Name: Snelle optimalisatie van een licht-induceerbaar systeem om de genexpressie van zoogdieren te beheersen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Leer hoe je een licht-induceerbaar systeem optimaliseert voor genexpressie in HEK293T-cellen met behulp van een 3D-geprinte LED-array. Deze methode verbetert de efficiëntie van optogenetische experimenten aanzienlijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td><td>VWR</td><td>10025-724</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Reagent Reservoirs</td><td>VWR</td><td>77395-252</td><td></td></tr><tr><td>10 mL serological pipettes</td><td>VWR</td><td>75816-100</td><td></td></tr><tr><td>1000 μL filter tips</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>15 mL High-Performance Centrifuge Tubes, flat cap</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>1931-C Optical Power Meter</td><td>Newport</td><td>1931-C</td><td></td></tr><tr><td>2 mL serological pipettes</td><td>VWR</td><td>75816-104</td><td></td></tr><tr><td>20 μL filter tips</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200 μL filter tips</td><td>VWR</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>50 mL High-Performance Centrifuge Tubes, flat cap</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>96-well v-bottom plates</td><td>BRANDplates</td><td>781661</td><td></td></tr><tr><td>A21, LED Red light bulb</td><td>Bluex Bulbs</td><td>N/A</td><td>rood lichtbron</td></tr><tr><td>Arduino IDE Software</td><td>Arduino</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Biosafety Cabinet, Class II</td><td>NuAire</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Bright-Line Hemocytometer</td><td>Hausser Scientific</td><td>3110</td><td></td></tr><tr><td>Cell counting slides</td><td>BioRad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>Cell Culture Plate 96-well, #1.5H glass bottom plate</td><td>Cellvis</td><td>P96-1.5H-N</td><td></td></tr><tr><td>CytExpert Software</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX Ready to Use Daily QC Fluorospheres</td><td>Beckman Coulter</td><td>C65719</td><td>4 °C</td></tr><tr><td>CytoFLEX-S Flow Cytometer (4 violet, 2 blue, 4 Yellow Green, 3 Red channels)</td><td>Beckman Coulter</td><td>C09766</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline powder, no calicum, no magnesium</td><td>Fisher Scientific</td><td>21600069</td><td>Kamertemperatuur</td></tr><tr><td>Eppendorf Centrifuge 5804</td><td>Eppendorf</td><td>022622501</td><td>v-bottom plate centrifuge stap</td></tr><tr><td>Eppendorf Centrifuge 5810R</td><td>Eppendorf</td><td>22625501</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, 8-channel, variable volume, 30 - 300 μL</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, single-channel, variable volume, 100 - 1000 μL</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, single-channel, variable volume, 2 - 20 μL</td><td>Eppendorf</td><td>3123000039</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, single-channel, variable volume, 20 - 200 μL</td><td>Eppendorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>General Purpose Laboratory Labeling Tape</td><td>VWR</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM, powder, high glucose</td><td>Fisher Scientific</td><td>12100061</td><td>4 °C</td></tr><tr><td>Gibco Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-250-061</td><td>Kamertemperatuur</td></tr><tr><td>Gibco Value Heat Inactivated FBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>A5256901</td><td>-20 °C</td></tr><tr><td>Gibco, Trypsin-EDTA (0.05%), with EDTA, Animal Origin, 1X, Phenol Red, 500 mL</td><td>Gibco</td><td>25300062</td><td>-20 °C</td></tr><tr><td>HEK293T Cells</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td>-80 °C, vloeibare stikstof</td></tr><tr><td>Lab markers, Micronova</td><td>VWR</td><td>89205-944</td><td></td></tr><tr><td>Metal Desk Lamp</td><td>Simple Designs</td><td>N/A</td><td>Lamp voor rood licht</td></tr><tr><td>OptoPlate-96</td><td>LABmaker</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-aid XP</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Plasmid: CIBN-gRNA</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 °C</td></tr><tr><td>Plasmid: CMV-eGFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 °C</td></tr><tr><td>Plasmid: CRY2-eGFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>-20 °C</td></tr><tr><td>PolyJet DNA In Vitro Transfection Reagent</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1536117</td><td>4 °C</td></tr><tr><td>T-75 Cell Culture Flask</td><td>VWR</td><td>10062-860</td><td></td></tr><tr><td>Water Jacketed CO2 Incubator</td><td>VWR</td><td>10810-884</td><td></td></tr></tbody></table>

snelle optimalisatie van een licht-induceerbaar systeem om de genexpressie van zoogdieren te beheersen

Rapid Optimization of a Light-Inducible System to Control Mammalian Gene Expression

Snelle optimalisatie van een licht-induceerbaar systeem om de genexpressie van zoogdieren te beheersen

Inducible gene expression tools can open novel applications in human health and biotechnology, but current options are often expensive, difficult to ...

rapid-optimization-light-inducible-system-to-control-mammalian-gene

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

This video demonstrates the tetracycline, or Tet-On, gene expression system in a mouse model. In the presence of doxycycline, a tetracycline derivative, the Tet-On system consisting of reverse tetracycline-controlled transactivator protein becomes activated and expresses the gene of interest.

Inducible Tet-On Regulatable System-Based Gene Expression In Vivo: A Tetracycline-Induced Gene Expression System for Target Gene Transcription Activation in Mouse Model

Dit protocol beschrijft een experimentele procedure voor de snelle bouw van kunstmatige transcriptiefactoren (ATF) met verwante GFP verslaggevers en kwantificering van de ATFs mogelijkheid om GFP-expressie te stimuleren via flowcytometrie.

Rapid Synthese en Screening van chemisch geactiveerde transcriptie Factoren met GFP gebaseerde Reporters

De hier beschreven methode wordt gebruikt om de apoptotische signaleringskaskade te induceren in gedefinieerde stappen om de activiteit van een anti-apoptotisch bacterieel effector-eiwit te onderzoeken. Deze methode kan ook worden gebruikt voor inductieve expressie van pro-apoptotische of toxische eiwitten, of voor het onderzoeken van interferentie met andere signaalwegen.

Het toepassen van een induceerbare Expression Systeem om interferentie van bacteriële virulentiefactoren met intracellulaire signalering Studie

Dit protocol beschrijft een optogenetische strategie voor het moduleren van mitogeen-geactiveerde proteïne kinase (MAPK) activiteit tijdens celdifferentiatie en Xenopus embryonale ontwikkeling. Deze methode maakt het mogelijk om de omkeerbare activering van de MAPK signalering weg in zoogdiercelcultuur en in multicellulaire levende organismen, zoals Xenopus embryo's, met een hoge ruimtelijke en temporale resolutie.

Lichtgemedieerde Terugkeerbare Modulatie van de Mitogeen-Geactiveerde Proteïne Kinase Pathway tijdens Cell Differentiatie en<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonale Ontwikkeling

Hier presenteren we een protocol te analyseren van cel naar cel overdracht van oscillerende informatie door optogenetic control en live monitoring van genexpressie. Deze aanpak biedt een uniek platform om te testen een functionele betekenis van dynamische gen expressie programma's in meercellige systemen.

Een Optogenetic methode te controleren en analyseren van gen expressiepatronen in cel-naar-cel interacties

Dit protocol beschrijft de stappen die nodig zijn voor het genereren van een modelsysteem waarin de transcriptie van een endogene gen van belang voorwaardelijk kan worden gecontroleerd in de levende dieren of cellen met behulp van verbeterde lac -onderdrukker en/of tet activator systemen.

In vivo toepassing van het systeem van de afstandsbediening voor de manipulatie van de endogene genexpressie

Het betrouwbaar controleren van lichtgevoelige zoogdiercellen vereist de standaardisatie van optogenetische methoden. In de richting van dit doel schetst deze studie een pijplijn van gencircuitconstructie, celtechnologie, optogenetische apparatuur en verificatietests om de studie van door licht geïnduceerde genexpressie te standaardiseren met behulp van een negatief feedback optogenetisch gencircuit als casestudy.

Betrouwbare engineering en controle van stabiele optogenetische gencircuits in zoogdiercellen

Optogenetica is een krachtig hulpmiddel met uiteenlopende toepassingen. Dit protocol demonstreert hoe licht-induceerbare genexpressie in zebravisembryo's kan worden bereikt met behulp van het blauw licht-responsieve TAEL / C120-systeem.

Lichtgeïnduceerde GFP-expressie in zebravisembryo's met behulp van het optogenetische TAEL/C120-systeem

Bioluminescentie - licht uitgezonden door een luciferase-enzym dat een substraat met kleine moleculen oxideert, een luciferine - kan worden gebruikt om fotosensorische eiwitten te activeren, waardoor een andere dimensie wordt toegevoegd aan lichtstimulatie en de manipulatie van een veelheid aan lichtgemedieerde functies in cellen op temporele en ruimtelijke schalen mogelijk wordt.

Bioluminescente optogenetica 2.0: Bioluminescentie benutten om fotosensorische eiwitten in vitro en in vivo te activeren

Optogenetische controle van microbieel metabolisme biedt flexibele dynamische controle over fermentatieprocessen. Het protocol hier laat zien hoe blauw licht-gereguleerde fermentaties voor chemische en eiwitproductie op verschillende volumetrische schalen kunnen worden opgezet.

Lichtgestuurde fermentaties voor microbiële chemische en eiwitproductie

Dit protocol beschrijft de toepassing van een gemanipuleerd blauw-licht-geactiveerd allosterisch schakelaar (LightR) domein voor omkeerbare spatiotemporele controle van eiwitactiviteit. Door gebruik te maken van Src-tyrosinekinase als model, biedt deze studie een uitgebreid protocol voor het ontwikkelen en karakteriseren van lichtgereguleerde Src (LightR-Src). Het demonstreert de veelzijdigheid van deze aanpak in alle enzymklassen.

Spatiotemporele controle van eiwitactiviteit door optogenetische allosterische regulatie

Leer hoe je een licht-induceerbaar systeem optimaliseert voor genexpressie in HEK293T-cellen met behulp van een 3D-geprinte LED-array. Deze methode verbetert de efficiëntie van optogenetische experimenten aanzienlijk.

Snelle optimalisatie van een licht-induceerbaar systeem om de genexpressie van zoogdieren te beheersen

Meer video's verkennen