect various antibody isotypes in a serum sample. The assay is helpful in understanding seroconversion during an infection or post-vaccination.

Multianalyte Immunobead Assay: A Flow-Based Immunoassay Technique for Concurrent Detection of Multiple Antibody Subtypes in Human Serum Sample

Dit protocol beschrijft de ontwikkeling van twee IgG-klasse monoklonale antilichamen (mAbs) die sterk reageren op myoglobine van cetacean. Deze mAbs worden toegepast op een colloïdaal goud immunochromatografische teststrip op basis van het sandwich-formaat om het Mb van cetacean te onderscheiden van zeehond en andere dieren.

Ontwikkeling van een colloïdaal goud-gebaseerde immunochromatographic teststrip voor detectie van walvisachtigen Myoglobin

Menselijk perifeer bloed wordt vaak gebruikt voor de beoordeling van de humorale immuunrespons. Hier worden de methoden beschreven voor het isoleren van menselijke B-cellen uit perifeer bloed, het differentiëren van menselijke B-cellen in antilichaam (Ab)-secreterende B-cellen (ASC's) in cultuur en het tellen van het totale aantal IgM- en IgG-ASC's via een ELISpot-assay.

De isolatie, differentiatie en kwantificering van menselijk antilichaam-uitscheidende B-cellen uit bloed: ELISpot als functionele Uitlezing van humorale immuniteit

We tonen een module chiptechnologie voor het uitvoeren van cross-country-reactivity-vrije multiplexed sandwich-immunoassay door simpelweg twee dia's uitlijnen. Een apparaat module wordt gebruikt voor het op betrouwbare wijze overbrengen van reagentia van microarray-naar-microarray. De module-chip kan worden gebruikt voor alle biochemische reacties vereisen colocalization van verschillende reagentia zonder kruisbesmetting.

Snap Chip voor cross-country-reactivity-gratis en Spotter-gratis Multiplexed Sandwich-immunoassay

Hier tonen we een gedetailleerd proces van kwantitatieve dot vlekkenanalyse (QDB) door de vaststelling van de absolute inhoud van een gerichte eiwit, aftopping actine eiwit, gelsolin-achtige (CAPG), in drie verschillende muis weefsels. We tonen een hoge doorvoer, handige, kwantitatieve immunoblot techniek voor biomerker validatie op het niveau van cellulaire en weefsel.

High Throughput, Absolute bepaling van het gehalte van een geselecteerde eiwit op weefsel niveaus met behulp van kwantitatieve Dot analyse (QDB) van de vlek

In deze paper beschrijven we een protocol karakteriseren T-afhankelijke en T-onafhankelijke immunoglobulin (Ig) isotype reacties in muizen met behulp van ELISA. Deze methode gebruikt alleen of in combinatie met stroom cytometry onderzoekers te identificeren van verschillen in de B-cel-gemedieerde Ig isotype reacties in muizen na T-afhankelijke en T-onafhankelijke antigeen immunisatie zal toestaan.

Karakterisering van zwezerik-afhankelijke en Thymus-onafhankelijke Immunoglobulin Isotype reacties in muizen met behulp van Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Dit artikel beschrijft een handige methode voor het gelijktijdig monitoren van dynamische veranderingen in antilichaamtiters voor twee immunoglobuline-isotypen (IgA, IgM of IgG) als gevolg van een immuunrespons op SARS-CoV-2-infectie of vaccinatie. Dit 'Multianalyte Covid-19 Immune Response Panel' maakt gebruik van drie indirecte immunoassays gebouwd op gecodeerde microsferen die worden gelezen met behulp van een flow-gebaseerde multiplexlezer met 'dual-channel' mogelijkheid.

Dynamische monitoring van seroconversie met behulp van een multianalyt immunokraaltest voor Covid-19

Dit protocol beschrijft een methodologie voor de bereiding van latexkorrels voor assays met behulp van IgY-antilichamen voor antigeendetectie.

Standaardisatie van een cytometrische kralentest op basis van eigeel-antilichamen

Op volbloed gebaseerde immunoassays bieden een gemakkelijk en hulpbronnenefficiënt hulpmiddel om antigeenspecifieke immuniteit te analyseren voor diagnostische en onderzoeksdoeleinden. Dit artikel biedt een geoptimaliseerd volbloedprotocol met dubbele co-stimulatie voor uitgebreide analyse van de immuniteit van de gastheer tegen schimmel- en virale pathogenen, inclusief een versie met een laag volume voor pediatrische patiënten en kleine dieren.

Volbloedtest met dubbele co-stimulatie voor antigeenspecifieke analyse van de immuniteit van de gastheer tegen schimmel- en virale pathogenen

We presenteren een gevalideerde sandwich-ELISA-test met behulp van nieuwe anti-HER2 monoklonale antilichamen. Deze test maakt een nauwkeurige kwantificering mogelijk van celgebonden en vrijgegeven HER2-eiwit uit in vitro gekweekte cellen en andere monsters, waaronder bloed en weefsels.

Gevalideerde immunochemische test voor uitgebreide bepaling van de humane epidermale groeifactorreceptor 2 die vrijkomt uit en gebonden is aan cellen

Leer de celvrije dot blot-techniek voor immunoassay-ontwikkeling met antilichaamdetectie in menselijk en dierlijk serum. Deze betaalbare methode is geschikt voor instellingen met beperkte middelen.

Celvrije dot blot als een praktisch en aanpasbaar immunoassayplatform voor de detectie van antilichaamrespons in menselijke en dierlijke sera (Video) | JoVE Journal

Celvrije dot blot als een praktisch en aanpasbaar immunoassayplatform voor de detectie van antilichaamrespons in menselijke en dierlijke sera

Meer video's verkennen