Name: Levende cel Förster resonantie energieoverdracht beeldvorming van metabolisch gereguleerde akt-activeringsdynamiek in HepG2-cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Leer FRET-beeldvorming van metabolisch gereguleerde Akt-activatiedynamiek in levende HepG2-cellen. Deze methode biedt inzicht in insulinesignalering en kankermetabolisme voor therapeutische toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>0.25% trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>Cat#25200-056</td><td>Gebruik ijskoud PBS voor celwassing</td></tr><tr><td>15 mm glas bodem celkweekschaal</td><td>NEST</td><td>Cat#801001</td><td></td></tr><tr><td>2&nbsp;mL Nalgene cryogenic vials</td><td>Thermo Scientific</td><td>Cat#5012-0020</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Stripette Serologische Pipetten</td><td>Corning</td><td>Cat#4487</td><td></td></tr><tr><td>95% Ethanol</td><td>Kermel</td><td>Cat#C028005</td><td></td></tr><tr><td>A1 HD25/A1R HD25 confocale microscoop</td><td>Nikon</td><td>https://www.nikon.com/</td><td>Vergroting: 40&times;, Numerieke Apertuur (NA): 1.30, Pixel Dwell Time: 2.4 ms, Pixel Size: 1024</td></tr><tr><td>Ampicilline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#A9393</td><td></td></tr><tr><td>Rundserum albumine (BSA)</td><td>VWR Life Science</td><td>Cat#N208-10g</td><td></td></tr><tr><td>Corning 25&nbsp;cm2 rechthoekige kweekkolven</td><td>Corning</td><td>Cat#430639</td><td></td></tr><tr><td>Countess 3 geautomatiseerde celteller</td><td>Thermo Scientific</td><td>http://www.thermofisher.com/#AMQAX2000</td><td></td></tr><tr><td>Countess celtellingskamer slides</td><td>Thermo Scientific</td><td>http://www.thermofisher.com/#C10228</td><td></td></tr><tr><td>Digitale vortex mixers</td><td>Thermo Scientific</td><td>https://www.thermofisher.com/</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#D2650</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock buizen 1.5&nbsp;mL</td><td>Eppendorf</td><td>Cat#022363204</td><td></td></tr><tr><td>EZ-PCR mycoplasma detectiekit</td><td>Biological Industries</td><td>Cat# 20-700-20</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal runder serum, gekwalificeerd, Australië</td><td>Gibco</td><td>Cat#10099141</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Gibco</td><td>Cat#35050061</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 9</td><td>GraphPad Software</td><td>https://www.graphpad.com/</td><td></td></tr><tr><td>HepG2</td><td>National Collection of Authenticated Cell Cultures</td><td>#CSTR:19375.09.3101HUMSCSP510&nbsp; http://www.cellbank.org.cn/</td><td></td></tr><tr><td>Immersiol Type 37</td><td>Cargille Laboratories</td><td>Cat #16237</td><td></td></tr><tr><td>Insuline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#I5500-50MG</td><td>Verwarmen tot 37 &deg;C voor gebruik</td></tr><tr><td>LB Broth (1x)</td><td>Invitrogen</td><td>Cat#10855001</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Essential Medium (MEM)</td><td>Gibco</td><td>Cat#11095080</td><td>Verwarmen tot 37 &deg;C voor gebruik</td></tr><tr><td>mySPIN 12&nbsp;mini centrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td>https://www.thermofisher.com/</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop One</td><td>Thermo Scientific</td><td>https://www.thermofisher.com</td><td></td></tr><tr><td>Nikon Plan Fluor 40&times;/1.30 Olie Lens</td><td>Nikon</td><td>https://www.nikon.com/</td><td></td></tr><tr><td>NIS-Elements-AR</td><td>Nikon</td><td>https://www.nikon.com/</td><td></td></tr><tr><td>Niet-Essentiële Aminozuren (NEAA) (100x)</td><td>Gibco</td><td>Cat#11140050</td><td></td></tr><tr><td>One Shot LB Agar Plates&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>Cat#A55802</td><td></td></tr><tr><td>One Shot Stbl3 chemisch competent E.&nbsp;coli</td><td>Invitrogen</td><td>Cat#C737303</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>PARAFILM</td><td>Cat#B8R05606</td><td></td></tr><tr><td>PBS (fosfaat gebufferde zoutoplossing)</td><td>Gibco</td><td>Cat#10010023</td><td></td></tr><tr><td>pEevee-iAkt-NES (7,033&nbsp;bp)</td><td>Miura et&nbsp;al31</td><td>https://benchling.com/s/seq-q46zFYCfl0swLAun0t28/edit</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine</td><td>Gibco</td><td>Cat#15070063</td><td></td></tr><tr><td>Plasmocin profylacticum</td><td>InvivoGen</td><td>Cat#ant-mpp</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine Hydrobromide&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#P4832</td><td></td></tr><tr><td>Precision algemene doelbaden</td><td>Thermo Scientific</td><td>https://www.thermofisher.com/</td><td></td></tr><tr><td>QIAprep spin miniprep kit</td><td>QIAGEN</td><td>Cat#27106</td><td></td></tr><tr><td>SnapGene</td><td>SnapGene by Dotmatics</td><td>https://www.snapgene.com</td><td></td></tr><tr><td>Natrium Pyruvaat (100 mM)</td><td>Gibco</td><td>Cat#11360070</td><td></td></tr><tr><td>Spuitfilter unit, 0.22&nbsp;&mu;m</td><td>Millipore</td><td>Cat#SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>Tokai Hit stage top incubator</td><td>TOKAI HIT</td><td>https://www.tokaihit-livecell.com/stagetopincubator</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure DNase/RNase-vrij gedistilleerd water</td><td>Invitrogen</td><td>Cat#10977015</td><td></td></tr><tr><td>Xfect Transfectie Reagens</td><td>Takara Bio</td><td>Cat#631317</td><td></td></tr></tbody></table>

levende cel förster resonantie energieoverdracht beeldvorming van metabolisch gereguleerde akt-activeringsdynamiek in hepg2-cellen

Live-Cell F&#246;rster Resonance Energy Transfer Imaging of Metabolically Regulated Akt Activation Dynamics in HepG2 Cells

Levende cel Förster resonantie energieoverdracht beeldvorming van metabolisch gereguleerde akt-activeringsdynamiek in HepG2-cellen

Metabolically regulated Akt activation is a critical node in the insulin signaling cascade and provides valuable insights into the relationship between ...

live-cell-frster-resonance-energy-transfer-imaging-metabolically

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

FRET-gebaseerde reporters steeds vaker gebruikt voor het kinase en fosfatase activiteiten in levende cellen te volgen. Hier beschrijven we een methode voor het FRET-gebaseerde verslaggevers gebruiken om celcyclus-afhankelijke veranderingen te beoordelen in doel fosforylering.

Monitoring Kinase en fosfatase activiteiten door middel van de celcyclus door Ratiometrische FRET

Leucine rich repeat kinases 1 en 2 (LRRK1 en LRRK2) zijn multidomain eiwitten die zowel GTPase en kinase domeinen coderen en die gefosforyleerd zijn in cellen. Hier presenteren we een protocol om LRRK1 en LRRK2 label in cellen met 32p orthofosfaat, waardoor een middel om hun algemene cellulaire fosforylering te meten.

Metabole Labeling van leucine rich repeat Kinasen 1 en 2 met radioactieve fosfaat

MRP4 regelt diverse cyclisch nucleotide-afhankelijke signalering evenementen, waaronder een recent opgehelderd rol in cel migratie. We beschrijven een directe, maar veelzijdige benadering van de downstream-moleculaire doelwitten van MRP4 resulteert in de identificatie van een unieke MRP4 interactoom die een belangrijke rol in de fine tuned regulering van de fibroblast migratie speelt ontrafelen.

Methoden om-MRP4 bevattende macromoleculaire complexen studie in de verordening van fibroblast migratie

Hier presenteren we een protocol om de afbeelding cellen die groen fluorescerend eiwit-tag soort angiotensine 1a receptoren tijdens endocytose geïnitieerd door angiotensine II behandeling. Deze techniek omvat labeling lysosomen met een tweede fluorescerende marker, en vervolgens met behulp van software om de co-lokalisatie van receptor en lysosomen te analyseren in drie dimensies in de tijd.

Live-cell imaging en 3D analyse van angiotensine receptor type 1a Trafficking in getransfecteerde humane embryonale niercellen middels confocale microscopie

Strak gerichte femtosecondelaser laser kan precieze stimulatie naar cellen leveren door te worden gekoppeld aan een confocale microscopie die de real-time observatie en foto stimulatie mogelijk maakt. De foto stimulatie kan celmoleculaire gebeurtenissen activeren, waaronder ERK-signalerings traject en mitochondriale flitsen van reactieve zuurstof soorten.

Photostimulatie door Femtosecond Laser activeert extracellulaire-Signal-gereguleerde kinase (ERK) signalering of mitochondriale gebeurtenissen in doelcellen

Hematopoietische stam voorlopercellen (Hspc's) overgang van een rusttoestand naar een differentiatie toestand als gevolg van hun metabole plasticiteit tijdens de bloedvorming. Hier presenteren we een geoptimaliseerde methode voor het meten van de mitochondriale ademhaling en glycolyse van Hspc's.

Analyse van hematopoietische stam voorlopercellen metabolisme

Tijd-opgeloste Förster resonantie energieoverdracht cel-gebaseerde assay protocollen worden beschreven voor de eenvoudige, specifieke, gevoelige en robuuste kwantificering van endogene gefosforyleerde signaal transducer en activator van transcriptie (STAT) 1/3/4/5/6 eiwitten in cellysaten in een 384-well formaat.

Tijd-opgeloste Förster Resonantie Energie Transfer Assays voor meting van endogene gefosforyleerde STAT-eiwitten in menselijke cellen

Real-time cel metabole flux assay meet het zuurstofverbruik en de extracellulaire verzuringssnelheid, die overeenkomt met mitochondriale en glycolytische adenosinetrifosfaatproductie, met behulp van pH- en zuurstofsensoren. Het manuscript legt een methode uit om de energiestatus van osteoblasten en de karakterisering en interpretatie van de cellulaire bio-energetische status te begrijpen.

Real-time cell metabolic flux analyzer gebruiken om osteoblast bio-energetica te monitoren

Dit protocol beschrijft fluorescentiebeeldvorming en analyse van de endogene metabole co-enzymen, gereduceerd nicotinamide-adenine (fosfaat) dinucleotide (NAD (P) H) en geoxideerd flavine-adenine dinucleotide (FAD). Autofluorescentie beeldvorming van NAD(P)H en FAD biedt een labelvrije, niet-destructieve methode om het cellulaire metabolisme te beoordelen.

Autofluorescentie beeldvorming om cellulair metabolisme te evalueren

We presenteren een protocol om metabole activiteiten in cellen gereguleerd door aminozuren direct te visualiseren met behulp van deuteriumoxide (zwaar water D2O) gesondeerde gestimuleerde Raman-verstrooiing (DO-SRS) microscopie, die is geïntegreerd met twee-foton excitatie fluorescentiemicroscopie (2PEF).

Bioorthogonale chemische beeldvorming van celmetabolisme gereguleerd door aromatische aminozuren

Dit protocol integreert een op maat gemaakt bioreactorsysteem met gehyperpolariseerde ¹³C NMR-spectroscopie om het real-time pyruvaatmetabolisme in levende cellen te meten, waardoor de reproduceerbaarheid en kinetische nauwkeurigheid voor metabole studies en toepassingen voor het screenen van geneesmiddelen worden verbeterd.

Real-time metabole detectie in levende cellen met behulp van gehyperpolariseerde 13C NMR

Leer FRET-beeldvorming van metabolisch gereguleerde Akt-activatiedynamiek in levende HepG2-cellen. Deze methode biedt inzicht in insulinesignalering en kankermetabolisme voor therapeutische toepassingen.

Levende cel Förster resonantie energieoverdracht beeldvorming van metabolisch gereguleerde akt-activeringsdynamiek in HepG2-cellen (Video) | JoVE Journal

Levende cel Förster resonantie energieoverdracht beeldvorming van metabolisch gereguleerde akt-activeringsdynamiek in HepG2-cellen

Meer video's verkennen