Name: En gezicht Cryosectie van het netvlies van de muis voor hoogdimensionale ruimtelijke moleculaire analyse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-08T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Ontdek een cryosectiemethode voor het muizennetvlies om ruimtelijke transcriptomics toe te passen. Deze techniek behoudt de laminaire structuur en maakt volledige mapping van retinale ganglioncellen mogelijk voor neurowetenschappelijk onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Baden, T., Euler, T., Berens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+retinal+basis+of+vision+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Understanding the retinal basis of vision across species.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (1), 5-20 (2020).</li>
<li>Heukamp, A. S., Warwick, R. A., Rivlin-Etzion, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographic+variations+in+retinal+encoding+of+visual+space%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Topographic variations in retinal encoding of visual space.</a> Annu Rev Vis Sci. 6, 237-259 (2020).</li>
<li>Collin, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+web-based+archive+for+topographic+maps+of+retinal+cell+distribution+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Optom%22%5BJournal%5D)">A web-based archive for topographic maps of retinal cell distribution in vertebrates.</a> Clin Exp Optom. 91 (1), 85-95 (2008).</li>
<li>Budoff, S. A., Poleg-Polsky, A. GraSP gene targets to hierarchically infer sub-classes with CuttleNet. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBudoff%2C+SA+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2024).</li>
<li>Rheaume, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+transcriptome+profiling+of+retinal+ganglion+cells+identifies+cellular+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Single cell transcriptome profiling of retinal ganglion cells identifies cellular subtypes.</a> Nat Commun. 9 (1), 2759(2018).</li>
<li>Tran, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+profiles+of+retinal+ganglion+cells+differing+in+resilience+to+injury+reveal+neuroprotective+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Single-cell profiles of retinal ganglion cells differing in resilience to injury reveal neuroprotective genes.</a> Neuron. 104 (6), 1039-1055.e12 (2019).</li>
<li>Yan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+retinal+cell+atlas%3A+Molecular+identification+of+over+sixty+amacrine+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mouse retinal cell atlas: Molecular identification of over sixty amacrine cell types.</a> J Neurosci. 40 (27), 5177-5195 (2020).</li>
<li>Bleckert, A., Schwartz, G. W., Turner, M. H., Rieke, F., Wong, R. O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+space+is+represented+by+nonmatching+topographies+of+distinct+mouse+retinal+ganglion+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Visual space is represented by nonmatching topographies of distinct mouse retinal ganglion cell types.</a> Curr Biol. 24 (3), 310-315 (2014).</li>
<li>Holmgren, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+pursuit+behavior+in+mice+maintains+the+pursued+prey+on+the+retinal+region+with+least+optic+flow%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Visual pursuit behavior in mice maintains the pursued prey on the retinal region with least optic flow.</a> eLife. 10, e70838(2021).</li>
<li>Tapia, M. L., Nascimento-dos-Santos, G., Park, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtype-specific+survival+and+regeneration+of+retinal+ganglion+cells+in+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Subtype-specific survival and regeneration of retinal ganglion cells in response to injury.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 956279(2022).</li>
<li>Berchuck, S. I., Mukherjee, S., Medeiros, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+rates+of+progression+and+predicting+future+visual+fields+in+glaucoma+using+a+deep+variational+autoencoder%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Estimating rates of progression and predicting future visual fields in glaucoma using a deep variational autoencoder.</a> Sci Rep. 9 (1), 18113(2019).</li>
<li>de Gainza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+trajectory+of+glaucoma+progression+in+2-dimensional+structural-functional+space%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">The trajectory of glaucoma progression in 2-dimensional structural-functional space.</a> Ophthalmol Glaucoma. 3 (6), 466-474 (2020).</li>
<li>Choi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+of+the+mouse+retina+at+single+cell+resolution+by+MERFISH%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial organization of the mouse retina at single cell resolution by MERFISH.</a> Nat Commun. 14 (1), 4929(2023).</li>
<li>Kremers, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+STED+imaging+in+the+inner+and+outer+whole-mount+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution STED imaging in the inner and outer whole-mount mouse retina.</a> Front Ophthalmol. 3, 1126338(2023).</li>
<li>Simon, P., Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+methods+of+retrograde+staining%2C+layer-separation+and+viscoelastic+cell+stabilization+to+isolate+retinal+ganglion+cells+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Combined methods of retrograde staining, layer-separation and viscoelastic cell stabilization to isolate retinal ganglion cells in adult rats.</a> J Neurosci Methods. 83 (2), 113-124 (1998).</li>
<li>Lindqvist, N., Vidal-Sanz, M., Hallböök, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+RT-PCR+analysis+of+tyrosine+kinase+receptor+expression+in+adult+rat+retinal+ganglion+cells+isolated+by+retinal+sandwiching%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">Single cell RT-PCR analysis of tyrosine kinase receptor expression in adult rat retinal ganglion cells isolated by retinal sandwiching.</a> Brain Res Brain Res Protoc. 10 (2), 75-83 (2002).</li>
<li>Fontaine, V., Kinkl, N., Sahel, J., Dreyfus, H., Hicks, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+purified+rat+photoreceptors+in+vitro+is+stimulated+directly+by+fibroblast+growth+factor-2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Survival of purified rat photoreceptors in vitro is stimulated directly by fibroblast growth factor-2.</a> J Neurosci. 18 (23), 9662-9672 (1998).</li>
<li>Sandu, C., Hicks, D., Felder-Schmittbuhl, M. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+photoreceptor+circadian+oscillator+strongly+relies+on+lighting+conditions%3A+Molecular+clock+in+rat+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rat photoreceptor circadian oscillator strongly relies on lighting conditions: Molecular clock in rat photoreceptors.</a> Eur J Neurosci. 34 (3), 507-516 (2011).</li>
<li>Jaeger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+organization+of+the+rodent+retina+involves+strongly+coupled%2C+layer-specific+oscillators%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Circadian organization of the rodent retina involves strongly coupled, layer-specific oscillators.</a> FASEB J. 29 (4), 1493-1504 (2015).</li>
<li>Hecht, R. M., Shi, Q., Garrett, T. R., Sivyer, B., Morgans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Split+retina+as+an+improved+flatmount+preparation+for+studying+inner+nuclear+layer+neurons+in+vertebrate+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Split retina as an improved flatmount preparation for studying inner nuclear layer neurons in vertebrate retina.</a> J Vis Exp. (203), e65757(2024).</li>
<li>Budoff, S. A., Poleg-Polsky, A. A Complete spatial map of mouse retinal ganglion cells reveals density and gene expression specializations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBudoff%2C+SA+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ames&prime; Medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1420-10X1L</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Beadsmith Thread Zap, Thread Burner</td><td>The Beadsmith Store</td><td>7.90524E+11</td><td>Alternatieve cauterisatiemiddelen mogen worden gebruikt</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>cm1950</td><td>Belangrijke overwegingen zijn apart regelbare volume versus stagestemperatuur.</td></tr><tr><td>Dry Ice</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Fine Science Tools Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools 1129500</td><td>NC9889584</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Fisher Healthcare Tissue-Plus O.C.T. Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Fisherbrand High Precision Straight Slender Fine Point Tweezers/Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-127</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Fisherbrand Standard Dissecting Scissors</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-951-20</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-246</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Integra Miltex Noyes Iris Scissors</td><td>Integra Miltex 181510</td><td>12-460-278</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Olympus IX81 spinning disk epifluorescence microscope</td><td></td><td></td><td>Voor figuur 7</td></tr><tr><td>RNAscope HiPlex</td><td>ACDBio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rectangular Cover Glasses</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541-033</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Sodium bicarbonate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6014-25G</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nunc Glass Bottom Dishes</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-567-400</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>World Precision Instrument Precision Stereo Zoom Trinocular Microscope (IV) on Boom Stand</td><td>World Precision Instrument PZMTIVBS</td><td>50-253-8607</td><td>Specifiek merk niet belangrijk</td></tr><tr><td>Zeiss Axio Imager.M2 epifluorescence microscope&nbsp;</td><td></td><td></td><td>Optisch sectioneren ingeschakeld (voor figuur 8)</td></tr></tbody></table>

en gezicht cryosectie van het netvlies van de muis voor hoogdimensionale ruimtelijke moleculaire analyse

En face Cryosectioning of Mouse Retina for High-dimensional Spatial Molecular Analysis

En gezicht Cryosectie van het netvlies van de muis voor hoogdimensionale ruimtelijke moleculaire analyse

The complex laminar structure of the retina presents significant challenges for comprehensive spatial molecular mapping. Current techniques for ...

en-face-cryosectioning-mouse-retina-for-high-dimensional-spatial

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De dissectie techniek illustreert enucleatie van de muis oog voor weefsel fixatie te fenotypering presteren in high-throughput-schermen.

Mouse Eye Enucleatie voor Remote High-throughput Fenotypering

Source: Wang, Z., et al. Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates a technique for in vivo retinal imaging using two-photon microscopy. Anesthetized mice are prepared for imaging by securing their heads, Applying eye lubricant, and placing a coverslip over the eye. Retinal ganglion cells (RGCs) expressing fluorescent proteins are first visualized using epifluorescence for alignment. Finally, two-photon imaging is employed,...

Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Hier beschrijven we een protocol voor een reproduceerbare laser vangt microdissection (LCM) voor het isoleren van trabecular gevlochten (TM) voor downstream RNA analyse. De mogelijkheid om het analyseren van wijzigingen in genexpressie in het Vertaalgeheugen zal helpen bij het begrijpen van de moleculaire mechanismen van TM-gerelateerde oogbeschadigingen en/of ziekten.

Laser vangt Microdissection voor zeer zuivere Trabecular Zitschalen van muis ogen gen expressie p.a.

We tonen drie verschillende weefsel voorbereiding technieken voor immunohistochemische visualisatie van rat retinale microvasculaire pericytes, dat wil zeggen, cryo-secties, geheel-mounts en hypotone isolatie van de vasculaire netwerk.

Netvlies Cryo-secties, geheel-Mounts en hypotone geïsoleerde therapieën voorbereidingen voor immunohistochemische visualisatie van microvasculaire Pericytes

Dit rapport beschrijft uitgebreide methoden voor de voorbereiding van bevroren muis Retina secties voor Immunohistochemistry (IHC).  Beschreven methoden omvatten dissectie van de oculaire posterior Cup, Paraformaldehyde fixatie, inbedding in optimale snij-temperatuur (OCT) media en weefsel oriëntatie, sectioneren en immunokleuring.

Voorbereiding van de muis netvlies Cryo-profielen voor Immunohistochemistry

In vivo beeldvorming is een krachtig hulpmiddel voor de studie van biologie in gezondheid en ziekte. Dit protocol beschrijft transpupillaire beeldvorming van het netvlies van de muis met een standaard microscoop met twee fotonen. Het demonstreert ook verschillende in vivoimaging-methoden om fluorescerend meerdere cellulaire cohorten van het netvlies te labelen.

Transpupillaire twee-fotonen in vivo beeldvorming van het netvlies van de muis

Dit protocol presenteert twee technieken om de subcellulaire compartimenten van muizenstaaffotoreceptoren te isoleren voor eiwitanalyse. De eerste methode maakt gebruik van levend retinae en cellulosefilterpapier om de buitenste segmenten van de staaf te scheiden, terwijl de tweede gebruik maakt van gelyofiliseerd netvlies en plakband om de binnenste en buitenste segmentlagen van de staaf weg te pellen.

Twee peelingmethoden voor de isolatie van fotoreceptorcelcompartimenten in het netvlies van de muis voor eiwitanalyse

Dit protocol schetst de gedetailleerde stappen van het pre-embedden van immuno-elektronenmicroscopie, met een focus op het verkennen van synaptische circuits en eiwitlokalisatie in het netvlies.

Onderzoek naar retinale circuits en moleculaire lokalisatie door pre-embedding immuno-elektronenmicroscopie

De pericyten in het retinale vaatstelsel werden onderzocht door middel van immunofluorescerende kleuring met van bloedplaatjes afgeleide groeifactorreceptor β na retro-orbitale injectie van fluorescerend tomatenlectine. Het gelabelde netvlies werd verder behandeld met de weefselopruimingsmethode en in zijn geheel gemonteerd voor het visualiseren van de driedimensionale beelden van pericyten rond het netvliesvaatstelsel onder een confocale microscoop.

3D-visualisatie van retinale vasculaire pericyten bij muizen door immunokleuring 

Er wordt een protocol beschreven voor het voorbereiden van retinale cryosecties van muizen en het uitvoeren van immunokleuring op fotoreceptoren. Dit artikel stelt onderzoekers in staat om consequent bevroren secties van het netvlies van muizen te produceren met goed bewaarde morfologie en hoogwaardige immunokleuringsresultaten.

Cryosectie en immunokleuring van het netvlies van de muis

Ontdek een cryosectiemethode voor het muizennetvlies om ruimtelijke transcriptomics toe te passen. Deze techniek behoudt de laminaire structuur en maakt volledige mapping van retinale ganglioncellen mogelijk voor neurowetenschappelijk onderzoek.

En gezicht Cryosectie van het netvlies van de muis voor hoogdimensionale ruimtelijke moleculaire analyse

Meer video's verkennen