Name: Wijdverbreide transductie van neocorticale neuronen van muizen door subarachnoïdale injectie van AAV2 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Leer een nieuwe methode voor wijdverbreide transductie van neocorticale neuronen bij muizen via subarachnoïdale injectie van AAV2. Deze techniek vergroot het infectiegebied bijna viervoudig en behoudt hersenweefsel voor opnames.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 &micro;L Gastight Syringe Model 1701 RN (5 uL 75 RN Hamilton microsyringe)</td><td>Hamilton Company</td><td>Part/REF # 7634-01, Hamilton of cat nr. HAM7634-01, Merck</td><td></td></tr><tr><td>33 G RN needle, point style 3</td><td>Hamilton Company</td><td>Part/REF # 7803-05, Hamilton</td><td></td></tr><tr><td>Binocular Microscope</td><td>Nikon of Micromed</td><td>Model MC-4 ZOOM</td><td></td></tr><tr><td>Cerna-based laser scanning confocal microscope</td><td>ThorLabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cold light source</td><td>RWD</td><td>Model 76312</td><td></td></tr><tr><td>Leica VT1000 S Vibrating blade microtome</td><td>Leica Biosystems</td><td>76001-014</td><td></td></tr><tr><td>Low-Flow Anesthesia System with starter kit</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>13-005-111 (Model SomnoSuite)</td><td></td></tr><tr><td>Mechanical Pipette 0.1 &ndash; 2.5 &micro;L Eppendorf Research plus</td><td>Eppendorf</td><td>3123000012</td><td></td></tr><tr><td>Mechanical Pipette 10 &ndash; 100 &micro;L Eppendorf Research plus</td><td>Eppendorf</td><td>3123000047</td><td></td></tr><tr><td>Mice Shaver</td><td>RWD</td><td>Model CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>Microdrill with drill bits (0.5 mm, round)</td><td>RWD</td><td>78001, 78040</td><td></td></tr><tr><td>or Desctop Digital Stereotaxic Instrument, Mouse anesthesia Mask, Mouse ear bars (60 Deg)</td><td>RWD</td><td>Models 68027, 68665, 68306</td><td></td></tr><tr><td>Air Compressor</td><td>Bambi</td><td>BB8</td><td></td></tr><tr><td>Single Channel Manual Pipette 0.5-10 &micro;L</td><td>RAINN</td><td>17008649</td><td></td></tr><tr><td>Small Animal Stereotaxic Instrument</td><td>KOPF</td><td>Model 962</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic Injector</td><td>Stoelting</td><td>10-000-004</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Instruments (Tools)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>30 G dental needle (Ni-pro)</td><td>Biodent Co. Ltd.</td><td></td><td>Om de dura te spleet</td></tr><tr><td>Bone scraper</td><td>Fine Science Tools</td><td>10075-16</td><td></td></tr><tr><td>Bone pliers</td><td>Fine Science Tools</td><td>16025-14</td><td>Om het craniale bot te verwijderen</td></tr><tr><td>Curved spatulae</td><td>Mozhaisk Medical Supplies Factory</td><td></td><td>Om de hersenen uit de hersenpan te verwijderen</td></tr><tr><td>Dental bur</td><td>DRENDEL + ZWEILING</td><td></td><td>Voor craniotomie; Vorm: peervormig/cilinder met ronde uiteinden/rond; Tip Diameter: 0,55-0,8 mm diameter</td></tr><tr><td>Needle holder (Halsey Micro Needle Holder)</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene Surgical Suture of Surgical Suture Vicryl (5-0, absorbable)</td><td>Walter Products (Ethicon)</td><td>S139044 (W9442)</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel handle (#3) with scalpel blades (#11)</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12, 10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Scissors (Extra Narrow Scissors)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14088-10</td><td>om de huid te snijden</td></tr><tr><td>Scissors (Fine Scissors)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14094-11</td><td>om de hechting te snijden</td></tr><tr><td>Surgical suture PROLENE (Polyproptlene)</td><td>Ethicon (Johnson &amp; Johnson)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tweezers (Forceps #5)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Tweezers (Polished Inox Forceps)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11210-20</td><td></td></tr><tr><td>Disposables</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL insulin syringe</td><td>SITEKMED</td><td></td><td>Om vaseline olie in een microsyringe te laden, om medicijnen toe te dienen</td></tr><tr><td>Cell Culture Plate</td><td>SPL Life Science</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cotton swabs</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cover Glasses</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545E</td><td></td></tr><tr><td>Insulin syringe needle (27 G)</td><td>SITEKMED</td><td></td><td>Om puin uit een gat te verwijderen (craniotomy)</td></tr><tr><td>Lint-free wipes CLEANWIPER</td><td>NetLink</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope Slides</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Paper towels</td><td>Luscan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>StatLab</td><td>STLPM996</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Surgical Gloves</td><td>Dermagrip</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterile Syringe Filter (0.2 &mu;m)</td><td>Corning</td><td>431229</td><td></td></tr><tr><td>Drugs/Chemicals (Reagents)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% buffered formalin of 4% paraformaldehyde</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>J61899.AK</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol solution of iodine (5%))</td><td>Renewal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic ointment Baneocin (bacitracin + neomycin)</td><td>Sandoz</td><td></td><td>Antibacterieel middel voor uitwendig gebruik</td></tr><tr><td>Aqua Polymount</td><td>Poly-sciences</td><td>18606-20</td><td></td></tr><tr><td>Carbomer Eye Gel Vidisic (Ophthalmic gel)</td><td>BAUSCH+LOMB (Santen)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carboxylate-Modified FluoSphere Microspheres (red)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F-8801</td><td></td></tr><tr><td>Dexamethasone (4 mg/mL)</td><td>Ellara (KRKA)</td><td></td><td>Synthetisch glucocorticoïd</td></tr><tr><td>Distilled H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (70%)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexoprofen 2.5% (Ketoprofen)</td><td>VIC</td><td></td><td>Nonsteroidal Anti-Inflammatory Drugs (NSAIDs)</td></tr><tr><td>Glucose solution 5%</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed, Alexa Fluor 546</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Karizoo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>lidocaine solution (2 % / 4%)</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal Goat Serum (NGS)</td><td>Abcam</td><td>ab7481</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Eco-servis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rabbit Anti-Parvalbumin Antibody</td><td>Merck Millipore</td><td>AB15736</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit Recombinant Monoclonal anti-Calbindin antibody</td><td>Abcam</td><td>ab108404</td><td></td></tr><tr><td>Saline (0.9% NaCl in H2O)</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>50-178-1844</td><td></td></tr><tr><td>Vaseline oil</td><td>Genel</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

wijdverbreide transductie van neocorticale neuronen van muizen door subarachnoïdale injectie van aav2

Widespread Transduction of Mouse Neocortical Neurons by Subarachnoid Injection of AAV2

Wijdverbreide transductie van neocorticale neuronen van muizen door subarachnoïdale injectie van AAV2

Recombinant adeno-associated viruses are a flexible and powerful tool for the delivery and expression of various genes of interest in many areas of ...

widespread-transduction-mouse-neocortical-neurons-subarachnoid

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Hier presenteren we de intracraniële injectie van AAV-vectoren voor TL-etikettering van neuronen en glia in de visuele cortex.

Intracraniële Injectie van adeno-geassocieerde virale vectoren

Source: Li, D., et al. Direct Intrathecal Injection of Recombinant Adeno-associated Viruses in Adult Mice. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the procedure for the intrathecal injection of adeno-associated viruses (AAV) into the cerebrospinal fluid (CSF) of an awake mouse, covering syringe preparation, spinal alignment, and precise needle insertion. This method validates targeted gene delivery, supporting its potential for CNS therapies.

Intrathecal Delivery of Viruses in a Mouse Model for Treating Central Nervous System Diseases

Virale vectoren kunnen gerichte genetische manipulatie. We tonen een werkwijze voor voorwaardelijke genexpressie of ablatie in de muis ruggenmerg, met stereotactische injectie van een virale vector in de dorsale hoorn, een prominente plaats van synaptische contacten tussen primaire somatosensorische afferenten en neuronen van het centrale zenuwstelsel.

Stereotactische injectie van een virale vector voor voorwaardelijke Gene Manipulation in de muis Spinal Cord

De afgelopen 15 jaar hebben honden-adenovirus type 2 (CAV2)-afgeleide vectoren hun efficiëntie bewezen om cellen in vitro en in vivo te transduceren en worden ze veel gebruikt voor vaccinatie en gentherapie. Hier beschrijven we een procedure om CAV2-vectoren te construeren, produceren en zuiveren, wat leidt tot virale suspensies met een hoog titer.

Productie en zuivering van niet-Replicatieve Canine adenovirus type 2 afgeleide vectoren

Hier demonstreren we een techniek voor wijdverspreide neuronale transductie door intraventriculaire injectie van adeno-geassocieerd virus in de neonatale muisbrein. Deze methode biedt een snelle en eenvoudige manier om levenslange expressie van vireel aangeboden transgenen te bereiken.

Intracerebroventriculaire Viral Injectie van de Neonatale Mouse Brain voor persistent en wijdverbreide Neuronale Transduction

Deze video toont de craniotomieprocedure die chronische beeldvorming van neuronen in de retrospleniale cortex van muizen mogelijk maakt met in vivo twee-foton microscopie in de Thy1-GFP transgene lijn. Deze benadering wordt gecombineerd met injectie van mCherry-expresserend adeno-geassocieerd virus in de dorsale hippocampus. Deze technieken maken langdurige monitoring van ervaringsafhankelijke structurele plasticiteit in RSC mogelijk.

Simultane twee-foton<em&gt; In Vivo</em&gt; Beeldvorming van Synaptic In- en Postsynaptische Doelen op Mouse retrospleniale Cortex

Het doel van de huidige studie was het ontwikkelen en valideren van de kracht en de veiligheid van de lever-adeno-geassocieerde virus 9 (AAV9) -gemedieerde genafgifte door gebruik te maken van een nieuwe subpiale genafgifte techniek bij volwassen muizen.

Subpiaal Adeno-geassocieerde Virus 9 (AAV9) Vector Levering in Volwassene Muizen

Intraspinal injectie van recombinase afhankelijk recombinante adeno-associated virus (rAAV) kan worden gebruikt om te manipuleren alle genetisch gelabelde celtype in het ruggenmerg. Hier beschrijven we hoe transduce van neuronen in de dorsale Hoorn van het lumbale ruggenmerg. Deze techniek maakt functionele ondervraging van het subtype gemanipuleerde neuron.

Adeno-associated Virus-gemedieerde transgenic expressie in genetisch gedefinieerde neuronen van het ruggenmerg

Hier presenteren we een directe intrathecale injectietechniek gebruik van 1% lidocaïne waterstofchloride in een virale oplossing om te zorgen voor efficiënte adeno-associated virus levering aan kleine dieren en een scoresysteem te voorspellen transductie efficiëntie in het midden zenuwstelsel volgens de graad van tijdelijke zwakte veroorzaakt door lidocaïne.

Directe intrathecale injectie van recombinante Adeno-geassocieerde virussen in volwassen muizen

Dit protocol demonstreert een nieuwe methode voor het toepassen van gentherapieën op subpopulaties van cellen bij neonatale ratten in de postnatale leeftijd van 5-10 dagen door een anterograde chemogenetische modifier in de somatomotorische cortex en een retrograde transporteerbaar Cre-recombinase in het cervicale ruggenmerg te injecteren.

Gericht op het corticospinale kanaal bij neonatale ratten met een dubbel-virale vector met behulp van gecombineerde hersen- en wervelkolomchirurgie

Dit protocol beschrijft de viraal-gemedieerde ectopische expressie van Neurod1 na corticale ischemische beroerte. Neurod1 wordt toegediend (1) met behulp van het Cre-Flex AAV-systeem bij wildtype muizen tijdens de subacute fase na een beroerte (7 dagen) en (2) met behulp van een enkele AAV-vector in voorwaardelijke reportermuizen tijdens de chronische fase na een beroerte (21 dagen).

AAV-systemen en muismodellen voor het onderzoeken van ectopische expressie van neurod1 in getransduceerde cellen op subacute en chronische tijden na ischemische beroerte

Leer een nieuwe methode voor wijdverbreide transductie van neocorticale neuronen bij muizen via subarachnoïdale injectie van AAV2. Deze techniek vergroot het infectiegebied bijna viervoudig en behoudt hersenweefsel voor opnames.

Wijdverbreide transductie van neocorticale neuronen van muizen door subarachnoïdale injectie van AAV2

Meer video's verkennen