Name: Kwantificering van de opname van endotheliale vetzuren met behulp van fluorescerende vetzuuranalogen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Leer hoe u de opname van vetzuren in endotheelcellen kwantificeert met fluorescerende BODIPY-analogen. Dit in vitro-assay biedt een betrouwbare methode om lipidenmetabolisme te bestuderen en nieuwe therapeutische doelen voor metabole ziekten te identificeren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Schwenk, R. W., Holloway, G. P., Luiken, J. J. F. P., Bonen, A., Glatz, J. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+transport+across+the+cell+membrane%3A+regulation+by+fatty+acid+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Leukot+Essent+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Fatty acid transport across the cell membrane: regulation by fatty acid transporters.</a> Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 82 (4-6), 149-154 (2010).</li>
<li>He, Q., Chen, Y., Wang, Z., He, H., Yu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+uptake%2C+metabolism+and+sensing+of+long-chain+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Landmark+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Cellular uptake, metabolism and sensing of long-chain fatty acids.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 28 (1), 10(2023).</li>
<li>Mashek, D. G., Coleman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+fatty+acid+uptake%3A+the+contribution+of+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Cellular fatty acid uptake: the contribution of metabolism.</a> Curr Opin Lipidol. 17 (3), 274-278 (2006).</li>
<li>Jang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+branched-chain+amino+acid+metabolite+drives+vascular+fatty+acid+transport+and+causes+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A branched-chain amino acid metabolite drives vascular fatty acid transport and causes insulin resistance.</a> Nat Med. 22 (4), 421-426 (2016).</li>
<li>Hagberg, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+B+controls+endothelial+fatty+acid+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor B controls endothelial fatty acid uptake.</a> Nature. 464 (7290), 917-921 (2010).</li>
<li>Hwangbo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+APLNR+regulates+tissue+fatty+acid+uptake+and+is+essential+for+apelin%27s+glucose-lowering+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial APLNR regulates tissue fatty acid uptake and is essential for apelin's glucose-lowering effects.</a> Sci Transl Med. 9 (407), eaad4000(2017).</li>
<li>Ibrahim, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-stimulated+adipocytes+secrete+lactate+to+promote+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin-stimulated adipocytes secrete lactate to promote endothelial fatty acid uptake and transport.</a> J Cell Sci. 135 (5), jcs258964(2022).</li>
<li>Kuo, A., Lee, M. Y., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+biogenesis+and+function+in+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet biogenesis and function in the endothelium.</a> Circ Res. 120 (8), 1289-1297 (2017).</li>
<li>Ibrahim, A., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+endothelium+buffer+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Does endothelium buffer fat.</a> Circ Res. 120 (8), 1219-1221 (2017).</li>
<li>Kim, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+lipid+droplets+suppress+eNOS+to+link+high-fat+consumption+to+blood+pressure+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Endothelial lipid droplets suppress eNOS to link high-fat consumption to blood pressure elevation.</a> J Clin Invest. 133 (24), e173160(2023).</li>
<li>Dubikovskaya, E., Chudnovskiy, R., Karateev, G., Park, H. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+long-chain+fatty+acid+uptake+into+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Measurement of long-chain fatty acid uptake into adipocytes.</a> Methods Enzymol. 538, 107-134 (2014).</li>
<li>Watkins, O. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+13C-labeled+fatty+acids+in+term+human+placental+explants+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of 13C-labeled fatty acids in term human placental explants by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Endocrinology. 160 (6), 1394-1408 (2019).</li>
<li>Spangenburg, E. E., Pratt, S. J. P., Wohlers, L. M., Lovering, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+BODIPY+%28493%2F503%29+to+visualize+intramuscular+lipid+droplets+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Use of BODIPY (493/503) to visualize intramuscular lipid droplets in skeletal muscle.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 598358(2011).</li>
<li>Fraser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+uptake+in+diabetic+rat+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Fatty acid uptake in diabetic rat adipocytes.</a> Mol Cell Biochem. 167 (1-2), 51-60 (1997).</li>
<li>Ibrahim, A., Yucel, N., Kim, B., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+mitochondrial+ATP+production+regulates+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Local mitochondrial ATP production regulates endothelial fatty acid uptake and transport.</a> Cell Metab. 32 (2), 309-319.e7 (2020).</li>
<li>Mehling, M., Tay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microfluidic cell culture.</a> Curr Opin Biotechnol. 25, 95-102 (2014).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Maiullari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+breast+cancer+dynamics+through+modulable+small+vessel+environment+bioreactor+%28sVEB%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Modeling breast cancer dynamics through modulable small vessel environment bioreactor (sVEB).</a> Biomaterials. 323, 123441(2025).</li>
<li>Murphy, A. R., Franco, R. A., Allenby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabricating+microfluidic+co-cultures+of+immortalized+cell+lines+uncovers+robust+design+principles+for+the+simultaneous+formation+of+patterned%2C+vascularized%2C+and+stem+cell-derived+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Fabricating microfluidic co-cultures of immortalized cell lines uncovers robust design principles for the simultaneous formation of patterned, vascularized, and stem cell-derived adipose tissue.</a> Small. , e2501834(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-Hydroxyisobutyrate (3-HIB)</td><td>Cayman Chemicals</td><td>26105</td><td>Positieve controle, 5 of 20 mM eindconcentratie</td></tr><tr><td>96 well black, clear-bottom Polystyrene microplate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3603-48EA</td><td>Voor het plateren van cellen die worden getest</td></tr><tr><td>BODIPY FL C12 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3822</td><td>Groen fluorescerende lange keten vetzuur</td></tr><tr><td>BODIPY FL C16 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3821</td><td>Groen fluorescerend zeer lang keten vetzuur</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumine oplossing</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9205-50ML</td><td>Wordt gebruikt om Bodipy:BSA complex voor te bereiden</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>Oplosmiddel voor geneesmiddelvoorraden</td></tr><tr><td>Dispositieve pipetteer reservoirs</td><td>VWR</td><td>89094-680</td><td>Bevat de verschillende oplossingen die op de cellen moeten worden gepipetteerd</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Aangepast Medium van Eagle</td><td>Corning Life Sciences</td><td>10-013-CV</td><td>Media voor EA.hy926 cellen</td></tr><tr><td>EA.hy926 cellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-2922&nbsp;</td><td>Gekweekte hybride endotheelcel lijn</td></tr><tr><td>EGM-2 Endotheelcel Groei Medium-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>Media voor HUVECs</td></tr><tr><td>Fetaal Runderserum (FBS)&nbsp;</td><td>VWR</td><td>97068-085</td><td>10% supplement in EGM-2 en DMEM</td></tr><tr><td>Fluorescentie microplaat lezer</td><td>Verschillende</td><td>N/A</td><td>Elke microplaat lezer die in staat is tot fluorescentie metingen</td></tr><tr><td>Gelatine oplossing</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1393-100ml</td><td>Wordt gebruikt om platen te coaten bij 0,1% werkconcentratie</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 Oplossing</td><td>Life Science</td><td>62249</td><td>Kernkleuring voor cel normalisatie (4 &mu;M)</td></tr><tr><td>Human umbilical vein endothelial cellen (HUVECs)</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td>Primaire humane endotheelcellen</td></tr><tr><td>Multikanaals Pipet</td><td>VWR</td><td>76627-768</td><td>Voor pipetten in een 96-well plaat</td></tr><tr><td>Niclosamide&nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>N3510-50G</td><td>Negatieve controle, 1 &mu;M&nbsp; eindconcentratie</td></tr><tr><td>PBS, met calcium en magnesium</td><td>Fisher Scientific</td><td>21031CV</td><td>Wordt gebruikt voor het bereiden van behandelingen en als wasbuffer (met BSA)</td></tr><tr><td>PBS, zonder calcium en magnesium</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-508</td><td>Voor gelatine verdunning, Hoechst kleuring, en algemene wasbeurten</td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>1% supplement in EGM-2 en DMEM</td></tr><tr><td>Natrium L-lactaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7022-5G</td><td>Positieve controle, 5 of 20 mM eindconcentratie</td></tr><tr><td>Trypan Blauw oplossing</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20ML</td><td>Wordt gebruikt bij 0,08% om extracellulaire fluorescentie te doven</td></tr><tr><td>Vacuum Filter Systemen, 500ml PES Membraan, 0,45&micro;m</td><td>GenClone</td><td>25-227</td><td>Om gelatine oplossing te steriliseren</td></tr></tbody></table>

kwantificering van de opname van endotheliale vetzuren met behulp van fluorescerende vetzuuranalogen

Quantification of Endothelial Fatty Acid Uptake using Fluorescent Fatty Acid Analogs

Kwantificering van de opname van endotheliale vetzuren met behulp van fluorescerende vetzuuranalogen

Endothelial cells (ECs) play a central role in regulating fatty acid (FA) transport from the bloodstream into metabolic tissues, yet tools to quantify EC ...

quantification-endothelial-fatty-acid-uptake-using-fluorescent-fatty

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In this video, we demonstrate an ex vivo technique to measure extracellular glucose analog depletion in harvested mouse organs. It involves incubating the mouse tissue in a solution containing fluorescently-labeled deoxyglucose, which is taken up by the cells. The glucose analog uptake can be indirectly determined by measuring the fluorescence of the incubated medium.

Measurement of Extracellular Fluorescent Glucose Analog Depletion: A Surrogate Measurement Technique to Assess Glucose Uptake in Mouse Organs Ex Vivo

We rapporteren een in vitro methode die de kwantificering van het werkelijke aantal adhesieve cellen binnen een endotheelcelmonolaag mogelijk maakt.

Kwantificering van endotheelcellen Hechtvermogen<em&gt; In Vitro</em

We bieden een gedetailleerd protocol om galzuurdynamiek in levende cellen te bestuderen met behulp van een genetisch gecodeerde BAS FRET-sensor. Deze Galzuursensor vertegenwoordigt een uniek hulpmiddel om (regulatie van) galzuurtransport en FXR-activering in een breed scala aan celtypen te bestuderen.

Real-time monitoring van de intracellulaire Bile Acid Dynamics Met behulp van een genetisch gecodeerde FRET-gebaseerde Bile Acid Sensor

Primaire humane umbilicale veneuze endotheelcellen (HUVEC's) werden gekweekt tot confluentie binnen een microfluïdisch netwerkapparaat. De endotheliale celverbinding en F-actine-verdelingen werden geïllustreerd en de veranderingen in intracellulaire calciumconcentratie en stikstofmonoxideproductie als reactie op adenosinetrifosfaat (ATP) werden gequantificeerd in real-time op individueel cellniveau.

Ontwikkeling en karakterisering van<em&gt; In Vitro</em&gt; Microvaatje Netwerk- en kwantitatieve metingen van endotheliale [Ca<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; i</sub&gt; En productie van stikstofoxide

Vasculaire endotheel bepaalt strak leukocyte werving. Onvoldoende leukocyte extravasation draagt bij tot de inflammatoire ziekten bij de mens. Daarom is zoeken naar nieuwe regelgevende elementen van endothelial activering om te ontwerpen van verbeterde therapieën voor inflammatoire aandoeningen. Hier beschrijven we een uitgebreide methodologie om te karakteriseren roman endothelial regelgevers die leukocyte handel tijdens ontsteking kunnen wijzigen.

Screening tests karakteriseren roman Endothelial toezichthouders die betrokken zijn bij de ontstekingsreactie

Traditionele methoden voor de beoordeling van de differentiatie van de adipogenic zijn goedkoop en makkelijk te gebruiken, maar zijn niet specifiek voor wijzigingen in genexpressie. Hebben we een test om te kwantificeren mesenchymale celdifferentiatie in volwassen adipocytes met behulp van een specifieke marker van afkomst. Deze bepaling heeft diverse toepassingen in basisonderzoek en klinische geneeskunde.

Visualisatie en kwantificering van mesenchymale cel Adipogenic differentiatie mogelijkheden met een Lineage specifieke Marker

Dit protocol biedt een efficiënte aanpak voor het meten van LDL cholesterol opname met real-time toestroom tarieven met behulp van een levende cel imaging systeem in verschillende celtypen. Deze techniek biedt een platform voor het scherm van de farmacologische activiteit van verbindingen op het gebied van LDL toestroom terwijl monitoring voor cel morfologie en vandaar potentiële cytotoxiciteit.

LDL Cholesterol opname Assay met behulp van levende cellen Imaging analyse met mobiele gezondheidsmonitoring

Meting van in vitro cholesterol efflux capaciteit serum of plasma in macrofaag cel modellen is een veelbelovend instrument als een biomarker voor atherosclerose. In de huidige studie, optimaliseren wij en een fluorescerende NBD-cholesterol efflux methode standaardiseren en ontwikkelen van een hoge-doorvoer-analyse met behulp van 96-wells-platen.

High-throughput Nitrobenzoxadiazole-geëtiketteerden Cholesterol Efflux Assay

Geautomatiseerde assays met behulp van multi-well microplaten zijn voordelige benaderingen voor het identificeren van pathway-regulatoren door de beoordeling van een groot aantal omstandigheden in één experiment mogelijk te maken. Hier hebben we het gevestigde macropinosoombeeldvormings- en kwantificeringsprotocol aangepast aan een 96-well microplaatformaat en bieden we een uitgebreid overzicht voor automatisering met behulp van een multi-mode plaatlezer.

Geautomatiseerde beeldvorming en analyse voor de kwantificering van fluorescerend gelabelde macropinosomen

Hierin demonstreren we een geoptimaliseerd BODIPY 493/503 fluorescentie-gebaseerd protocol voor lipidedruppelkarakterisering in leverweefsel. Door het gebruik van orthogonale projecties en 3D-reconstructies maakt de fluorofoor een succesvolle discriminatie tussen microvesiculaire en macrovesiculaire steatose mogelijk en kan het een complementaire benadering zijn van de klassieke histologische protocollen voor de beoordeling van leversteatose.

Analyse van fluorescerend gekleurde lipidedruppels met 3D-reconstructie voor hepatische steatosebeoordeling

Leer hoe u de opname van vetzuren in endotheelcellen kwantificeert met fluorescerende BODIPY-analogen. Dit in vitro-assay biedt een betrouwbare methode om lipidenmetabolisme te bestuderen en nieuwe therapeutische doelen voor metabole ziekten te identificeren.

Kwantificering van de opname van endotheliale vetzuren met behulp van fluorescerende vetzuuranalogen

Meer video's verkennen