Name: Genereren van apicaal-out darmorganoïden en beoordeling van de proliferatiesnelheid van organoïden met behulp van EdU-labeling (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:57:00.000+00:00
Duration: 5 min 38 s
Description: Leer hoe je apicaal-out darmorganoïden genereert uit hondenstamcellen en de proliferatie beoordeelt met EdU-labeling. Deze methode verbetert de toegankelijkheid van de apicale celoppervlakte voor onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459, 262-265 (2009).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP+suppresses+Wnt+signaling+via+the+Bcl11b-regulated+NuRD+complex+to+maintain+intestinal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">BMP suppresses Wnt signaling via the Bcl11b-regulated NuRD complex to maintain intestinal stem cells.</a> EMBO J. 43 (23), 6032-6051 (2024).</li>
<li>Gaowa, A., Leangpanich, S., Park, E. J., Kawamoto, E., Shimaoka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irisin+promotes+intestinal+epithelial+cell+proliferation+via+Wnt%2F%CE%B2-catenin+and+focal+adhesion+kinase+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Irisin promotes intestinal epithelial cell proliferation via Wnt/β-catenin and focal adhesion kinase signaling pathways.</a> Sci Rep. 14, 25702(2024).</li>
<li>Basak, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+quiescence+of+Lgr5%2B+stem+cells+in+intestinal+organoids+enables+differentiation+of+hormone-producing+enteroendocrine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Induced quiescence of Lgr5+ stem cells in intestinal organoids enables differentiation of hormone-producing enteroendocrine cells.</a> Cell Stem Cell. 20 (2), 177-190 (2017).</li>
<li>Ludikhuize, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+define+intestinal+stem+cell+differentiation+downstream+of+a+FOXO%2FNotch+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Mitochondria define intestinal stem cell differentiation downstream of a FOXO/Notch axis.</a> Cell Metab. 32 (5), 889-900.e7 (2020).</li>
<li>Ettayebi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+human+noroviruses+in+stem+cell-derived+human+enteroids%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Replication of human noroviruses in stem cell-derived human enteroids.</a> Science (1979). 353 (6306), 1387-1393 (2016).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+bat+and+human+intestinal+organoids+by+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Infection of bat and human intestinal organoids by SARS-CoV-2.</a> Nat Med. 26 (7), 1077-1083 (2020).</li>
<li>Joo, S. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+intestinal+apical-out+organoid+model+for+gut+function+study%5BTitle%5D)+AND+%22Animals%22%5BJournal%5D)">Porcine intestinal apical-out organoid model for gut function study.</a> Animals. 12 (3), 372(2022).</li>
<li>Co, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+epithelial+polarity%3A+A+human+enteroid+model+for+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Controlling epithelial polarity: A human enteroid model for host-pathogen interactions.</a> Cell Rep. 26, 2509-2520.e4 (2019).</li>
<li>Sasaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+scalable+coculture+system+for+gut+anaerobes+and+human+colon+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Development of a scalable coculture system for gut anaerobes and human colon epithelium.</a> Gastroenterology. 159 (1), 388-390.e5 (2020).</li>
<li>Mayorgas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+strategy+to+study+the+invasive+capability+of+adherent-invasive+escherichia+coli+by+using+human+primary+organoid-derived+epithelial+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">A novel strategy to study the invasive capability of adherent-invasive escherichia coli by using human primary organoid-derived epithelial monolayers.</a> Front Immunol. 12, 646906(2021).</li>
<li>Csukovich, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralising+effects+of+different+antibodies+on+clostridioides+difficile+toxins+TcdA+and+TcdB+in+a+translational+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Neutralising effects of different antibodies on clostridioides difficile toxins TcdA and TcdB in a translational approach.</a> Int J Mol Sci. 24 (4), 3867(2023).</li>
<li>Csukovich, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarity+reversal+of+canine+intestinal+organoids+reduces+proliferation+and+increases+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Polarity reversal of canine intestinal organoids reduces proliferation and increases cell death.</a> Cell Prolif. 57 (2), e13544(2023).</li>
<li>Kramer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+differentiating+and+long-living+intestinal+organoids+reflecting+the+cellular+diversity+of+canine+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of differentiating and long-living intestinal organoids reflecting the cellular diversity of canine intestine.</a> Cells. 9 (4), 822(2020).</li>
<li>Pleguezuelos-Manzano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+culture+of+human+intestinal+organoids+derived+from+adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Establishment and culture of human intestinal organoids derived from adult stem cells.</a> Curr Protoc Immunol. 130 (1), e106(2020).</li>
<li>Dutta, D., Heo, I., O'Connor, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+infection+in+3D+tissue-derived+human+organoid+culture+systems+by+microinjection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Studying infection in 3D tissue-derived human organoid culture systems by microinjection.</a> J Vis Exp. (151), e59610(2019).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+SLC26A3+expression+and+function+in+intestinal+epithelial+cells+in+response+to+Cryptosporidium+parvum+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Decreased SLC26A3 expression and function in intestinal epithelial cells in response to Cryptosporidium parvum infection.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 317 (6), C1205-C1212 (2019).</li>
<li>Dutta, D., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+culture+systems+to+study+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Organoid culture systems to study host-pathogen interactions.</a> Curr Opin Immunol. 48, 15-22 (2017).</li>
<li>Csukovich, G., Pratscher, B., Burgener, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+world+of+organoids%3A+Gastrointestinal+disease+modelling+in+the+age+of+3R+and+one+health+with+specific+relevance+to+dogs+and+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Animals%22%5BJournal%5D)">The world of organoids: Gastrointestinal disease modelling in the age of 3R and one health with specific relevance to dogs and cats.</a> Animals. 12 (18), 2461(2022).</li>
<li>Han, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creating+a+more+perfect+union%3A+Modeling+intestinal+bacteria-epithelial+interactions+using+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Creating a more perfect union: Modeling intestinal bacteria-epithelial interactions using organoids.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 12 (2), 769-782 (2021).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+porcine+intestinal+organoids%3A+an+apical-out+organoid+model+for+swine+enteric+virus+infection+and+immune+response+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Next-generation porcine intestinal organoids: an apical-out organoid model for swine enteric virus infection and immune response investigations.</a> J Virol. 94 (21), e01006-e01020 (2020).</li>
<li>Smith, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+ovine+gastric+and+intestinal+organoids+for+studying+ruminant+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The development of ovine gastric and intestinal organoids for studying ruminant host-pathogen interactions.</a> Front Cell Infect Microbiol. 11, 733811(2021).</li>
<li>Nash, T. J., Morris, K. M., Mabbott, N. A., Vervelde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inside-out+chicken+enteroids+with+leukocyte+component+as+a+model+to+study+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Inside-out chicken enteroids with leukocyte component as a model to study host-pathogen interactions.</a> Commun Biol. 4 (1), 377(2021).</li>
<li>Hanson, K. I., Weiss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+tissue+response+to+Shiga+toxin+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Intestinal tissue response to Shiga toxin exposure.</a> mBio. 15 (9), e0123224(2024).</li>
<li>Hovhannisyan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+human+organoids+supports+an+intestinal+niche+for+Chlamydia+trachomatis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Infection of human organoids supports an intestinal niche for Chlamydia trachomatis.</a> PLoS Pathog. 20 (8), e1012144(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24 well plates</td><td>Biologix</td><td>07-6024</td><td></td></tr><tr><td>[Leu15]-Gastrin I human, &ge;95% (HPLC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-9145</td><td></td></tr><tr><td>&micro;-Slide 18 Well Glass Bottom</td><td>ibidi</td><td>81817</td><td></td></tr><tr><td>100X Penicillin-Streptomycin supplement for Media</td><td>Gibco/Thermo</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>A 83-01&nbsp;</td><td>Tocris Bioscience</td><td>2939/10&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Adherence Rinsing Solution</td><td>StemCell Technologies</td><td>7010</td><td></td></tr><tr><td>arivis Pro&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>Version 4.2.2</td><td></td></tr><tr><td>B27 SerumFree Supplement (50X), liquid</td><td>Gibco/Thermo</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Bisbenzimide H 33342 (Hoechst 33342)</td><td>Abcam</td><td>ab145597</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906-100G</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Cell Proliferation Kit for Imaging, Alexa Fluor 647 dye</td><td>Thermo Scientific</td><td>C10340</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Gibco/Thermo</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>Geltrex</td><td>Gibco/Thermo</td><td>A1413202</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement&nbsp;</td><td>Gibco/Thermo</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Buffer Solution 1 M, liquid</td><td>Gibco/Thermo</td><td>15630056</td><td></td></tr><tr><td>Human FGF-basic</td><td>PeproTech</td><td>100-18B-100&micro;G</td><td></td></tr><tr><td>Human HGF&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>100-39-100&micro;G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Human IGF-I&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>100-11-100&micro;G</td><td></td></tr><tr><td>Human NOGGIN (Mammalian)&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>120-10C-200&micro;G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>N-Acetyl-L-cysteine,cell culture tested, BioReagent&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165-5G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Organoid Harvesting Solution</td><td>Thermo</td><td>C10340</td><td></td></tr><tr><td>Triton(TM) X-100,for molecular biology</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787-250ML</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red</td><td>Gibco/Thermo</td><td>25300054</td><td></td></tr></tbody></table>

genereren van apicaal-out darmorganoïden en beoordeling van de proliferatiesnelheid van organoïden met behulp van edu-labeling

Generation of Apical-Out Intestinal Organoids and Assessment of Organoid Proliferation Rate Using EdU-Labeling

Genereren van apicaal-out darmorganoïden en beoordeling van de proliferatiesnelheid van organoïden met behulp van EdU-labeling

Here, we describe the generation of floating cultures of apical-out intestinal organoids from hydrogel-embedded intestinal organoid cultures. ...

generation-apical-out-intestinal-organoids-assessment-organoid

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Een eenvoudige methode om primaire murine colon tumor organoïde stellen beschreven. Deze methode maakt gebruik van de functie die colon tumorcellen overleven en te groeien in organoids in media die beperkte groei factoren, terwijl de normale colon epitheel niet doen.

In vitro organoïde Cultuur van primaire Mouse Colon Tumoren

Hier wordt een protocol te oogsten, te onderhouden en te behandelen muis dunne darm organoids met pathogeen geassocieerde moleculaire patronen (PAMPs) en Listeria monocytogenes beschreven, alsmede nadruk op genexpressie en correcte normalisatie technieken voor eiwit.

De<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cultuur en Pattern Recognition Receptor Stimulatie van de Muis Intestinal Organoids

Intestinale organoid culturen van hele crypten gevestigd zijn en laat niet de analyse van zelf-vernieuwing en differentiatie in een cel-specifieke mode. Dit protocol beschrijft reconstitutie van gesorteerde stengel (Lgr5+) en niche (Paneth) cellen, die aanleiding tot organoids geven terwijl het toelaten van hun voorafgaande biochemische en genetische modificatie en de functionaalanalyse.

De Organoid reconstitutie Assay (ORA) voor de functionele analyse van intestinale stam en Niche cellen

De borstklier is een tweelaagse structuur, bestaande uit buitenste myoepitheel en binnenste luminale epitheelcellen. Gepresenteerd is een protocol voor de voorbereiding van organoïden met behulp van differentiële trypsinisatie. Deze efficiënte methode stelt onderzoekers in staat om deze twee celtypen afzonderlijk te manipuleren om vragen over hun rol in de vorm en functie van de borstklier te onderzoeken.

Generatie van Mozaïek Borstorganoïden door Differentiële Trypsinization

Dit protocol maakt het mogelijk om menselijke pluripotente cellen te differentiëren tot darmorganoïden. Het protocol bootst de normale menselijke ontwikkeling na door cellen te differentiëren in een populatie van definitief endoderm, endoderm van de dikke darm en vervolgens darmepitheel. Dit maakt het protocol geschikt voor het bestuderen van zowel darmontwikkeling als toepassingen voor ziektemodellering.

Generatie van hiPSC-afgeleide darmorganoïden voor ontwikkelings- en ziektemodelleringstoepassingen

Hier beschrijven we de voorbereiding van van menselijke organoïden afgeleide intestinale epitheliale monolagen voor het bestuderen van de darmbarrièrefunctie, permeabiliteit en transport. Omdat organoïden de oorspronkelijke reactie van epitheelweefsel op externe stimuli vertegenwoordigen, combineren deze modellen de voordelen van uitbreidbaarheid van cellijnen en de relevantie en complexiteit van primair weefsel.

Organoïde-afgeleide epitheliale monolaag: een klinisch relevant in vitro model voor de darmbarrièrefunctie

Hier presenteren we twee protocollen die het modelleren van intestinale apicale-specifieke interacties mogelijk maken. Organoïde-afgeleide intestinale monolagen en Air-Liquid Interface (ALI) culturen vergemakkelijken de generatie van goed gedifferentieerde epithelia toegankelijk vanaf zowel luminale als basolaterale zijden, terwijl polariteit-omgekeerde intestinale organoïden hun apicale kant blootstellen en vatbaar zijn voor hoge doorvoertesten.

Kweekmethoden om apicale-specifieke interacties te bestuderen met behulp van intestinale organoïde modellen

Hier presenteren we een protocol om darmorganoïden van ratten te genereren en deze te gebruiken in verschillende stroomafwaartse toepassingen. Ratten zijn vaak een geprefereerd preklinisch model, en het robuuste intestinale organoïdesysteem voorziet in de behoefte aan een in vitro systeem om in vivo studies te begeleiden.

Generatie en manipulatie van darmorganoïden van ratten

Deze studie schetst een protocol voor het genereren van 2D-monolagen van varkensorganoïden afkomstig van de dunne en dikke darm. De groei van deze monolagen wordt gekenmerkt door toenemende TEER-waarden, wat wijst op een robuuste epitheliale integriteit. Bovendien vertonen deze monolagen fysiologische secretoire reacties in Ussing-kamerexperimenten na de toepassing van forskolin.

Tweedimensionale darmorganoïden van varkens die de fysiologische eigenschappen van de inheemse darm weerspiegelen

Dit protocol legt de primaire Lgr5-positve organoïde cultuur en de daaropvolgende prestaties van retrovirale transductie. Dit maakt Cre-induceerbare overexpressie of knock-down van de geleverde transgen en maakt de functionele studies die in de roman worden uitgevoerd in vitro organotypisch   modelsysteem.

Een video Protocol van retrovirale infectie in het jeugdwerk Intestinale organoïde Cultuur

Leer hoe je apicaal-out darmorganoïden genereert uit hondenstamcellen en de proliferatie beoordeelt met EdU-labeling. Deze methode verbetert de toegankelijkheid van de apicale celoppervlakte voor onderzoek.

Genereren van apicaal-out darmorganoïden en beoordeling van de proliferatiesnelheid van organoïden met behulp van EdU-labeling

Meer video's verkennen