Name: Isolatie, kweek en karakterisering van prostaatkanker-geassocieerde fibroblasten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Leer de isolatie, kweek en karakterisering van prostaatkanker-geassocieerde fibroblasten uit radicale prostatectomiepreparaten. Dit protocol maakt betrouwbare generatie van CAFs mogelijk voor onderzoek naar tumorprogressie en therapeutische strategieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>12 well plate</td><td>Sarstedt</td><td>833921</td><td></td></tr><tr><td>24 well plate</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>6 well plate</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>96 well plate</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>Anti-GAPDH Mouse mAb (6C5)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CB1001</td><td>Source: Mouse; Dilution for WB: 1:1000</td></tr><tr><td>aSMA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5228&nbsp;</td><td>Source: Mouse; Dilution for WB: 1:3000</td></tr><tr><td>Caveolin</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>CST3267</td><td>Source: Rabbit; Dilution for WB: 1:1000</td></tr><tr><td>CD31-VioBlue</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-119-980</td><td>Flow Cytometry Ab, Endothelial cell marker</td></tr><tr><td>CD326-PE (EpCAM)</td><td>Milteny Biotec</td><td>130113-826</td><td>Flow Cytometry Ab, Epithelial cell marker</td></tr><tr><td>CD45-FITC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-110769</td><td>Flow Cytometry Ab, Pan leukocyte marker</td></tr><tr><td>CD90-APC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-114-903</td><td>Flow Cytometry Ab, Fibroblast marker</td></tr><tr><td>Collagen VI (COL6A1)</td><td>Abcam</td><td>ab182744</td><td>Source: Rabbit; Dilution for WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Conical tube 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Conical tube 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Cryopure 2 mL microtubes</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Culture plate 100 mm diameter&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Culture plate 100 mm diameter&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>Culture plate 60 mm diameter&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>D8418</td><td>Use in a Biological hood</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle&rsquo;s Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Store at 4 &deg;C, use in a Biological hood</td></tr><tr><td>FAP</td><td>Abcam</td><td>ab53066</td><td>Source: Rabbit; Dilution for WB: 1:500</td></tr><tr><td>FcR Blocking Reagent, human</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-059-901</td><td>Fc Blocker</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Store at 4 &deg;C, use in a Biological hood</td></tr><tr><td>Filtered tips 10 &micro;L</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Filtered tips 100 &micro;L</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Filtered tips 1000 &micro;L</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Filtered tips 20 &micro;L</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Filtered tips 200 &micro;L</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 &micro;m&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>FSP1/S100A4</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>D9F9D (13018)</td><td>Source: Rabbit; Dilution for WB: 1:2000</td></tr><tr><td>IL6</td><td>Abclonal technology</td><td>A0286</td><td>Source: Rabbit; Dilution for WB: 1:1000</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>National Inst. of Health</td><td>version 1.53c</td><td>Software for image analysis</td></tr><tr><td>incucyte imagelock 96-well plate</td><td>Sartorious</td><td>BA-04857</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte&reg; SX5</td><td>Sartorious</td><td>SX5</td><td>Live cell analysis instrument&nbsp;</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11668019</td><td>cation lipid-mediated transfection reagent</td></tr><tr><td>MACS&reg; Tissue Storage Solution</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>Microplate reader (600 nm absorbance)</td><td>Promega</td><td>GM3500</td><td></td></tr><tr><td>Microtubes 1.5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Ncad</td><td>Abcam</td><td>ab18203</td><td>Source: Rabbit; Dilution for WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Nitro Blue Tetrazolium&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>n5514</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>HS234526B</td><td></td></tr><tr><td>pBABE-puro-hTERT</td><td>Addgene</td><td>1771</td><td>Store at -20 &deg;C, use in a Biological hood</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biological&nbsp;</td><td>NBP2-29541</td><td>Store at -20 &deg;C, use in a Biological hood</td></tr><tr><td>PDGFRB</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-432</td><td>Source: Rabbit; Dilution for WB: 1:1000</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (PS, 10,000 &mu;g/mL)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Store at 4 &deg;C, use in a Biological hood</td></tr><tr><td>Phase contrast microscope&nbsp;</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline&nbsp;(PBS)</td><td>Homemade</td><td></td><td>NaCl, 137 mM; KCl, 2.7 mM; Na2HPO4, 10 mM;KH2PO4, 1.8 mM. Autoclave and Store at RT</td></tr><tr><td>Poly-L-lysine solution</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8920</td><td>Store at 4 &deg;C, use in a Biological hood</td></tr><tr><td>Puromycin dihydrochloride</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>Secura Semi Micro Balance</td><td>Sartorius</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipette 10 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipette 2 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipette 25 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipette 5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>STAT3</td><td>CST</td><td>9139</td><td>Source: Mouse; Dilution for WB: 1:1000</td></tr><tr><td>STAT3 Y705</td><td>CST</td><td>9131</td><td>Source: Rabbit; Dilution for WB: 1:1000</td></tr><tr><td>stereomicroscope</td><td>Leica</td><td>MZ125</td><td></td></tr><tr>

isolatie, kweek en karakterisering van prostaatkanker-geassocieerde fibroblasten

Isolation, Culture, and Characterization of Prostate Cancer-Associated Fibroblasts

Isolatie, kweek en karakterisering van prostaatkanker-geassocieerde fibroblasten

Tumor stroma can be actively shaped by tumor cells to adopt pro-tumorigenic properties, making it a focal point of cancer research. Among the stromal ...

isolation-culture-characterization-prostate-cancer-associated

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Cancer Associated Fibroblasten (CAF) te vergemakkelijken tumorinitiatie, groei en progressie door te geven dat bevordert de proliferatie, angiogenese en ontsteking. Hier beschrijven we een methode om pure populaties van normale fibroblasten en CAF isoleren van verse muis en humane weefsels door celsortering, met PDGFRα als oppervlaktemerker.

Isolatie van normale en kankergeassocieerde fibroblasten van verse weefsels door fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS)

De isolatie van kankerstamcellen (KSC) rechtstreeks van menselijke weefsels is voorwaarde voor hun biologische karakterisering. Dit manuscript beschrijft een methode voor de isolatie van prostaat CSC van menselijk weefsel, terwijl ook het verstrekken van tips over het oplossen van moeilijke stappen.

Isolatie van kanker stamcellen uit menselijke stalen van prostaatkanker

Hier presenteren we een protocol voor co-cultuur in drie dimensies, wat nuttig is voor het onderzoeken van interacties tussen meerdere cellen en het beïnvloeden van het gedrag van kankercellen door de extracellulaire matrix. In dit experimentele model worden kankercellen gekweekt op collageengels ingebed met humane kanker-geassocieerde fibroblasten.

Driedimensionale Co-cultuur Model voor Tumor-stromale Interactie

Fibroblastgedrag ligt ten grondslag aan een spectrum van klinische entiteiten, maar ze blijven slecht gekarakteriseerd, grotendeels vanwege hun inherente heterogeniteit. Traditioneel fibroblastenonderzoek is afhankelijk van in vitro manipulatie, waardoor in vivo fibroblastgedrag wordt gemaskeerd. We beschrijven een FACS-gebaseerd protocol voor de isolatie van muishuidfisbroblasten dat geen celcultuur vereist.

Muizen Dermaal Fibroblast Isolation door FACS

Hier presenteren we een methode voor het opzetten van een snel in vitro systeem dat het driedimensionale kweken en de daaropvolgende luminale differentiatie van primaire prostaatepitheelcellen ondersteunt.

Een Rapid Filter Insert-gebaseerde 3D Cultuur System for Primary Prostaat Cel Differentiatie

Dit manuscript beschrijft een FACS-gebaseerd protocol voor isolatie van papillaire en reticulaire fibroblasten van menselijke huid. Het omzeilt in vitro cultuur die onvermijdelijk was met de algemeen gebruikte isolatie protocol via explant culturen. De afkomstige fibroblast subsets zijn functioneel onderscheiden en display differentieel genexpressie en lokalisatie binnen de dermis.

Isolatie van papillaire en reticulaire fibroblasten van menselijke huid door fluorescentie-geactiveerde cel het sorteren

We presenteren een protocol om primaire volwassen fibroblasten op een eenvoudige, snelle en betrouwbare manier te isoleren, die door beginners kunnen worden perforeerbaar (bijv. studenten). De procedure combineert enzymatische weefsel spijsvertering en mechanische opwinding met ultrasone golven om primaire fibroblasten te verkrijgen. Het protocol kan gemakkelijk worden aangepast aan specifieke experimentele eisen (bijv. menselijk weefsel).

Ultrasoon-verhoogde primaire volwassen fibroblast-isolatie

Met behulp van humane primaire prostaat Epitheelcellen, rapporteren we een nieuwe biomarker-vrije methode van functionele karakterisering van stam-achtige cellen door een spheroid-gebaseerde label-retentie test. Een stap-voor-stap protocol wordt beschreven voor BrdU, CFSE of far Red 2D Cell labeling; driedimensionale spheroid-formatie; Label-behoud stam-achtige celidentificatie door immunocytochemie; en isolatie door FACS.

Isolatie van stam-achtige cellen uit 3-dimensionale Spheroid-culturen

Het verkrijgen van een zuivere populatie van fibroblasten is cruciaal voor het bestuderen van hun rol in wondherstel en fibrose. Hier beschreven is een gedetailleerde methode om fibroblasten en myofibroblasten te isoleren van niet gewonde en gewonde muisharten, gevolgd door karakterisering van hun zuiverheid en functionaliteit door immunofluorescentie, RTPCR, fluorescentie-ondersteunde cel sorteren, en collageen gel contractie.

Isolatie en karakterisering van volwassen cardiale fibroblasten en myofibroblasten

Dit artikel heeft tot doel een protocol te bieden voor de isolatie en kweek van primaire kanker-geassocieerde fibroblasten uit een syngenetisch muizenmodel van triple-negatieve borstkanker en hun toepassing voor de preklinische studie van nieuwe nanodeeltjes die zijn ontworpen om zich te richten op de tumormicro-omgeving.

Isolatie van primaire kanker-geassocieerde fibroblasten uit een syngenetisch muizenmodel van borstkanker voor de studie van gerichte nanodeeltjes

Meercellige 3D-tumorsferoïden werden bereid met longadenocarcinoomcellen, fibroblasten en monocyten, gevolgd door de isolatie van kanker-geassocieerde fibroblasten (CAFs) uit deze sferoïden. Geïsoleerde CAFs werden vergeleken met normale fibroblasten om de mitochondriale gezondheid te beoordelen door het mitochondriale transmembraanpotentieel, reactieve zuurstofsoorten en enzymatische activiteiten te bestuderen.

Beoordeling van mitochondriale gezondheid in kankergeassocieerde fibroblasten geïsoleerd uit 3D meercellige longtumorenferoïden

Leer de isolatie, kweek en karakterisering van prostaatkanker-geassocieerde fibroblasten uit radicale prostatectomiepreparaten. Dit protocol maakt betrouwbare generatie van CAFs mogelijk voor onderzoek naar tumorprogressie en therapeutische strategieën.

Isolatie, kweek en karakterisering van prostaatkanker-geassocieerde fibroblasten

Meer video's verkennen