Name: Visualisatie van retinale organoïden voor de hele berg met cellulaire resolutie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:35:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: Ontdek een protocol voor optische clearing en immunolabeling van retinale organoïden met confocale microscopie. Deze methode onthult neurale lagen en celprojecties voor onderzoek naar retinale ontwikkeling en ziekten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Lee, Y. J., Jo, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+organoids+from+induced+pluripotent+stem+cells+of+patients+with+inherited+retinal+diseases%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">Retinal organoids from induced pluripotent stem cells of patients with inherited retinal diseases: A systematic review.</a> Stem Cell Rev Rep. 21 (1), 167-197 (2025).</li>
<li>Onyak, J. R., Vergara, M. N., Renna, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+organoid+light+responsivity%3A+Current+status+and+future+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Trans+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal organoid light responsivity: Current status and future opportunities.</a> Trans Res. 250, 98-111 (2022).</li>
<li>O’Hara-Wright, M., Gonzalez-Cordero, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+organoids%3A+A+window+into+human+retinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Retinal organoids: A window into human retinal development.</a> Development. 147 (24), dev189746(2020).</li>
<li>Wahle, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+spatiotemporal+phenotyping+of+human+retinal+organoid+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multimodal spatiotemporal phenotyping of human retinal organoid development.</a> Nat Biotechnol. 41 (12), 1765-1775 (2023).</li>
<li>Isla-Magrané, H., Veiga, A., García-Arumí, J., Duarri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiocular+organoids+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+displayed+retinal%2C+corneal%2C+and+retinal+pigment+epithelium+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Multiocular organoids from human induced pluripotent stem cells displayed retinal, corneal, and retinal pigment epithelium lineages.</a> Stem Cell Res Ther. 12 (1), 581(2021).</li>
<li>Isla-Magrané, H., Zufiaurre-Seijo, M., García-Arumí, J., Duarri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All-trans+retinoic+acid+modulates+pigmentation%2C+neuroretinal+maturation%2C+and+corneal+transparency+in+human+multiocular+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">All-trans retinoic acid modulates pigmentation, neuroretinal maturation, and corneal transparency in human multiocular organoids.</a> Stem Cell Res Ther. 13 (1), 376(2022).</li>
<li>Avilov, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Navigating+across+multi-dimensional+space+of+tissue+clearing+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Appl+Fluoresc%22%5BJournal%5D)">Navigating across multi-dimensional space of tissue clearing parameters.</a> Methods Appl Fluoresc. 9 (2), 022001(2021).</li>
<li>Brenna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+tissue+clearing+associated+with+3D+imaging%3A+application+in+preclinical+and+clinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Optical tissue clearing associated with 3D imaging: application in preclinical and clinical studies.</a> Histochem Cell Biol. 157 (5), 497(2022).</li>
<li>Bálint, Š, Verdeny Vilanova, I., Sandoval Álvarez, Á, Lakadamyali, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlative+live-cell+and+superresolution+microscopy+reveals+cargo+transport+dynamics+at+microtubule+intersections%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Correlative live-cell and superresolution microscopy reveals cargo transport dynamics at microtubule intersections.</a> Proc Nat Acad Sci USA. 110 (9), 3375-3380 (2013).</li>
<li>Schwarz, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent-protein+stabilization+and+high-resolution+imaging+of+cleared%2C+intact+mouse+brains%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Fluorescent-protein stabilization and high-resolution imaging of cleared, intact mouse brains.</a> PLoS One. 10 (5), e0124650(2015).</li>
<li>Klingberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+evaluation+of+total+glomerular+number+and+capillary+tuft+size+in+nephritic+kidneys+using+lightsheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Fully automated evaluation of total glomerular number and capillary tuft size in nephritic kidneys using lightsheet microscopy.</a> J Am Soc Nephrol. 28 (2), 452-459 (2017).</li>
<li>Dekkers, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+3D+imaging+of+fixed+and+cleared+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High-resolution 3D imaging of fixed and cleared organoids.</a> Nat Protoc. 14 (6), 1756-1771 (2019).</li>
<li>Wang, Y., Zhang, D. -H., Zhang, J. -Y., Chen, N., Zhi, G. -Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-yield+synthesis+of+bioactive+ethyl+cinnamate+by+enzymatic+esterification+of+cinnamic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chem%22%5BJournal%5D)">High-yield synthesis of bioactive ethyl cinnamate by enzymatic esterification of cinnamic acid.</a> Food Chem. 190, 629-633 (2016).</li>
<li>Schellinger, A. P., Carr, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solubility+of+buffers+in+aqueous-organic+eluents+for+reversed-phase+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22LCGC+North+America%22%5BJournal%5D)">Solubility of buffers in aqueous-organic eluents for reversed-phase liquid chromatography.</a> LCGC North America. 22 (6), 544(2004).</li>
<li>Jiang, S. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-III-Tubulin%3A+A+reliable+marker+for+retinal+ganglion+cell+labeling+in+experimental+models+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">β-III-Tubulin: A reliable marker for retinal ganglion cell labeling in experimental models of glaucoma.</a> Int J Ophthalmol. 8 (4), 643-652 (2015).</li>
<li>Guo, J., Walss‐Bass, C., Ludueña, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%CE%B2+isotypes+of+tubulin+in+neuronal+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">The β isotypes of tubulin in neuronal differentiation.</a> Cytoskeleton. 67 (7), 431-441 (2010).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TuJ1+%28class+III+%CE%B2-tubulin%29+expression+suggests+dynamic+redistribution+of+follicular+dendritic+cells+in+lymphoid+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">TuJ1 (class III β-tubulin) expression suggests dynamic redistribution of follicular dendritic cells in lymphoid tissue.</a> Eur J Cell Biol. 84 (2-3), 453-459 (2005).</li>
<li>Fernando, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+brain+and+retinal+organoids+from+confluent+cultures+of+pluripotent+stem+cells+connected+by+nerve-like+axonal+projections+of+optic+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Differentiation of brain and retinal organoids from confluent cultures of pluripotent stem cells connected by nerve-like axonal projections of optic origin.</a> Stem Cell Rep. 17 (6), 1476-1492 (2022).</li>
<li>Belecky-Adams, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax-6%2C+Prox+1%2C+and+Chx10+homeobox+gene+expression+correlates+with+phenotypic+fate+of+retinal+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Pax-6, Prox 1, and Chx10 homeobox gene expression correlates with phenotypic fate of retinal precursor cells.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 38 (7), 1293-1303 (1997).</li>
<li>Rowan, S., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+the+homeodomain+transcription+factor+Chx10+in+the+retina+using+a+novel+multifunctional+BAC+transgenic+mouse+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of the homeodomain transcription factor Chx10 in the retina using a novel multifunctional BAC transgenic mouse reporter.</a> Dev Biol. 271 (2), 388-402 (2004).</li>
<li>Andilla, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tissue-mimic+with+light+sheet+microscopy%3A+A+comparative+guideline%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Imaging tissue-mimic with light sheet microscopy: A comparative guideline.</a> Sci Rep. 7, 44939(2017).</li>
<li>Olarte, O. E., Andilla, J., Gualda, E. J., Loza-Alvarez, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-sheet+microscopy%3A+A+tutorial%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Opt+Photonics%22%5BJournal%5D)">Light-sheet microscopy: A tutorial.</a> Adv Opt Photonics. 10, 111(2018).</li>
<li>Power, R. M., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+light-sheet+fluorescence+microscopy+for+multiscale+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A guide to light-sheet fluorescence microscopy for multiscale imaging.</a> Nat Methods. 14 (4), 360-373 (2017).</li>
<li>Darche, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+sheet+fluorescence+microscopy+of+cleared+human+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Light sheet fluorescence microscopy of cleared human eyes.</a> Commun Biol. 6 (1), 1025(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x NA0.40 DRY objective</td><td>Leica</td><td>HC PL APO CS2</td><td>-</td></tr><tr><td>63x NA1.40 OIL objective</td><td>Leica</td><td>HC PL APO CS2</td><td>-</td></tr><tr><td>anti-GFP antibody</td><td>Abcam</td><td>ab13970</td><td>-</td></tr><tr><td>Benzyl alcohol (BA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>13162</td><td>-</td></tr><tr><td>Benzyl benzoate (BB)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>W213802</td><td>-</td></tr><tr><td>bottom-glass petri dish</td><td>MatTek</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td>-</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumine (BSA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7030</td><td>-</td></tr><tr><td>Chx10 antibody</td><td>Sta Cruz Biotech</td><td>sc-365519</td><td>-</td></tr><tr><td>Cytiva Illustra Nap-5 gel filtration columns, Sephadex G-25</td><td>Sigma Aldrich</td><td>17-0853-02</td><td>-</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9542</td><td>-</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8418</td><td>-</td></tr><tr><td>DRAQ5</td><td>Thermofisher</td><td>62251</td><td>-</td></tr><tr><td>Dye (carboxylic acid, succinimidyl ester)</td><td>Invitrogen or Abberior</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>ImageJ/Fiji&nbsp;</td><td>NIH</td><td>&nbsp;v1.50i</td><td>-</td></tr><tr><td>Inverted confocal laser-scanning microscope</td><td>Leica microsystems</td><td>TCS SP8 STED 3X-FALCON</td><td>-</td></tr><tr><td>LAS X 3D processing software</td><td>Leica microsystems</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>mQ H2O</td><td>-</td><td>-</td><td>Ultrapuur water van het Synergy waterzuiveringssysteem</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Acros Organics</td><td>424270010</td><td>-</td></tr><tr><td>Non-labelled secondary IgG</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Opsin blue antibody</td><td>Millipore&nbsp;&nbsp;</td><td>AB5407&nbsp;</td><td>-</td></tr><tr><td>Opsin RG antibody</td><td>Millipore</td><td>AB5745&nbsp;</td><td>-</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA) 4%</td><td>Thermo scientific&nbsp;</td><td>J199943-K2</td><td>-</td></tr><tr><td>PBS Solution</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td>-</td></tr><tr><td>Phalloidin labelling probes</td><td>Thermofisher</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>10010023</td><td>-</td></tr><tr><td>RECOV antibody</td><td>Millipore</td><td>AB5585-I&nbsp;</td><td>-</td></tr><tr><td>RHO (RET-P1) antibody</td><td>Sigma Aldrich</td><td>O4886&nbsp;</td><td>-</td></tr><tr><td>Sodium citrate tribasic dihydrate&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8532</td><td>-</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787</td><td>-</td></tr><tr><td>TUJ1 antibody</td><td>Covance&nbsp;</td><td>MMS-435P&nbsp;</td><td>-</td></tr></tbody></table>

visualisatie van retinale organoïden voor de hele berg met cellulaire resolutie

Whole-mount Retinal Organoid Visualization with Cellular Resolution

Visualisatie van retinale organoïden voor de hele berg met cellulaire resolutie

Retinal organoids derived from human induced pluripotent stem cells are intricate 3D structures that mimic the human retina, offering a powerful platform ...

whole-mount-retinal-organoid-visualization-with-cellular-resolution

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Deze video artikel demonstreert de oprichting van organotypische netvlies wholemount culturen en een Cytospin procedure voor de analyse van exogeen geïnduceerde effecten. Organotypische netvlies wholemount culturen na te bootsen van...

In vivo-achtige organotypische Murine netvlies Wholemount Cultuur

De gehele 3D-structuur en cellulaire inhoud van organoïden, evenals hun fenotypische gelijkenis met het oorspronkelijke weefsel kan worden vastgelegd met behulp van de single-cell resolutie 3D imaging protocol hier beschreven. Dit protocol kan worden toegepast op een breed scala van organoïden variërend in oorsprong, grootte en vorm.

Single-Cell Resolutie driedimensionale beeldvorming van intacte organoïden

Hier wordt een chirurgische techniek gepresenteerd voor het transplanteren van van menselijke pluripotente stamcellen (hPSC) afgeleid netvliesweefsel in de subretinale ruimte van een groot diermodel.

Subretinale transplantatie van menselijk embryonaal stamcel-afgeleid retinaal weefsel in een katachtig groot diermodel

Deze studie heeft tot doel een nieuw humaan organotypisch retinale cultuurmodel (HORC) te ontwikkelen dat voorkomt dat de retinale integriteit tijdens explantbehandeling in gevaar komt. Dit wordt bereikt door het netvlies te kweken met het bovenliggende glasvocht en het onderliggende retinale pigmentepitheel-vaatvlies (RPE-vaatvlies) en sclera.

Karakterisering van een nieuwe menselijke organotypische retinale cultuurtechniek

Met behulp van een zelforganiserende methode ontwikkelen we met de toevoeging van COCO een protocol dat de generatie van fotoreceptoren aanzienlijk zou kunnen verhogen.

Gerichte inductie van retinale organoïden uit menselijke pluripotente stamcellen

Hier beschrijven we een geoptimaliseerd retinale organoïde inductiesysteem, dat geschikt is voor verschillende menselijke pluripotente stamcellijnen om retinale weefsels met een hoge reproduceerbaarheid en efficiëntie te genereren.

Retinale organoïde inductiesysteem voor afleiding van 3D retinale weefsels van menselijke pluripotente stamcellen

Dit protocol beschrijft een efficiënte methode voor het differentiëren van hiPSC's in oogveldclusters en het genereren van neuro-retinale organoïden met behulp van vereenvoudigde kweekomstandigheden waarbij zowel adherente als suspensiecultuursystemen betrokken zijn. Andere oculaire celtypen, zoals de RPE en het hoornvliesepitheel, kunnen ook worden geïsoleerd uit volwassen oogvelden in retinale culturen.

Generatie van retinale organoïden uit gezonde en retinale ziekte-specifieke door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen

Dit protocol biedt een geoptimaliseerde en uitgebreide voorbereidingsprocedure voor retinale organoïdemonsters voor transmissie-elektronenmicroscopie. Het is geschikt voor toepassingen waarbij synapsen in volwassen retinale organoïden worden geanalyseerd.

Voorbereiding van retinale organoïdemonsters voor transmissie-elektronenmicroscopie

Microglia zijn unieke residente immuuncellen in het netvlies en spelen een cruciale rol bij verschillende degeneratieve ziekten van het netvlies. Het genereren van een co-cultuurmodel van retinale organoïden met microglia kan een beter begrip van de pathogenese en ontwikkelingsvoortgang van netvliesaandoeningen vergemakkelijken.

Retinale organoïden samenstellen met microglia

Het netvlies vertoont een complexe ruimtelijke organisatie over zijn laminaire structuur. Moderne ruimtelijke transcriptomics en sequencingtechnieken vereisen weefselcoupes &lt; 20 μm dik, waardoor hun toepasbaarheid voor retinaal onderzoek wordt beperkt. Deze vers ingevroren cryosectiemethode produceert dunne delen van het netvlies van de muis met behoud van vlakke ruimtelijke relaties, waardoor uitgebreide moleculaire kartering over laminae mogelijk is.

En gezicht Cryosectie van het netvlies van de muis voor hoogdimensionale ruimtelijke moleculaire analyse

Ontdek een protocol voor optische clearing en immunolabeling van retinale organoïden met confocale microscopie. Deze methode onthult neurale lagen en celprojecties voor onderzoek naar retinale ontwikkeling en ziekten.

Visualisatie van retinale organoïden voor de hele berg met cellulaire resolutie

Meer video's verkennen