Doppler-echografie voor live beeldvorming en kwantificering van de ovariële vasculaire functie bij muizen

Dit onderzoek heeft als doel de preovulatoire ovariumbloedstroom in de urine te karakteriseren met behulp van een niet-invasieve in vivo methode. Het vakgebied mist niet-invasieve methoden om ovarium-vaatremodellering in realtime te bestuderen zonder de normale fysiologie bij muizen te verstoren. Om te beginnen schakelt u de hoofdstroom aan die zich aan de achterkant van het beeldvormingssysteem bevindt.

Na het opstarten van het systeem zet je de computer-standbyschakelaar aan de linkerkant van de cartridge om de monitor en computer wakker te maken. Verbind de MS700-transducer met de actieve transducerpoort op de beeldvormingsunit die zich op de meest rechtse poort bevindt. Lijn de vergrendelpen van de transducerconnector uit met de inkeping in de poort.

Duw de connector volledig in en draai de vergrendelingshendel in verticale positie om hem vast te zetten. Start de analysesoftware door op het software-icoon te klikken. Klik op Nieuw om een nieuwe studie aan te maken en kies de juiste naam uit het keuzemenu.

Voer in het venster Studieinformatie de naam van de studie in, naam van de serie. Het applicatiepakket is de eierstok en het meetpakket is vasculair. Zodra het programma opent en de transducer automatisch wordt gedetecteerd, selecteer je het ovariumapplicatiepakket.

Breng vervolgens een kleine hoeveelheid elektrodecrème aan op elk van de elektroden om goed contact te garanderen voor hartslagmeting. Zodra het dier volledig is gesedeerd, leid je de gasstroom om door de stopkraan naar de neuskegel op het beeldplatform te openen en de stopkraan naar de inductiekamer te sluiten. Breng de muis voorzichtig over op het verwarmde beeldplatform.

Plaats de muis in de buikligging met de rugzijde naar boven gericht en bevestig de neuskegel over de neus om de narcose te behouden. Plak elke voet in de elektrodecrème op het bijbehorende elektrodepad voor fysiologische monitoring. Breng oogzalf aan op de ogen om te voorkomen dat het hoornvlies droog wordt tijdens de narcose.

Controleer de diepte van de anesthesie met de teenknijpreflex. Controleer de vitale functies van het dier, zoals ademhaling en hartslag, bewegingen die ongemak aangeven, en de temperatuur van het platform elke vijf minuten. Vervolgens scheert u het onderste rechterkwadrant van de rug met een elektrische scheermachine van het rechterachterbeen tot de middenlijn, waarbij u lateraal blijft ten opzichte van de wervelkolom.

Breng een dun laagje bodyhair remover crème aan. Na een minuut veeg je de crème grondig af met vochtig gaas. Breng vervolgens een royale en gelijkmatige laag ultrageluidgel aan op het geschoren gebied.

Plaats de transducerprobe in transversale modus ten opzichte van de muis op de mechanische standaard met de oriëntatieinkeping naar links van de operator. Zet de sonde vast met de klem. Druk op de B-Mode-toets op het bedieningspaneel om het standaard grijstintenbeeldvenster te activeren.

Zorg ervoor dat de muis en het platform vlak zijn en dat de transducer loodrecht op het oppervlak staat. Trek vervolgens de huid naar links en plaats de transducer dicht bij het bovenste geschoren gebied, dichter bij de middenlijn van de rug. Laat de transducer voorzichtig zakken op het geschoren gebied dat is bedekt met ultrasone gel.

Lijn de linkerrand van de sonde uit met de ruggengraat en de rechterrand over de rechterflank. Om de eierstok te identificeren, identificeer je eerst de nier, een grote lichtgrijze ovale structuur met cortex en medulla. Duw het beeldvormingsplatform iets richting de kop van de muis om het eierstok- en periovariumvetweefsel te onthullen.

Druk op de Cine Store-knop om de B-Mode video vast te leggen. Druk nu op de knop voor Power Doppler Mode op het bedieningspaneel om bloedvaten te visualiseren met een hoge gevoeligheid voor lage stroomsnelheid. Stel de Dopplerversterking aan op 32 tot 55 decibel, gevoeligheid op 5, dynamisch bereik op 15 DR en snelheid op één kilohertz.

Beweeg het platform voorzichtig heen en weer om het beste zicht op de ovariumvaat te krijgen en identificeer de ovariumslagader die het ovarium-hilum binnenkomt, de medullaire vaten in de centrale medulla en corticale vaten rond zich ontwikkelende follikels. Druk op Cine Store om de weergegeven video van de eierstok en de bloedvaten in Power Doppler-modus op te slaan. Om arteriële en veneuze stroming te onderscheiden, druk je op Color Doppler Mode.

Rood geeft stroom naar de transducer toe en blauw toont stroming weg daarvan. Het vat met de hogere gemiddelde snelheid is de eierstokslagader. Druk op de Pulsed Wave PW Doppler-knop om de voorbeelddatumlijnen te openen.

Druk nogmaals om de Doppler Spectrale Golfvorm te activeren. Na het plaatsen van de monsterpoort in het midden van het vatlumen, stel je de insonatiehoek in op minder dan of gelijk aan 60 graden en parallel aan de stroming met behulp van de hoekknop. Voor de ovariumslagader plaats je de poort net voordat deze de eierstok binnenkomt.

Voor het medullaire vat plaats je het bij de centrale bifurcatie. Voor corticale vaten plaats je het aan de basis van een groeiend follikel. Druk op Cine Store om zowel het echobeeld als de spectrale golfvorm op te slaan.

Wanneer de beeldvorming klaar is, veeg je de echogel van de achterkant en haal je de muis voorzichtig van het beeldvormingsplatform. En leg de muis op een warmtekussen tot hij helemaal wakker is. Power Doppler Imaging toonde een zichtbare toename van de overvloed in de medullaire vaten na één uur na de menselijke choriongonadotrofine-injectie, gevolgd door een terugkeer naar de basislijn na acht uur en verdere afname met 12 uur na de injectie.

Color Doppler Imaging maakte een duidelijk onderscheid mogelijk tussen de ovariumslagader en de ovariumader en verbeterde de visualisatie van de stromingsrichting binnen de eierstokvaten. Representatieve PW Doppler-golfvormen vertoonden verschillende cycli met meetbare piek-systolische en einddiastolische snelheden in de eierstokslagader van een hormonaal responsieve muis, terwijl een niet-responsieve muis lage signaalsporen vertoonde zonder detecteerbare golfvorm. Een uur na de injectie van de menselijke choriongonadotrofine nam de bloedstroomsnelheid toe in de eierstokarterie, medullaire vaten en corticale vaten bij muizen die reageerden op stimulatie, maar bij de niet-responsieve muis werd geen dergelijke toename waargenomen.

Bij niet-responsieve muizen daalde de snelheid in corticale vaten onder de detectiedrempel op geselecteerde tijdstippen die werden aangegeven door tijdelijke waardes. Met behulp van Doppler-echografie hebben we vastgesteld dat de bloedstroom van de eierstokken snel toeneemt na een DLH-piek bij muizen. Doppler-echografie maakt een herhaalde, niet-invasieve beoordeling van de eierstokhemodynamica tijdens de preovulatieperiode mogelijk, wat andere methoden niet kunnen bereiken.

Na het karakteriseren van normale preovulatoire hemodynamica kunnen toekomstige studies dit protocol nu gebruiken om bloedstroomverstoringen in modellen van eierstokaandoeningen zoals PCOS te onderzoeken.