Name: Lokalisatie van plasmamembraan en intracellulaire neuronale nicotinische acetylcholinereceptoren met behulp van kwantitatieve beeldvorming in zoogdiercellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T14:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Leer de lokalisatie van neuronale nicotinische acetylcholinereceptoren in zoogdiercellen met pH-gevoelige fluorescentie en confocale microscopie. Deze methode kwantificeert oppervlakte- en intracellulaire receptorpopulaties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>0.25% Trypsin-EDTA (1X)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Celafscheidingsreagens</td></tr><tr><td>Alpha-Bungarotoxin Alexa Fluor 647</td><td>Invitrogen</td><td>B35450</td><td>Alpha-Bungarotoxin-conjugaat</td></tr><tr><td>BSL-level 1 Biosafety Cabinet&nbsp;</td><td>Nuaire</td><td>NU-425-400</td><td>Steriele werkruimte voor celcultuur</td></tr><tr><td>Calcium chloride</td><td>Aventor/VWR</td><td>BDH9224</td><td>Buffercomponent</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>MilliPore Sigma&nbsp;</td><td>G8270</td><td>Buffercomponent</td></tr><tr><td>EMEM met L-glutamine</td><td>ATCC</td><td>30-2003</td><td>Cellmedium</td></tr><tr><td>Endotoxin-vrij DNA</td><td>Zelf gemaakt met behulp van Zymo-kits</td><td>niet van toepassing</td><td>nAChR DNA's te gebruiken voor cellulaire tijdelijke transfecties</td></tr><tr><td>Endotoxin-vrije microcentrifugebuizen, 0.5 mL&nbsp;</td><td>Aventor/VWR</td><td>89000-010</td><td>DNA- en transfectievoorbereiding</td></tr><tr><td>Endotoxin-vrije microcentrifugebuizen, 1.5 mL&nbsp;</td><td>Aventor/VWR</td><td>20170-038</td><td>DNA- en transfectievoorbereiding</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Aventor/VWR</td><td>97068-085</td><td>Serumsupplement</td></tr><tr><td>Fluoview FV10i</td><td>Olympus</td><td>FV10i</td><td>Confocale microscoop</td></tr><tr><td>Glass Bottom MatTek Dishes</td><td>MatTek</td><td>P35GC-0-10-C</td><td>Beeldvormingsschotels</td></tr><tr><td>GraphPad Prism v. 10</td><td>GraphPad Prism</td><td>https://www.graphpad.com/features</td><td>Data-analysesoftware</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>MilliPore Sigma&nbsp;</td><td>H3375</td><td>Buffercomponent</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>Transfectiereagens</td></tr><tr><td>Magnesium chloride hexahydrate</td><td>Thermo scientific</td><td>413410025</td><td>Buffercomponent</td></tr><tr><td>MES hydrate</td><td>MilliPore Sigma&nbsp;</td><td>M5287</td><td>Buffercomponent</td></tr><tr><td>mTagBFP2-pBAD</td><td>AddGene&nbsp;</td><td>54572</td><td>Controle-DNA voor cellulaire tijdelijke transfectie&nbsp;</td></tr><tr><td>Neuro 2 a (N2a) cellen</td><td>American Type Culture Collection</td><td>CCL-131</td><td>Cellen gebruikt voor DNA-transfecties en nAChR-expressie</td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td>Medium met verminderd serum</td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine</td><td>Aventor/VWR</td><td>K952-100mL</td><td>Antibioticum</td></tr><tr><td>Peristaltiekpomp</td><td>Gilson</td><td>MiniPuls3</td><td>Bufferwijzigingen bij beeldvorming&nbsp;</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>Quality Biological</td><td>119-069-131</td><td>Salinebuffer</td></tr><tr><td>Pipet Aid</td><td>Drummond&nbsp;</td><td>140084</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Pipet tips (steriele en endotoxine-vrije, 1000uL)</td><td>Rainin</td><td>30389216</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Pipet tips (steriele en endotoxine-vrije, 20uL)</td><td>Rainin</td><td>30389229</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Pipet tips (steriele en endotoxine-vrije, 250uL )</td><td>Rainin</td><td>30389246</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Pipetten, P10</td><td>Rainin&nbsp;</td><td>L-10XLS</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Pipetten, P100</td><td>Rainin&nbsp;</td><td>L-100XLS</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Pipetten, P1000</td><td>Rainin&nbsp;</td><td>L-1000XLS</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Kaliumchloride</td><td>MilliPore Sigma&nbsp;</td><td>P3911</td><td>Buffercomponent</td></tr><tr><td>Serologische pipetten (steriele en endotoxine-vrije, 10 ML )</td><td>Aventor/VWR</td><td>89130-898</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Serologische pipetten (steriele en endotoxine-vrije, 25 mL )</td><td>Aventor/VWR</td><td>89130-900</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Serologische pipetten (steriele en endotoxine-vrije, 5 mL )</td><td>Aventor/VWR</td><td>76201-710</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Serologische pipetten (steriele en endotoxine-vrije, 50 mL )</td><td>Aventor/VWR</td><td>75816-088</td><td>Precies vloeistoftransport</td></tr><tr><td>Natriumchloride</td><td>Aventor/VWR</td><td>BDH9286</td><td>Buffercomponent</td></tr><tr><td>Weefselkweekflacon</td><td>Falcon</td><td>353109</td><td>Groeiende schotels</td></tr><tr><td>ZymoPure II Plasmid Maxiprep Kit</td><td>ZYMO RESEARCH</td><td>D4203-A + D4203-B</td><td>Productie van endotoxine-vrij DNA</td></tr><tr><td>&alpha;4-SEP&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific GeneArt Gene Synthesis Services&nbsp;&nbsp;</td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/c-misc/geneart.html</td><td>Diensten voor aangepaste gensyntheses</td></tr><tr><td>&alpha;7-pHuji</td><td>Twist Bioscience</td><td>https://www.twistbioscience.com/</td><td>Diensten voor aangepaste gensyntheses</td></tr><tr><td>&beta;2-pHuji</td><td>ThermoFisher Scientific GeneArt Gene Synthesis Services&nbsp;&nbsp;</td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/c-misc/geneart.html</td><td>Diensten voor aangepaste gensyntheses</td></tr></tbody></table>

lokalisatie van plasmamembraan en intracellulaire neuronale nicotinische acetylcholinereceptoren met behulp van kwantitatieve beeldvorming in zoogdiercellen

Localization of Plasma Membrane and Intracellular Neuronal Nicotinic Acetylcholine Receptors Using Quantitative Imaging in Mammalian Cells

Lokalisatie van plasmamembraan en intracellulaire neuronale nicotinische acetylcholinereceptoren met behulp van kwantitatieve beeldvorming in zoogdiercellen

Quantification of neuronal nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) expressed on the plasma membrane of mammalian cells is important for the development ...

localization-plasma-membrane-intracellular-neuronal-nicotinic

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

We hebben een nieuwe techniek van het kwantificeren van nicotine acetylcholine receptor veranderingen binnen subcellulaire regio's van specifieke subtypes van CNS neuronen beter de mechanismen van de nicotine verslaving te begrijpen met behulp van een combinatie van benaderingen waaronder fluorescerend eiwit tagging van de receptor met behulp van de knock-in aanpak en spectrale confocale beeldvorming.

Spectrale confocale beelden van de fluorescent gelabeld nicotinereceptoren in de knock-in muizen met chronische Nicotine Administratie

Tagging door de extracellulaire domeinen van membraanreceptoren met superecliptic pHluorin, en imaging deze fusie-receptoren in gekweekte muis neuronen, kunnen we direct visualiseren individuele vesiculaire inbrengen gebeurtenissen van de receptoren aan het plasmamembraan. Deze techniek zal instrumenteel ophelderen van de moleculaire mechanismen voor insertie receptor naar de plasmamembraan.

Imaging pHluorin-tagged Receptor invoegen in op het plasmamembraan in primaire gekweekte muis neuronen

Source: Zhang, J., et al. High-Resolution Quantitative Immunogold Analysis of Membrane Receptors at Retinal Ribbon Synapses. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates an electron microscopy technique for visualizing neurotransmitter receptor localization in retinal synapses. The retinal sections contain retinal ganglion cells that exhibit membrane-bound neurotransmitter receptors and are labeled with cholera toxin subunit B (CTB). Upon labeling the markers with gold nanoparticle-conjugated...

High-Resolution Imaging of Neurotransmitter Receptors at Retinal Synapses

In dit artikel beschrijven we een bruikbare methode om ligand-gated ionkanalen functie te bestuderen in neuronen van acuut geïsoleerd hersenen plakjes. Deze methode omvat het gebruik van een geneesmiddel gevulde micropipet voor lokale toepassing van geneesmiddelen voor neuronen opgenomen met standaard patch-clamp technieken.

Lokale toepassing van geneesmiddelen aan nicotine acetylcholine receptor functie in de hersenen van muizen Slices Studie

We ontwikkelden een gen-chimerische voorbereiding van de ventrale hippocampale - accumbens-circuit in vitro die direct live beeldvorming mogelijk maakt om presynaptische mechanismen van nicotinische acetylcholine receptoren (nAChR's) gemedieerde synaptische transmissie te analyseren. Deze voorbereiding biedt ook een informatieve aanpak om de pre- en post-sygnatische mechanismen van synaptische plasticiteit te bestuderen.

Live-Imaging van Nicotine Induced Calcium Signaling en neurotransmitterafgifte Samen ventrale hippocampus Axons

De postembedding immunogold-methode is een van de meest effectieve manieren om hoogwaardige analyses van de subcellulaire lokalisatie van specifieke moleculen te leveren. Hier beschrijven we een protocol om glutamaatreceptoren bij retinale lintsynapsen kwantitatief te analyseren.

High-Resolution Kwantitatieve immunogoud Analyse van membraanreceptoren op het netvlies Ribbon Synapses

Lichtmicroscooptechnieken gekoppeld aan biochemische analyses verduidelijken de betrokkenheid van SNARE-gemedieerde exocytose bij netrine-afhankelijke axonvertakking. Deze combinatie van technieken maakt identificatie mogelijk van moleculaire mechanismen die axonvertakking en celvormverandering controleren.

Gebruik makend van gecombineerde methoden om de rol van de plasmamembraan Delivery Tijdens Axon vertakking en neuronale Morphogenesis Definieer

Labelen van de extracellulaire domein van een membraaneiwit met een pH-gevoelige fluorofoor, superecliptic pHluorin (SEP), maakt lokalisatie, expressie en mensenhandel worden bepaald. Imaging september-gemerkte eiwitten met totale interne reflectie fluorescentie microscopie (TIRFM) maakt de kwantificering van eiwitniveaus in de perifere ER en plasmamembraan.

Gebruik makend van pHluorin-gelabeld receptoren Monitor subcellulaire lokalisatie en handel

Dit artikel presenteert een methode voor het bestuderen van nicotinerge acetylcholine-receptoren (nAChRs) in muis hersenen plakjes door nicotine uncaging. Wanneer in combinatie met de gelijktijdige patch klem opname en 2-foton laser scanning microscopie, verbindt nicotine uncaging nicotinerge receptor functie met cellulaire morfologie, bieden een dieper begrip van cholinerge neurobiologie.

Indringende nicotinerge Acetylcholine Receptor functie in muis segmenten van de hersenen via Laser Flash fotolyse van Photoactivatable Nicotine

Hier beschrijven we een kwantitatieve benadering bij de vaststelling van de verdeling van een synaptic eiwit ten opzichte van een marker eiwit met immunofluorescentie kleuring, confocal microscopie en computer-gebaseerde analyse.

Kwantificeren van de heterogene verdeling van een Synaptic proteïne in de hersenen van de muis met immunofluorescentie

De huidige methoden beschrijven een niet-ratiometrische benadering voor hoge resolutie, sub-compartimentale calciumbeeldvorming in vivo in Caenorhabditis elegans met behulp van direct beschikbare genetisch gecodeerde calciumindicatoren.

Subcellulaire beeldvorming van neuronale calciumbehandeling in vivo

Leer de lokalisatie van neuronale nicotinische acetylcholinereceptoren in zoogdiercellen met pH-gevoelige fluorescentie en confocale microscopie. Deze methode kwantificeert oppervlakte- en intracellulaire receptorpopulaties.

Lokalisatie van plasmamembraan en intracellulaire neuronale nicotinische acetylcholinereceptoren met behulp van kwantitatieve beeldvorming in zoogdiercellen (Video) | JoVE Journal

Lokalisatie van plasmamembraan en intracellulaire neuronale nicotinische acetylcholinereceptoren met behulp van kwantitatieve beeldvorming in zoogdiercellen

Meer video's verkennen