Name: Beeldvorming van levende cellen van endocytisch transport met behulp van gefunctionaliseerde nanobodies in gekweekte cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Leer endocytisch transport van transmembraanproteïnen visualiseren met gefunctionaliseerde nanobodies in HeLa-cellen. Deze methode kwantificeert eiwitdynamiek via levende-celmicroscopie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>Anti-GFP antilichaam&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>118144600001</td><td>Product wordt gedistribueerd door Sigma-Aldrich, maar geproduceerd door Roche</td></tr><tr><td>100-mm celkweekschalen</td><td>TPP</td><td>TPP93100</td><td></td></tr><tr><td>Anti-actin antilichaam</td><td>EMD Millipore&nbsp;</td><td>MAB1501</td><td></td></tr><tr><td>Anti-HA antilichaam</td><td>van lab</td><td>gemaakt van 12CA5 hybridoma</td><td></td></tr><tr><td>Anti-His6 antilichaam</td><td>Bethyl Laboratories&nbsp;</td><td>A190-114A</td><td></td></tr><tr><td>Anti-T7 antilichaam&nbsp;</td><td>Bethyl Laboratories&nbsp;</td><td>A190-117A</td><td></td></tr><tr><td>BL21(DE3) Competent&nbsp;E. coli</td><td>NEB</td><td>C2527H</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchloride dihydraat</td><td>Merck Millipore</td><td>102382</td><td>opgelost in steriel water, stock is 1 M</td></tr><tr><td>Carbenicilline dinatriumzout</td><td>Applichem</td><td>A1491</td><td>opgelost in steriel water, stock is 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Coomassie-R (Brilliant Blue)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-0149</td><td></td></tr><tr><td>D-biotine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4501</td><td>opgelost in steriel 500 mM NaH2PO4 of DMSO</td></tr><tr><td>Wegwerp PD10 ontzoutingskolommen</td><td>GE Healthcare</td><td>GE17-0851-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM GlutaMAX-I</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>61965026</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, hoge glucose, geen glutamine, geen fenol rood</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31053028</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Applichem</td><td>A3778</td><td>opgelost in steriel water</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s fosfaatgebufferde zoutoplossing (DPBS) zonder Ca2+/Mg2+</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Foetaal runderserum (FBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S, PES, porengrootte: 0,45 &micro;m</td><td>Sarstedt</td><td>83.1826</td><td></td></tr><tr><td>FuGENE HD transfectie reagens</td><td>Promega&nbsp;</td><td>E2311</td><td></td></tr><tr><td>Glazen dekplekjes (nr. 1.5H)</td><td>VWR</td><td>631-0153</td><td></td></tr><tr><td>Geit anti-muis HRP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-0168</td><td></td></tr><tr><td>Geit anti-konijn HRP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-0545</td><td></td></tr><tr><td>His buffer kit</td><td>Cytvia</td><td>11003400</td><td></td></tr><tr><td>His GraviTrap kolommen</td><td>Cytvia</td><td>11003399</td><td></td></tr><tr><td>ibidi &micro;-Slide 4 well, ibiTreat</td><td>80426-IBI</td><td>ibidi</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl-&beta;-D-thiogalactopyranosid (IPTG)</td><td>Applichem</td><td>A1008</td><td>opgelost in steriel water, stock is 1 M</td></tr><tr><td>Kanamycin sulfaat</td><td>Applichem</td><td>A1493</td><td>opgelost in steriel water, stock is 100 mg/mL</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Applichem</td><td>A3704</td><td></td></tr><tr><td>Lysozym&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>18037059001</td><td>Product wordt gedistribueerd door Sigma-Aldrich, maar geproduceerd door Roche</td></tr><tr><td>Magnesiumchloride hexahydraat</td><td>Merck Millipore</td><td>105833</td><td>opgelost in steriel water, stock is 1 M</td></tr><tr><td>Mini-Protean TGX gels, 4-20%, 15-well</td><td>Bio-Rad</td><td>4561096</td><td></td></tr><tr><td>Gemodificeerd HeLa Kyoto</td><td>van lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NEB5-alpha Competent&nbsp;E. coli</td><td>NEB</td><td>C2987U</td><td></td></tr><tr><td>NucleoBond Xtra Midi Plus, 10 preps</td><td>Macherey-Nagel&nbsp;</td><td>740412.1</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine</td><td>Bioconcept&nbsp;</td><td>4-01F00-H</td><td></td></tr><tr><td>Fenylmethylsulfonylfluoride (PMSF)</td><td>Applichem</td><td>A0999.0025</td><td>opgelost in 40% DMSO 60% isopropanol, stock in 500 mM</td></tr><tr><td>Phoenix ampho cellijn</td><td>Nolan lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polybreen (hexadimethrine bromide)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9268</td><td></td></tr><tr><td>Puromycine</td><td>Invivogen</td><td>ant-pr-1</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchloride&nbsp;</td><td>Merck Millipore</td><td>106404</td><td>opgelost in steriel water, stock is 5 M</td></tr><tr><td>Natriumpyrovaat&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360039</td><td></td></tr><tr><td>Trans-Blot Turbo Pack, mini</td><td>Bio-Rad</td><td>1704158</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Applichem</td><td>A1553</td><td></td></tr><tr><td>Gistextract&nbsp;</td><td>Applichem</td><td>A1552</td><td></td></tr></tbody></table>

beeldvorming van levende cellen van endocytisch transport met behulp van gefunctionaliseerde nanobodies in gekweekte cellen

Live-cell Imaging of Endocytic Transport using Functionalized Nanobodies in Cultured Cells

Beeldvorming van levende cellen van endocytisch transport met behulp van gefunctionaliseerde nanobodies in gekweekte cellen

Endocytosis of receptors and other transmembrane proteins from the cell surface to endosomes and beyond is critical for homeostasis, physiology, and ...

live-cell-imaging-endocytic-transport-using-functionalized-nanobodies

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Live-cell imaging is met name van nut bij het bestuderen van de dynamiek van organel mensenhandel. Hier beschrijven we een protocol voor live beeldvorming van dense-core blaasjes in gekweekte neuronen met behulp van wide-field fluorescentie microscopie. Dit protocol is flexibel en kan worden aangepast aan image andere organellen, zoals mitochondriën, endosomen, en peroxisomen.

Live-Imaging van dicht-core Blaasjes in het jeugdwerk Gekweekte hippocampale neuronen

Source: Zhang, Y., et al. Application of Fluorescent Nanoparticles to Study Remodeling of the Endo-lysosomal System by Intracellular Bacteria. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the use of fluorescent nanoparticles to visualize endo-lysosomal remodeling in human epithelial cells infected by intracellular bacteria. Following bacterial invasion, the pathogens manipulate the host cytoskeleton and endo-lysosomal system, forming vacuoles with tubular projections that alter vesicle transport.

Nanoparticle-Mediated Visualization of Endo-Lysosomal Remodeling in Bacterially-Infected Cells

This video demonstrates a method to study the uptake and retrograde transport of functionalized nanobodies to understand their intracellular trafficking pathways. By introducing radiolabelled sulfate and utilizing isolation and detection techniques, this method enables the study of endocytic uptake and trans-Golgi network arrival of cargo proteins.

Monitoring the Arrival of GFP-Tagged Surface Proteins to the Trans-Golgi Network Using Functionalized Nanobodies

This video demonstrates how neuronal vesicles are labeled with specific fluorescent proteins to visualize their movement. First, a plasmid coding for a fluorescent protein is incubated with a transfection agent and then introduced into a culture of neurons. Subsequently, images of the neurons are acquired and analyzed to track the vesicles' movement.

Visualization of Vesicle Motilities in Neurons Using Fluorescence Imaging

We beschrijven beeldvormingsbenaderingen we gebruiken om de verdeling en mobiliteit van de getransfecteerde fluorescerende eiwitten in het endoplasmatisch reticulum (ER) inwoner via de confocale beeldvorming van levende cellen te onderzoeken. We hebben ook ultrastructureel analyseren het effect van hun expressie op de architectuur van deze subcellulaire compartiment.

Visualisatie van endoplasmatisch reticulum subdomeinen bij gekweekte cellen

We beschrijven een methode om eiwit label op het oppervlak van levende neuronen met een specifiek polyklonaal antilichaam tegen extracellulaire epitopen. Eiwit door het antilichaam gebonden op het celoppervlak en vervolgens geïnternaliseerd via endocytose kunnen worden onderscheiden van eiwitten nog op of verhandeld bij het oppervlak tijdens de incubatie.

Differentiële Labeling van Cell-oppervlak en Internalized Eiwitten na Antibody Voeden van Levende gekweekte neuronen

Dit artikel beschrijft methoden voor de synthese en TL-etikettering van nanodeeltjes (NP). De NP's werden toegepast in pulse-chase experimenten om de endo-lysosomale systeem van eukaryotische cellen te labelen. Manipulatie van de endo-lysosomale systeem door de activiteiten van de intracellulaire pathogeen Salmonella enterica werden gevolgd door live cell imaging en gekwantificeerd.

Toepassing van TL Nanodeeltjes naar herinrichting van de Endo-lysosomale systeem Bestudeer door intracellulaire bacteriën

Live-cel imaging is een krachtig hulpmiddel voor het visualiseren van dynamische processen. Het onderzoek van vaste cellen biedt alleen statische afbeeldingen, die tot verkeerde interpretaties en verwarring over het proces leiden kunnen. Dit werk presenteert een methode om te studeren opname, drug release en intracellulaire lokalisatie van liposomaal nanodeeltjes in levende cellen.

Met behulp van In Vitro Live-cel Imaging om te verkennen chemotherapeutica geleverd door lipide gebaseerde nanodeeltjes

Het onderzoek naar membraanhandel is cruciaal voor het begrijpen van neuronale functies. Hier introduceren we een methode voor het kwantificeren van vesikelmotiliteit in neuronen. Dit is een handige methode die kan worden aangepast aan de kwantificering van membraanhandel in het zenuwstelsel.

Kwantificering van Endosome en Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

Retrograde vervoer van eiwitten uit het celoppervlak naar het Golgi is essentieel voor het handhaven van de membraan homeostase. Hier beschrijven we een methode om biochemically cel oppervlak-te-Golgi vervoer van recombinante eiwitten matiemaatschappij nanobodies met HeLa cellen te analyseren.

Analyse van endocytotische opname en Retrograde Transport naar het netwerk van de Trans-Golgi matiemaatschappij Nanobodies, waarbij in gekweekte cellen

Leer endocytisch transport van transmembraanproteïnen visualiseren met gefunctionaliseerde nanobodies in HeLa-cellen. Deze methode kwantificeert eiwitdynamiek via levende-celmicroscopie.

Beeldvorming van levende cellen van endocytisch transport met behulp van gefunctionaliseerde nanobodies in gekweekte cellen

Meer video's verkennen