Muismesenteriene lymfadenectomie voor selectieve verstoring van lymfatische communicatie met regio-specifieke darmen

Ons onderzoek richt zich op T-celreacties op neoantigenen en perifere weefsels, en deze reacties worden sterk beïnvloed door priming, dus richten we ons vooral op waar deze priming-evenementen plaatsvinden. Momenteel zijn de enige veelgebruikte opties om de overdracht tussen lymfeklieren en weefsels te blokkeren systemische modaliteiten zoals S1P-receptoragonisten en de integrineblokkade. Maar deze brede remming verhindert dat we de bijdrage van specifieke lokale lymfeklieren kunnen bestuderen.

Ons protocol biedt een diepgaande beschrijving van zeer selectieve lymfadenectomieën bij elk van de vier belangrijkste mesenterische lymfeklierstations, en aangezien deze lymfeklieren vrij gespecialiseerd zijn in het darmsegment dat ze afvoeren, stelt deze goed verdragen overlevingsprocedure ons in staat specifieke segmenten van de darmlymfe-as te verstoren terwijl de rest intact blijft. Na het bevestigen van de juiste verdovingsdiepte met een knelling in de achtervoet, gebruik je een steriele chirurgische schaar om een incisie van 0,5 tot 1 centimeter in de middenlijn van de verdoofde muis te maken. Met een steriele pincet ontleed je de huid van de buikwand en identificeer je de linea alba.

Maak vervolgens nog een incisie van 0,5 tot 1 centimeter door de linea alba om toegang te krijgen tot de peritoneale holte. Met een stomp mond-gavagenaald wordt één milliliter steriele zoutoplossing bij lichaamstemperatuur in de peritoneale holte geïntruceerd. Maak de steriele gordijnen vochtig om je voor te bereiden op de houding van de darm.

Om het eerste lymfeklierstation te verwijderen, oriënteer je de exterioriseerde darm op vochtige gordijnen met het ceum naar beneden geplaatst, proximale colon bovenaan, en het terminale ileum naar de chirurg toe. Identificeer de mesenterische lymfeklierketen die longitudinaal langs de dikke darm loopt. Met behulp van een schuine fijnpuntige tang dissectie je het eerste lymfeklierstation bot weg van de ileocolische vaten door de gesloten pincet tussen deze structuren te plaatsen en voorzichtig te openen.

Om het theoretische risico op collaterale stroming naar nabijgelegen klieren te verminderen, voer een optionele hechtingsligatie uit met enkele onderbroken hechtingen langs de lymfeklierketen, één millimeter distaal en één millimeter proximaal van het eerste lymfeklierstation, met monofilament nylon hechting en fijnpuntige tang. Trek het lymfeklierstation voorzichtig caudaal terug en verwijder vervolgens met een fijnpuntschaar het doelpunt van de hoofd- naar de caudale richting. Let op de distale takken van de ileocolische vaten, ileale vaten en jejunale vaten om te bevestigen dat de bloedtoevoer intact blijft.

Om het tweede lymfeklierstation te verwijderen, verwijder voorzichtig de dunne darm en oriënteer je de exterioriseerde darm op bevochtigde gordijnen, waarbij het cekumum naar beneden is geplaatst, de proximale colon boven, en de dunne darm naar rechts van de chirurg. Identificeer vervolgens het tweede lymfeklierstation dat longitudinaal langs de dikke darm loopt en begint bij de samenvloeiing van ileale en jejunale vaten. Met een schuine fijnpuntige tang dissectie je het tweede lymfeklierstation bot weg van de colonische vaten.

Om het theoretische risico op collaterale stroming naar nabijgelegen klieren te verminderen, voer een optionele hechtingsligasie uit met enkele onderbroken hechtingen langs de lymfeklierketen, één millimeter distaal en één millimeter proximaal van het tweede lymfeklierstation, met monofilament nylon hechting en fijnpuntige tang. Trek het lymfeklierstation voorzichtig caudaal terug en verwijder vervolgens met een fijnpuntschaar het tweede lymfeklierstation van de cephalad naar de caudale richting. Inspecteer het operatieveld om hemostase te waarborgen.

Om het vierde lymfeklierstation te verwijderen, verwijder je voorzichtig de gehele dunne darm tot aan het achterste ankerpunt. Oriënteer de darm op vochtige gordijnen met het cekumum onder, de proximale colon boven, en de dunne darm rechts van de chirurg. Identificeer het vierde lymfeklierstation dat zich net mediaaal van de distale colon bevindt en lateraal van het derde station.

Met behulp van schuine fijnpuntige tangen of extra fijne schaar dissectie je het vierde lymfeklierstation bot weg van de darmvaten en het omliggende vetweefsel. Om het theoretische risico op collaterale stroming naar nabijgelegen klieren te verminderen, voert u een optionele hechtingsligaties uit met enkele onderbroken hechtingen bij elke identificeerbare lymfeklier, meestal één millimeter van de knoop verwijderd, met monofilament nylon hechting en fijnpuntige tang. Trek dan voorzichtig het vierde lymfeklierstation cephalad terug.

Met fijne of extra fijne schaar snijd je de lymfeklierstations van caudaal tot cephalad uit. Herhaal de procedure voor de tweede knoop in het vierde lymfeklierstation. Ontleed de knoop zorgvuldig, voer indien nodig hechtingsligatie uit en verwijder deze weer.

Inspecteer het operatieveld om de hemostase te bevestigen. Na het terugbrengen van de buikinhoud in de peritoneale holte, geef je één milliliter steriele zoutoplossing bij lichaamstemperatuur in de buikholte om het verlies van verdampingsvloeistof te compenseren. Sluit de buik in twee lagen: eerst de buikwand, daarna de huid met een 6-0 monofilament polypropyleenhechting in een looppatroon.

Weefsel dat werd gewonnen met de mesenterische lymfadenektomieprocedure leverde consequent monsters met een laag vetgehalte op, zoals blijkt uit het direct zinken in PBS. Flowcytometrieanalyse bevestigde succesvolle lymfeklierextractie, waarbij meer dan 95% van de cellen in mesenteriale lymfadenectomie-afgeleide monsters als CD45-positief werd geïdentificeerd, vergeleken met slechts 7% bij controles van visceraal vetweefsel.