Name: Generatie van monoklonale culturen uit met Wolbachia geïnfecteerde Drosophila melanogaster JW18-cellijn (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-27T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Leer hoe je monoklonale JW18-cellijnen genereert om Wolbachia-fenotypen te bestuderen in homogene populaties van Drosophila melanogaster. Dit protocol minimaliseert experimentele variabiliteit en verbetert reproduceerbaarheid.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro;m syringe fliter&nbsp;&nbsp;</td><td>TPP</td><td>99722</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>10x Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>70011044</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>12 or 18 mm round coverglass&nbsp;</td><td>Elk merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL Falcon tubes</td><td>Genoplast</td><td>601052</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>24-well plate</td><td>CytoOne</td><td>CC7682-7524</td><td>Geschikt voor weefselkweek</td></tr><tr><td>5 &micro;m syringe filter</td><td>Whatman</td><td>10462000</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>6-well plate</td><td>CytoOne</td><td>CC7682-7506</td><td>Geschikt voor weefselkweek</td></tr><tr><td>96-well plate</td><td>CytoOne</td><td>CC7682-7596</td><td>Geschikt voor weefselkweek</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>J66501.30</td><td></td></tr><tr><td>Cell culture flask, 25 cm2</td><td>Greiner Bio-one</td><td>391-3103</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Cell scrapers&nbsp;</td><td>Greiner Bio-one</td><td>391-3010</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Clear nail polish&nbsp;</td><td>Elk merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CryoPure vials</td><td>Sarstedt</td><td>72.379</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>DMSO, cell culture grade</td><td>Merck</td><td>D2650-100ML</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>DreamTaq PCR Master Mix</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>K1081</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Merck</td><td>324503-100GM</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Electrophoresis Power Supply</td><td>Merck</td><td>PS 251-2</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf&nbsp;Concentrator Plus</td><td>Merck</td><td>EP5305000509</td><td>Een vacuümconcentrator van elk merk kan in plaats daarvan worden gebruikt.&nbsp;</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck</td><td>1009861000</td><td></td></tr><tr><td>EVOS M5000 Imaging System</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AMF5000</td><td>Een omgekeerd microscoop van elk merk kan worden gebruikt om de voortgang van de klonering te volgen. Een fluorescentiemicroscoop is vereist om FISH te visualiseren.&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Merck</td><td>F9665</td><td>Hitte-geïnactiveerd</td></tr><tr><td>Formaldehyde&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>047377.9L</td><td></td></tr><tr><td>Formamide&nbsp;</td><td>Merck</td><td>F7503-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gel electrophoresis tanks</td><td>Cleaver Scientific</td><td>MSMIDI</td><td></td></tr><tr><td>Gel Imager</td><td>BioRad</td><td>12009077</td><td>GelDoc Go Gel Imaging System</td></tr><tr><td>GeneRuler 100 bp DNA Ladder</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>SM0243</td><td></td></tr><tr><td>Heating Block</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>88870005</td><td></td></tr><tr><td>Herasafe 2025 Class II Biological Safety Cabinet</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>51033314</td><td>Een biologische veiligheidscabinet van elk merk kan worden gebruikt zolang het een steriele omgeving binnenin handhaaft.&nbsp;</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 Solution (20 mM) 5 mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62249</td><td>Bewaar in het donker.</td></tr><tr><td>Hydrochloric acid</td><td>Merck</td><td>258148-2.5L</td><td></td></tr><tr><td>Integra Biosciences Corp&nbsp;PIPETBOY acu 2 Pipet Aid</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0085686</td><td>Een serologische pipetcontrole van elk merk kan worden gebruikt.&nbsp;</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Merck</td><td>I9516-1L</td><td></td></tr><tr><td>Laboratory freezer</td><td>&nbsp;Liebherr&nbsp;</td><td>LGUex 1500 MediLine</td><td>Elke vriezer die in staat is om een constante temperatuur te handhaven, is geschikt.&nbsp;</td></tr><tr><td>Liquid nitrogen tank</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>CY50985</td><td></td></tr><tr><td>Microscope slides</td><td>Merck</td><td>CLS294875X25-72EA</td><td></td></tr><tr><td>Molecular grade water</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multichannel pipette</td><td>Eppendorf</td><td>3125000036</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Peqlab</td><td>ND-1000</td><td></td></tr><tr><td>Neubauer Hemocytometer</td><td>Merck</td><td>BR717810-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm&nbsp;M Sealing Film</td><td>Merck</td><td>HS234526B-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Peltier-cooled incubator</td><td>Memmert</td><td>IPP55plus</td><td>Elke incubator die in staat is om een constante temperatuur van 25°C te handhaven, is geschikt. Er is geen CO2-regeling vereist voor de JW18-cellijn of zijn klonen.&nbsp;</td></tr><tr><td>Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol (25:24:1)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>327115000</td><td></td></tr><tr><td>Pipette set</td><td>Eppendorf</td><td>EP2231300008</td><td></td></tr><tr><td>Potassium acetate</td><td>Merck</td><td>P1190-500G</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Quasar&nbsp;670-tagged 16s rRNA FISH probe&nbsp;set</td><td>Biosearch Technologies</td><td></td><td>Op maat gemaakt, de sequenties van de sondes zijn te vinden in Tabel 1.&nbsp;</td></tr><tr><td>Refrigerated MicroCentrifuge</td><td>Labnet</td><td>C2500-R</td><td></td></tr><tr><td>rpl32 primer forward 5'-CCGCTTCAAGGGACAGTATC-3'</td><td>Eurofins genomics</td><td></td><td>Op maat gemaakt op basis van de referentie die in het artikel wordt geciteerd</td></tr><tr><td>rpl32 primer reverse 5'-CAATCTCCTTGCGCTTCTTG-3'</td><td>Eurofins genomics</td><td></td><td>Op maat gemaakt op basis van de referentie die in het artikel wordt geciteerd</td></tr><tr><td>SDS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AM9823</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Serological pipettes</td><td>Corning</td><td>357771</td><td></td></tr><tr><td>Shields and Sang M3 Insect Medium</td><td>Merck</td><td>S8398</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Stellaris RNA FISH Hybridization Buffer&nbsp;&nbsp;</td><td>Biosearch Technologies</td><td>SMF-HB1-10</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Stellaris RNA FISH Wash Buffer A&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Biosearch Technologies</td><td>SMF-WA1-60</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Stellaris RNA FISH Wash Buffer B&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Biosearch Technologies</td><td>SMF-WB1-20</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Sterile Reagent Reservoirs&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>8094</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>TAE buffer</td><td>Merck</td><td>1061741000</td><td>1x&nbsp

generatie van monoklonale culturen uit met wolbachia geïnfecteerde drosophila melanogaster jw18-cellijn

Generation of Monoclonal Cultures from Wolbachia-infected Drosophila melanogaster JW18 Cell Line

Generatie van monoklonale culturen uit met Wolbachia geïnfecteerde Drosophila melanogaster JW18-cellijn

Cell lines are widely used models in biological research. They are particularly useful in studies of intracellular bacteria that cannot be efficiently ...

generation-monoclonal-cultures-from-wolbachia-infected-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Drosophila hemocytes verspreiden over het geheel van de zich ontwikkelende embryo. Dit protocol laat zien hoe te monteren en het imago van deze migraties met behulp van embryo's met fluorescent gelabelde hemocytes.

Live-beeldvorming van Drosophila melanogaster Embryonale Hemocyte Migraties

Wij bieden een gedetailleerd protocol voor het bereiden van primaire cellen los...

Primaire celculturen van Drosophila Gastrula Embryo&#39;s

Drosophila melanogaster is een uitstekend modelorganisme voor het bestuderen van aangeboren immuunsystemen en de fysiologische gevolgen van infectie en ziekte. Dit protocol beschrijft hoe robuuste en kwantitatief herhaalbare bacteriële infecties aan D. melanogaster kunnen worden toegediend, en hoe vervolgens de ernst van de infectie kan worden gemeten en de immuunrespons van de gastheer kan worden gekwantificeerd.

Systemische bacteriële infectie en afweer Phenotypes in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Een methode voor het kweken van Drosophila melanogaster onder axenic en gnotobiotische voorwaarden wordt gepresenteerd. Fly embryo's worden dechorionated in natriumhypochloriet, aseptisch in steriele voeding en grootgebracht in gesloten containers. Inenten van voeding en embryo's met bacteriën leidt tot gnotobiotische verenigingen, en bacteriële aanwezigheid wordt bevestigd door plating whole-body Drosophila homogenaten.

Het grootbrengen de fruitvlieg<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Onder Axenische en gnotobiotische voorwaarden

Analyse van de structureel-functionele relatie van de mitochondriën is vereist voor een grondig begrip van de regulerende mechanismen van de functionele werking van mitochondriën. Specifieke methoden voor het bestuderen van de structuur en functie van mitochondriën in levende en gefixeerde Drosophila eierstokken worden in dit artikel beschreven en gedemonstreerd.

Het bestuderen van mitochondriale structuur en functie in Drosophila Eierstokken

Deze methode laat zien hoe om te visualiseren pathogen invasie in insect cellen met driedimensionale (3D) modellen. Hemocytes van Drosophila larven waren besmet met virale of bacteriële pathogenen, ex vivo of in vivo. Besmette hemocytes werden vervolgens vast en gekleurd voor imaging met een confocal microscoop en de daaropvolgende 3D cellulaire wederopbouw.

Winning van Hemocytes van Drosophila melanogaster larven voor microbiële infectie en analyse

Dit protocol wordt beschreven hoe om virale infectie in vivo bij Drosophila melanogaster met behulp van de methode van de nano-injectie en de basistechnieken voor het analyseren van virus-gastheer interactie.

Oprichting van virale infectie en analyse van Host-Virus interactie bij Drosophila Melanogaster

Drosophila cellijnen zijn belangrijke reagentia voor zowel fundamenteel als biomedisch onderzoek. Dit artikel bevat de protocollen voor ontdooien, subcultuur en cryopreservatie van veelgebruikte Drosophila cellijnen aan onderzoekers helpen om het gebruik van deze reagentia in hun onderzoek op te nemen.

Ontdooien, kweken en Cryopreserving van Drosophila cellijnen

Drosophila melanogaster volwassen vliegen zijn uitgebreid gebruikt als modelorganismen om de moleculaire mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan antimicrobiële aangeboren immuunresponsen van de gastheer en microbiële infectiestrategieën. Om het D. melanogaster larvestadium als aanvullend of alternatief modelsysteem te promoten, wordt een larvale injectietechniek beschreven.

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

Hier bieden we een gedetailleerd protocol om live beeldvorming uit te voeren van de asymmetrische deling van germinale stamcellen (GSC's) in de Drosophila ovarium-niche. We gebruiken een transgene lijn die ubiquitair een groen fluorescent eiwit (GFP) tot expressie brengt, een fusie van het spectrosoom-eiwit Par-1.

Uitgebreide live beeldvorming van vrouwelijke Drosophila melanogaster kiembaanstammecellen niches

Leer hoe je monoklonale JW18-cellijnen genereert om Wolbachia-fenotypen te bestuderen in homogene populaties van Drosophila melanogaster. Dit protocol minimaliseert experimentele variabiliteit en verbetert reproduceerbaarheid.

Generatie van monoklonale culturen uit met Wolbachia geïnfecteerde Drosophila melanogaster JW18-cellijn

Meer video's verkennen