Name: Gelijktijdige labelvrije autofluorescentie multi-harmonische microscopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-29T13:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: Leer SLAM-microscopie voor labelvrij multimodaal beeldvorming van biologische weefsels. Deze methode detecteert vier gelijktijdige contrastkanalen zonder exogene labels en biedt betrouwbare ruimtelijke en temporele data voor onderzoek naar celbiologie en ziekte.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>3-axis stage</td><td>ThorLabs</td><td>MAX316</td><td>Discontinued.</td></tr><tr><td>35 mm glass bottom imaging dish</td><td>MatTek</td><td>P35G-0-14-C</td><td>Uncoated #0 coverglass.</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>21063029</td><td>High glucose, HEPES, no phenol red.</td></tr><tr><td>Endothelial cell growth medium supplements</td><td>PromoCell</td><td>C-39210</td><td>Omit Fetal Calf Serum.</td></tr><tr><td>FemtoTrain femtosecond laser</td><td>Spectra-Physics</td><td>1040-5</td><td>Average Power: >5.0 W, Pulse Energy: >500 nJ, Wavelength: 1040 nm &plusmn;8 nm, Repetition Rate: 10 MHz, Pulse Width (FWHM): &lt;220 fs.</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Cytiva</td><td>SH30071.03</td><td>HyClone Characterized.</td></tr><tr><td>Fiber stripper</td><td>ThorLabs</td><td>T10S13</td><td></td></tr><tr><td>Flavin adenine dinucleotide disodium salt hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6625</td><td></td></tr><tr><td>Galvanometer mirrors</td><td>Cambridge Technology</td><td>6215H</td><td>Discontinued.</td></tr><tr><td>Glass processing workstation</td><td>Vytran</td><td>GPX3800</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Eliceiri lab at the University of Wisconsin Madison</td><td>Version 2.16.0</td><td>FIJI Distribution.</td></tr><tr><td>Kimwipe tissue paper</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Cytiva</td><td>SH30034.01</td><td></td></tr><tr><td>Microscope stage</td><td>Applied Scientific Instrumentation</td><td>FTP-2050</td><td></td></tr><tr><td>Microscope stage controller</td><td>Applied Scientific Instrumentation</td><td>MS-2000-500-UDSW</td><td></td></tr><tr><td>Microscopy autocorrelator</td><td>Angewandte Physik und Elektronik GmbH</td><td>Carpe</td><td></td></tr><tr><td>Objective lens</td><td>Olympus</td><td>XLPLN25XWMP2</td><td>Water immersion, 25X magnification, 1.05 NA.</td></tr><tr><td>Optical power meter</td><td>Newport</td><td>919P-003-10</td><td>600 - 1700 nm.</td></tr><tr><td>Optical spectrum analyzer</td><td>ThorLabs</td><td>OSA202C</td><td></td></tr><tr><td>Photonic crystal fiber</td><td>NKT Photonics</td><td>LMA-PM-15 NKT</td><td>Large mode area, polarization maintaining. Core Diameter: 15 &micro;m.</td></tr><tr><td>Precision optical fiber cleaver</td><td>Fujikura</td><td>CT-101</td><td></td></tr><tr><td>Pulse shaper</td><td>Biophotonics Solutions Inc.</td><td>FemtoJock-D</td><td>Discontinued.</td></tr><tr><td>&beta;-Nicotinamide adenine dinucleotide, reduced disodium salt hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10128023001</td><td></td></tr></tbody></table>

gelijktijdige labelvrije autofluorescentie multi-harmonische microscopie

Simultaneous Label-Free Autofluorescence Multi-Harmonic Microscopy

Gelijktijdige labelvrije autofluorescentie multi-harmonische microscopie

Nonlinear optical microscopy images biological samples by detecting signals from the nonlinear interaction of ultrashort laser pulses with endogenous ...

simultaneous-label-free-autofluorescence-multi-harmonic-microscopy

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

We demonstreren het gebruik van fluorescentie foto activerings lokalisatie microscopie (FPALM) om gelijktijdig meerdere soorten fluorescerend gelabelde moleculen binnen cellen af te beelden. De beschreven technieken leveren de lokalisatie op van duizenden tot honderdduizenden individueel fluorescent gelabelde eiwitten, met een precisie van tientallen nanometer binnen enkele cellen.

Gelijktijdige Multicolor beeldvorming van biologische structuren met fluorescentie Fotoactivatie Lokalisatie Microscopie

We presenteren een open source hoog gehalte analyse (HCA) instrument gebruik te maken van geautomatiseerde fluorescentie lifetime imaging (FLIM) voor het testen van eiwit interacties met behulp van Förster resonance energy transfer (FRET) op basis van uitlezingen. Data-acquisitie voor deze openFLIM-HCA instrument wordt bestuurd door software geschreven in μManager en data-analyse wordt uitgevoerd in FLIMfit.

Open Source High Content Analysis Door gebruik te maken van de automaten Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Hier presenteren we een protocol voor Multi-Color lokalisatie van één membraaneiwitten in organellen van levende cellen. Als u wilt koppelen fluorophores, worden zelf labeling eiwitten gebruikt. Eiwitten, gelegen in verschillende membranen compartimenten van de dezelfde organel, kunnen worden gelokaliseerd met een nauwkeurigheid van ~ 18 nm.

Multi-Color lokalisatie microscopie van één membraaneiwitten in organellen van de cellen van levende zoogdieren

Hier presenteren we een praktische gids voor het bouwen van een geïntegreerde microscopie-systeem, dat wordt samengevoegd conventionele epi-belichting fluorescerende imaging, single-molecuul detectie gebaseerde Super resolutie beeldvorming en Multi-Color single-molecuul detectie, met inbegrip van single-molecuul fluorescentie resonantie energieoverdracht imaging, in één set-up op een kostenefficiënte manier.

Uitvoeren van meerdere Imaging modi met één fluorescentie Microscoop

Low-Intensity Pulsed echografie stimulatie (LIPUS) is een modaliteit voor niet-invasieve mechanische stimulatie van endogene of gemanipuleerde cellen met hoge ruimtelijke en temporele resolutie. In dit artikel wordt beschreven hoe implementeren van LIPUS om een epi-fluorescentie Microscoop en minimaliseren van akoestische impedantie mismatch langs het pad van de echografie om te voorkomen dat ongewenste mechanische artefacten.

Multiplexing gericht echografie stimulatie met fluorescentie microscopie

Spectrale beeldvorming is uitgegroeid tot een betrouwbare oplossing voor de identificatie en scheiding van meerdere fluorescentie signalen in een enkel monster en kan gemakkelijk signalen van belang onderscheiden van achtergrond of auto fluorescentie. Excitatie-Scanning Hyperspectrale beeldvorming verbetert deze techniek door de benodigde beeldverzamelings tijd te verlagen en tegelijkertijd de signaal-ruis verhouding te verhogen.

Excitatie-Scanning hyperspectrale beeld microscopie om fluorescentie signalen efficiënt te discrimineren

Dit protocol beschrijft fluorescentiebeeldvorming en analyse van de endogene metabole co-enzymen, gereduceerd nicotinamide-adenine (fosfaat) dinucleotide (NAD (P) H) en geoxideerd flavine-adenine dinucleotide (FAD). Autofluorescentie beeldvorming van NAD(P)H en FAD biedt een labelvrije, niet-destructieve methode om het cellulaire metabolisme te beoordelen.

Autofluorescentie beeldvorming om cellulair metabolisme te evalueren

Hier beschrijven we verschillende methoden voor de vorming van meercellige sferoïden om follow-up multi-parameter live celmicroscopie uit te voeren. Met behulp van fluorescentie lifetime imaging microscopie (FLIM), cellulaire autofluorescentie, kleuringskleurstoffen en nanodeeltjes wordt de benadering voor analyse van celmetabolisme, hypoxie en celdood in levende driedimensionale (3D) kanker en van stamcellen afgeleide sferoïden gedemonstreerd.

Productie en multi-parameter live cell fluorescentie lifetime imaging microscopie (FLIM) van meercellige sferoïden

Raman spectroscopie is een geschikte techniek voor de non-contact, label-free analyse van levende cellen, weefsel-engineering constructen en cellen. Bronspecifieke spectrale vingerafdrukken worden gegenereerd en geanalyseerd met multivariate analyse.

Non-contact, Label-free monitoring van cellen en extracellulaire matrix met behulp van Raman spectroscopie

Optische biosensor technieken kunnen detecteren veranderingen in de massa in de buurt van het plasmamembraan van levende cellen en laten ons toe om cellulaire reacties in zowel individuele cellen en populaties van cellen te volgen. Dit protocol detectie van de modulatie van kaliumkanalen door G-proteïne gekoppelde receptoren in intacte cellen die deze benadering beschreven.

Gebruik van Label-free Optische biosensoren om Modulatie van kaliumkanalen Detect door G-proteïne gekoppelde receptoren

Leer SLAM-microscopie voor labelvrij multimodaal beeldvorming van biologische weefsels. Deze methode detecteert vier gelijktijdige contrastkanalen zonder exogene labels en biedt betrouwbare ruimtelijke en temporele data voor onderzoek naar celbiologie en ziekte.

Gelijktijdige labelvrije autofluorescentie multi-harmonische microscopie

Meer video's verkennen