Name: Keuze en No-keuze Assays voor het testen van de weerstand van A. thaliana te kauwen Insecten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: Leer keuze- en no-keuze experimenten opzetten om de weerstand van Arabidopsis thaliana tegen Pieris rapae te testen. Deze methode helpt onderzoekers plant-hormonen en afweermechanismen bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

No Choice Experiment: <ol><li> Voorzichtig omsluiten de Arabidopsis plant van belang in een plastic beker. In dit geval: Col-0 (WT) en een mutant verminderde in de productie van JA. Zorg ervoor dat je beperking van schade aan de bladeren. Voor dat gebruik ik de achterkant van dit penseel. </li><li> Gebruik een fijn penseel met een vers uitgekomen larven te nemen van de kolonie op kool. </li><li> Plaats voorzichtig de larve op de Arabidopsis-planten. </li><li> Gewicht larve op dag 4, 7, 10. TIP: Kweek je planten onder korte dag omstandigheden (acht uur licht) tot vegetatieve groei (een larve kan zijn volledige levenscyclus te voldoen op een plant) te verhogen. </li></ol> Keuze Experiment: <ol><li> Twee planten zijn geselecteerd, een van elk genotype. Het beste is om planten groeien in dezelfde pot, met andere factoren, zoals de lade effecten, enz. te beperken </li><li> Zet de planten in een vlinder kooi. </li><li> Selecteer een vruchtbaar vrouwtje. Ik meestal vangen een vrouw die actief is eieren leggen in de opvoeding kolonie. </li><li> Laat de vrouw in de kooi met de keuze uit twee planten voor 24 uur. </li></ol> TIP 1: Om een invloed van het leren te sluiten, mag niet aan vrouwen hergebruiken voor de volgende keuze tests. TIP 2: Men kan alleen maar vergelijken met planten die een vergelijkbare groei fenotype hebben. Als alternatief kun je een blad monteren van elk genotype op de top van een erlenmeyer en vergelijken hun aantrekkelijkheid voor een vrouwtje. Ga naar <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">Annual Reviews van Plant Biology</a> voor meer informatie over dit protocol en de plant immuun voor insecten herbivorie.

keuze en no-keuze assays voor het testen van de weerstand van a. thaliana te kauwen insecten

Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects

Larven van de kleine witte kool vlinder zijn een plaag in de landbouw-instellingen. Deze rups soort feeds van planten in de kool familie, die veel gewassen zoals kool omvatten, broccoli, spruitjes etc. grootbrengen van de insecten vindt plaats op kool planten in de kas. Minstens twee kooien zijn nodig voor de opfok van Pieris rapae. Een voor de larven en de andere aan de volwassenen, de vlinders bevatten. Met het oog op de rol van de plantenhormonen en giftige plant chemicaliën in verzet tegen dit insect plaag te onderzoeken, tonen we aan twee experimenten. De eerste, de bepaling van de rol van jasmonzuur (JA - een plantenhormoon vaak aangegeven in resistentie tegen insecten) in het verzet tegen de kauwen insect Pieris rapae. Rups groei kan worden vergeleken op wild-type en mutant planten verminderde in de productie van JA. Dit experiment wordt beschouwd als &quot;No Choice&quot;, omdat de larven worden gedwongen om van te leven op een enkele plant die synthetiseert of een tekort in JA. Ten tweede tonen we aan een experiment dat de rol van de glucosinolaten, die worden gebruikt als ovipositie (leg) signalen onderzoekt. Hier gebruiken we WT en mutant Arabidopsis verminderde in glucosinolaten de productie in een &#39;Choice &quot;experiment waarin de vrouwelijke vlinders mogen kiezen om hun eieren te leggen op planten van een van beide genotype. Deze video toont de experimentele opstelling voor beide testen alsmede representatieve resultaten.

Plant de weerstand tegen kauwen insect herbivoren kunnen worden getest op verschillende manieren. Hier hebben we laten zien hoe je set-up een keuze en een no-keuze-experiment met de modelplant Arabidopsis thaliana te identificeren weerstand tegen de plaagsoorten Pieris rapae.

Keuze en No-keuze Assays voor het testen van de weerstand van A. thaliana te kauwen Insecten

Larven van het klein witje zijn een plaag in agrarische omgevingen. Deze rupsensoort voedt zich met planten uit de koolfamilie, die ...

Larven van het kleine witte koolvlinderpie scrape zijn een plaag in landbouwsituaties. Deze rupsensoort voedt zich met planten uit de koolfamilie, waaronder veel gewassen zoals kool, broccoli en spruitjes, en vele anderen. Interessant is dat planten resistentie kunnen ontwikkelen tegen herbi force, zoals bedo tappe, en in deze video zullen we de resistentie van de modelplantensoort rabbit opposite Ana tegen dit weefsel, Jin insect, testen met behulp van twee methoden.Hallo, ik ben Martin Navos, postdoc in het laboratorium van George Jander aan het Bo Thompson Institute for Planned Research. Vandaag wil ik u laten zien hoe u een keuze- en een geen-keuze-experiment opzet met Arabidopsis thaliana als modelplant voor onderzoek naar resistentie tegen plaagorganismen.De opkweek van de rupsen vindt plaats op koolplanten in de kas. Er zijn ten minste twee kooien nodig voor de opkweek. Eén kooi is bedoeld voor de larven en de andere bevat de volwassen vlinders, om zo de betrokkenheid van plantenhormonen en toxische plantchemicaliën aan te tonen.In dit onderzoek naar resistentie tegen dit insect wil ik twee experimenten demonstreren. Het eerste experiment richt zich op het bepalen van de rol van jasmonzuur, een plantenhormoon dat vaak een rol speelt bij resistentie tegen insecten.In een experiment zonder keuze kunnen de groei van rupsen op wildtype-planten en op mutantplanten met een verminderde productie van enkel jasmonzuur worden vergeleken. De hypothese is dat de larven meer gewicht aankomen op de mutantplant. Laten we beginnen met het eerste experiment.We gaan een 'no-choice'-experiment uitvoeren met de planten, een Revit opsis elliana, om de gewichtstoename van purest rapha-larven te meten. Wat we eerst moeten doen, is deze planten zorgvuldig omsluiten. Hiervoor gebruiken we een van deze bekers; we snijden de bodem van deze plastic beker eraf.Om ze af te sluiten, gebruik ik de achterkant van deze fijne penseel. Zo kunnen we deze planten afsluiten zonder de bladeren te beschadigen. We hebben hier een experiment zonder keuze tussen de rabbit opss, het wildtype en de gemuteerde plant.De mutant is een mutant met een gebrek aan jasmonzuur en is waarschijnlijk gevoeliger voor vraat. Dit is een 'no-choice' experiment, omdat één larve slechts kan kiezen uit één genotype planten. Daarom voegen we één larve toe aan elk bekertje.Het is belangrijk om te beginnen met larven die net zijn uitgekomen. Deze worden L1-larven genoemd. Hier is er een die net is uitgekomen.Oké, ik ga deze larve nu voorzichtig op de testband plaatsen. De volgende stap is om deze planten samen met één larve te omsluiten; hiervoor gebruik ik een fijn gaas en een elastiek om ze af te sluiten, zodat ze er niet uit kunnen kruipen. Daarna wachten we een paar dagen, meestal zeven dagen, voordat we de gewichtstoename van de larve meten.Na zeven dagen voeden halen we de larven eruit en wegen we ze op deze weegschaal; we gebruiken de flexibele pincet om de larven voorzichtig op te pakken en leggen hun gewicht vast. Deze weegt bijna 250 milligram. Ik ga het gewicht van deze rups die op de mutante plant zat, vergelijken met het gewicht van de rups die op de wild-type plant zat.Zoals u direct kunt zien, is er veel meer plantweefsel over van de plant van het wildtype. We gaan er daarom vanuit dat de larve minder gewicht heeft gewonnen. De larve op de wildtype plant weegt slechts ongeveer honderd milligram.Er is dus een enorm verschil, zowel in de hoeveelheid weefsel die is geconsumeerd als in de gewichtstoename van de larven. Dat is alles voor het experiment zonder keuze. Laten we nu overgaan naar het keuze-experiment, zullen we?Specialistische plagen identificeren en worden aangetrokken door gastheersignalen die toxisch zijn voor generalistische plaagdieren. In het geval van pi worden rapid glucosinolates gebruikt als een herkenningssignaal. Hier zal ik wild-type en mutante rabbit opsis gebruiken waarbij de productie van glucosinolates is verstoord.Om een keuse-experiment uit te voeren, moet men vóór de start van dit experiment in staat zijn om mannelijke en vrouwelijke vlinders van elkaar te onderscheiden. Hier is een voorbeeld: vrouwelijke bureaus rapid-vlinders hebben twee stippen op elke vleugel, terwijl mannetjes er slechts één hebben; soms kunnen mannetjes worden aangezien voor vrouwtjes als ze een tweede, vaak vage markering hebben. Laten we nu het keuse-experiment opzetten.In dit geval hebben we zowel een wildtype als een gemuteerde plant. De gemuteerde plant vertoont een defect in de productie van glucosinolaten. Opnieuw: glucosinolaten zijn toxisch voor generalistische plaagdieren, maar specialisten zoals de luis waarmee we hier werken, worden aangetrokken door glucosinolaten.Dit zijn de vijf larvale stadia van de penis-ape, beginnend bij L1, het eerste larvale stadium, waarbij ze in gewicht toenemen tot aan het vijfde larvale stadium. Daarna transformeren ze in een pop, waarna de volledige metamorfose plaatsvindt en deze larven volwassen vlinders worden. Voor dit keuzexperiment gebruiken we deze kooi waarin ik zowel de wilde type als de mutante plant heb geplaatst, en nu ga ik er één vrouwelijke vlinder aan toevoegen.Om de acai te beoordelen, vang ik gewoonlijk vrouwtjes die vruchtbaar zijn. Om er zeker van te zijn dat ze vruchtbaar zijn, vang ik vrouwtjes die actief eieren leggen; ik plaats mijn hand voorzichtig om het insect heen en breng het over naar de testkooi. We laten de vlinder vervolgens 24 uur binnen en tellen daarna het aantal eieren dat op elk van deze genotypes is gelegd.Enkele nuttige tips bij het uitvoeren van dit type experimenten zijn: ten eerste, wanneer u een vrouwelijke vlinder heeft geselecteerd, gebruikt u deze niet voor opeenvolgende experimenten omdat er een leereffect kan optreden. Ten tweede kan men alleen planten vergelijken die een vergelijkbaar groeifenotype hebben. Als u planten heeft die geen vergelijkbaar groeifenotype vertonen, kunt u bladeren van vergelijkbare grootte nemen en deze bovenop een LMI-fles bevestigen.Nadat er 24 uur zijn verstreken, kunnen we eerst de planten verwijderen. De plant van het wildtype, zoals u kunt zien, heeft er veel eitjes op, en de mutante plant, de mutant die glucosinolaten mist. Deze mist dus een aversie- of afstotingsprikkel.Zoals u kunt zien, zijn er nauwelijks eieren of slechts zeer weinig, ten minste bij de mutant. Terwijl er veel eieren zijn op de wildtypeplant. Ik heb u zojuist laten zien hoe u experimenten opzet om de resistentie tegen insecten te bepalen.Het eerste experiment was een 'no-choice' experiment, waarbij we de gewichtstoename van larven op mutante planten vergeleken met die op wild-type planten. Het tweede experiment was een keuzexperiment.We hebben de acla van een vrouwelijke vlinder vergeleken op een mutante plant versus een wildtype plant. Hartelijk dank. Dat is alles.Ik hoop dat het nuttig is voor uw experimenten.

choice-no-choice-assays-for-testing-resistance-thaliana-to-chewing

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In deze video en test is aangetoond dat de tests van de tolerantie van nicotine om twee soorten bladluizen die een tabaksplanten teistert in het veld en een dat niet.

Testen Nicotine Tolerantie in Bladluizen Met behulp van een kunstmatige dieet Experiment

Deze video legt de mechanismen van de waardplant weerstand tegen herbivorie en toont een no-choice test die de relatieve bijdragen van antibiose en tolerantie voor spittlebug weerstand in de...

Karakteriseren Herbivore resistentiemechanismen: Spittlebugs op Brachiaria Spp. als een voorbeeld

Deze video beschrijft de smaakvoorkeurstest, een gedragsmethode die wordt gebruikt om aantrekkingskracht of vermijding te meten voor gekleurde oplossingen die anders smaken door de buikkleuring van de vlieg na inname van de voorkeursstof te beoordelen. Het aanbevolen protocol toont de procedure aan die wordt gebruikt om de voorkeur van vliegen te meten voor oplossingen van verschillende sacharoseconcentraties.

Smaakvoorkeurstest: een methode voor het meten van voedingsgedrag in Drosophila

Een verticale, T-doolhof olfactometer beschreven voor het testen van de gedragsreactie van geleedpotigen. De olfactometer kan de experimentator om keuzes te maken die door proefpersonen te meten wanneer het wordt blootgesteld aan twee potentiële geur velden. Zowel aantrekking tot en afstoting van geurstoffen kan worden gemeten met dit apparaat.

Verticale T-doolhof Keuze Test voor geleedpotigen Reactie op odoranten

Smaak is een belangrijk sensorisch proces dat de aantrekking tot heilzame stoffen en het vermijden van giftige stoffen vergemakkelijkt. Dit protocol beschrijft een eenvoudige innametest voor het bepalen van de Drosophila smaakpreferentie voor een bepaalde chemische verbinding.

Taste Voorkeur Assay voor Volwassenenonderwijs<em&gt; Drosophila</em

Hier presenteren we een Caenorhabditis elegans -specifieke test die is ontworpen om veranderingen in het koperen aversiegedrag te evalueren en het vermogen om een ​​gemeenschappelijke voedingsbron te lokaliseren, als het organisme zich voortbrengt van een goed gevoed aan hongerige voedingswaarde.

EEN<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Voedingsstatus gebaseerde Koper Aversion Assay

We presenteren een gedragsopname-opstelling en protocol waarmee geautomatiseerde analyse van de nematode, Caenorhabditis elegans , de voorkeur geeft aan oplosbare verbindingen in een populatie gebaseerde assay. Dit artikel beschrijft de constructie van een gedragskamer, het gedragsprotocol en het gebruik van videoanalyse software.

Geautomatiseerde Analyse van een Chemische Sensorische Preference Assay van een Nematodebevolking

Hier presenteren we een protocol voor het onderzoek naar de voorkeur van de verpopt van volwassen larven van Ectropis grisescens in reactie op de bodem factoren (e.g., substraat type en vocht inhoud) met behulp van bioassays keuze. Wij presenteren ook een protocol van neen-keuze bioassays om te bepalen van de factoren die invloed hebben op het gedrag van de verpopt en nabestaanden van E. grisescens.

Keuze en nee-keuze Bioassays te bestuderen de verpopt voorkeur en het succes van de opkomst van Ectropis grisescens

De gepresenteerde methode creëert natuurlijke herbivoor beschadigd plantenweefsel door de toepassing van Manduca sexta larven op losgeraakte bladeren van aardappel. Het plantenweefsel wordt onderzocht voor de uitdrukking van zes transcriptiefactor homologs die betrokken zijn bij vroege reacties op insecten herbivory.

Vrijstaande blad testen voor het vereenvoudigen van genexpressie studies in aardappel tijdens besmetting door kauwen insect Manduca sexta

We presenteren een protocol voor een tweekeuze voertest voor vliegen. Deze voertest is snel en gemakkelijk te uitvoeren en is niet alleen geschikt voor kleinschalig laboratoriumonderzoek, maar ook voor gedragsschermen met hoge doorvoer bij vliegen.

Een snelle voedselvoorkeurtest in Drosophila

Dit protocol beschrijft de verplichte voedingstest om het potentieel toxische effect van een fytochemische stof op de larven van het lepidoptera-insect te evalueren. Dit is een zeer schaalbare insectenbioassay, waarmee de subletale en dodelijke dosis, afschrikkende activiteit en fysiologisch effect eenvoudig kunnen worden geoptimaliseerd. Dit zou kunnen worden gebruikt voor het screenen van milieuvriendelijke insecticiden.

Ontwikkeling van een voedingstestsysteem voor het evalueren van het insecticide effect van fytochemicaliën op Helicoverpa armigera

Leer keuze- en no-keuze experimenten opzetten om de weerstand van Arabidopsis thaliana tegen Pieris rapae te testen. Deze methode helpt onderzoekers plant-hormonen en afweermechanismen bestuderen.

Keuze en No-keuze Assays voor het testen van de weerstand van A. thaliana te kauwen Insecten

Meer video's verkennen