Name: Generatie van een model gebaseerd op een muisprostaatorganoïde voor het bestuderen van gastheer-pathogeen interacties (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Leer hoe u een tweedimensionaal prostaatepitheelmodel genereert uit muizenorganoiden voor het bestuderen van gastheer-pathogeen interacties met uropathogene Escherichia coli. Dit protocol behoudt cellulaire diversiteit en maakt gedetailleerde infectieanalyses mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>48 well plates</td><td>Sarstedt</td><td>83.3923</td><td>Bottom shape: flat</td></tr><tr><td>5&alpha;-Androstan-17&beta;-ol-3-one dihydrotestosterone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8380</td><td>It was designated as DHT. Stock solution 10&mu;M in 100% ethanol</td></tr><tr><td>8-well PET slide with 40 electrodes per well&nbsp;</td><td>Applied Biophysics</td><td>8W10E+</td><td>Slides used for TEER measurments</td></tr><tr><td>96 well plates</td><td>Sarstedt</td><td>82.1583</td><td>Bottom shape: conical</td></tr><tr><td>Advance Dulbecco&rsquo;s modified Eagle medium/F12&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12634028</td><td>It was designated adDMEM/F12+/+ when supplemented with 10 mmol L&minus;1 HEPES and 1x GlutaMAX</td></tr><tr><td>Ampicilin</td><td>Roth</td><td>K029.2&nbsp;</td><td>Concentration stock 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Anti-CD24a antibody</td><td>Proteintech</td><td>10600-1-AP</td><td>Primary antibody; dilution 1:100 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Anti-Cytokeratin 5 Alexa Fluor 647 antibody&nbsp;</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>ab193895</td><td>Primary antibody; dilution 1:100 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>anti-Rabbit IgG Alexa Fluor 488&nbsp;antibody</td><td>Invitrogen</td><td>A21441</td><td>Secondary antibody; dilution 1:500 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Anti-ZO-1 Polyclonal antibody</td><td>Proteintech</td><td>21773-1-AP</td><td>Primary antibody; dilution 1:750 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>B27, 50x</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin (BSA) Fraktion V, NZ-Origin</td><td>Roth</td><td>8076.3</td><td>Component of blocking buffer used at 1% in 1x PBS</td></tr><tr><td>chambered &micro;-Slide 8 Wells</td><td>Ibidi</td><td>80806</td><td>Surface modification: ibiTreat</td></tr><tr><td>Conical tube (15 mL)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T1943</td><td>The flat bottom is better for small pellets.&nbsp;</td></tr><tr><td>Disodium ethylenediaminetetra-acetate 2H2O (EDTA)</td><td>Roth&nbsp;</td><td>8043.2</td><td>Homemade: 93.0 g in 400 mL of H2O, adjust pH to 8.0, ajust the volume with H2O up to 500 mL; 0.5 M EDTA; component of flow cytometer buffer</td></tr><tr><td>Dulbecco's Balanced Salt Solution (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>PBS</td></tr><tr><td>ECHO Revolve Microscope&nbsp;</td><td>ECHO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ECIS&nbsp;Z-Theta -&nbsp; impedance-based cell analysis system</td><td>Applied Biophysics</td><td>ECIS&nbsp;Z-Theta</td><td>System includes: 16 and/or 96 well station; external control module; Laptop PC; ECIS control, acquisition, and display software; elevated field module for automated cell migration and electroporation&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS) Superior</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0615</td><td>Component of Flow cytometer buffer; component of culture medium of 293T Cell Line; component of culture medium HEK293T cell line</td></tr><tr><td>Flash Phalloidin Red 594</td><td>Biolegend</td><td>424203</td><td>Dilution 1:250 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Flow cytometer buffer</td><td></td><td></td><td>1x PBS, 10% FBS, 5 mM EDTA</td></tr><tr><td>Gentamicin&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G1272</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050-038</td><td>L-alanyl-L-glutamine dipeptide, component of adDMEM/F12+/+&nbsp;</td></tr><tr><td>Harvard Biochrom Ultrospec 10 Cell Density Meter</td><td>Fisher Scientific</td><td>10704417</td><td></td></tr><tr><td>HCS CellMask Deep Red stain</td><td>Life Technologies</td><td>H32721</td><td>Dilution 1:1,000 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>HEK293T cell line transfected with mouse Noggin-Fc expression vector</td><td>Cell line from Prof. Dr. Clevers</td><td></td><td>Used to produce Noggin; culture medium: 500ml DMEM, high glucose, GlutaMAX, pyruvate (Gibco Life Technologies, 31966)+ 50ml FBS; Farin et al. Gastroenterology 143.6 (2012): 1518-1529</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630056</td><td>Component of adDMEM/F12+/+&nbsp;</td></tr><tr><td>Hoechst 33342&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>H3570</td><td>Dilution 1:5,000 in 1x PBS</td></tr><tr><td>Human epidermal growth factor (EGF)&nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td>Concentration stock 500 &micro;g/mL</td></tr><tr><td>Inoculation loops</td><td>Sarstedt</td><td>86.1567.010</td><td></td></tr><tr><td>Inoculation tubes</td><td>Sarstedt</td><td>62.515.006</td><td></td></tr><tr><td>Leica Stellaris 5 confocal microscope</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luria Bertani Broth (LB broth)</td><td>Roth&nbsp;</td><td>X968.1</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>Extracellular Matrix (ECM)</td></tr><tr><td>N-Acetylcysteine&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165-25G</td><td>Concentration stock 500 mM</td></tr><tr><td>Noggin CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NovoCyte Quanteon&nbsp;</td><td>Agilent</td><td></td><td>Flow Cytometer</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td>used at 4% in 1x PBS, 4% sucrose</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>Ant-pm-1</td><td></td></tr><tr><td>Q-VETTES semi-micro</td><td>Ratiolab</td><td>2712120</td><td></td></tr><tr><td>RHOKi (Y-27632)</td><td>AbMole</td><td>M1817</td><td>RhoA/ROCK inhibitor; Concentration stock 10 mM</td></tr><tr><td>R-spodin1 CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin1 expressing 293T Cell Line</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SCC111</td><td>Used to produce R-spo1 CM; culture medium: 500ml DMEM, high glucose, GlutaMAX, pyruvate (Gibco Life Technologies, 31966)+ 60ml FBS&nbsp;</td></tr><tr><td>TGF&beta;i (A-83-01)</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>ALK4/5/7 inhibitor; Concentration stock 5 mM&nbsp;</td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9284</td><td>used 0.5% diluted in PBS 1x</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12605028</td><td>Enzymatic cell dissociation agent to digest 3D mouse prostate organoids</td></tr><tr><td>Uropathogenic Escherichia coli strain UTI

generatie van een model gebaseerd op een muisprostaatorganoïde voor het bestuderen van gastheer-pathogeen interacties

Generation of a Mouse Prostate Organoid-Based Model for Studying Host-Pathogen Interactions

Generatie van een model gebaseerd op een muisprostaatorganoïde voor het bestuderen van gastheer-pathogeen interacties

Aging men are highly affected by prostate diseases, such as benign prostatic hyperplasia, prostatitis, and prostate cancer. Together, these conditions ...

generation-mouse-prostate-organoid-based-model-for-studying-host

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Organoids derived from tumors are a type of 3D cell culture model that can maintain the pathological features and organ-specific cell lineage of tumors. In the example protocol, we will see scientists generate organoids from a prostate tumor from a genetically engineered mouse model.

Preparing Organoids from Tumors: A 3D In Vitro Tumor Model

In this video, we demonstrate the culturing of isolated mouse prostate epithelial cells using a matrix gel-ring based culture technique. This approach can provide complementary information about the differentiation capacity of prostate epithelial cells to form 3D glandular structures in response to genetic or pharmacological manipulation.

Prostate Organoid Assay: A Matrix Gel Ring-based Ex Vivo Culture Technique to Study the Differentiation Capacity of Prostate Epithelial Cells

Uit stamcellen afgeleide culturen bevatten een enorm potentieel om infectieziekten te modelleren. Hier wordt de kweek van muis en menselijke gastrische organoïden, afgeleid van volwassen stamcellen, beschreven. De organoïden worden gemicro-injecteerd met het gastrische pathogeen Helicobacter pylori.

Organoids als model voor Infectieziekten: cultuur van de mens en muizen Maag Organoids en Micro-injectie van Helicobacter pylori

Genetisch gemodificeerde muizen zijn nuttige modellen voor het onderzoek naar prostaatkanker mechanismen. Hier presenteren we een protocol om te identificeren en ontleden prostaat lobben van het urogenitaal systeem van een muis, onderscheiden van hen op basis van histologie, isoleren en cultuur de primaire prostaat cellen in vitro als spheroïden voor downstream analyses.

Identificatie en karakterisering van het histologische dissectie van de prostaat lobben van de muis voor In Vitro 3D sferoïde cultuur modellen

Hier presenteren we een protocol om begeleiden van menselijke primaire prostaat organoid behandeling dan eindpunten om te beoordelen fenotype suggereren. Zaaien, cultuur onderhoud, herstel van matrix gel, worden morfologische kwantificering, insluiten en segmenteren, FFPE segmenteren, geheel-mount kleuring en toepassing van commerciële tests beschreven.

Behandeling en evaluatie van menselijke primaire prostaat Organoid cultuur

We tonen een methode voor obductie en dissectie van muizen prostaatkanker modellen, gericht op prostaat tumor dissectie. Een stap-voor-stap protocol voor het genereren van muis prostaat tumor organoïden wordt ook gepresenteerd.

Generatie van tumor Organoïden uit genetisch gemanipuleerde Muismodellen van prostaatkanker

Muis prostaat organoïden vertegenwoordigen een veelbelovende context voor het evalueren van mechanismen die differentiatie reguleren. Dit artikel beschrijft een verbeterde aanpak om prostaat organoïden vast te stellen, en introduceert methoden om (1) eiwit lysaat van organoïden te verzamelen, en (2) de organoïden voor de confocale microscopie van de hele Mount te fixeren en te vlechten.

Evaluatie van de differentiatie capaciteit van muizen prostaat epitheelcellen met behulp van Organoid cultuur

Hier gepresenteerd is een protocol om farmacologische reacties te bestuderen in prostaat epitheel organoïden. Organoïden lijken nauw in vivo biologie en even patiënt genetica, waardoor ze aantrekkelijk modelsystemen. Prostaat organoïden kunnen worden vastgesteld uit wild type prostates, genetisch gemanipuleerde muismodellen, goedaardig menselijk weefsel en gevorderde prostaatkanker.

Prostaat-Organoid culturen als hulpmiddelen om genotypes en Mutationele profielen te vertalen naar farmacologische reacties

Driedimensionale culturen van patiënt BMPC-specimens en xenografts van botgemetastaseerde prostaatkanker behouden de functionele heterogeniteit van hun oorspronkelijke tumoren, wat resulteert in cysten, sferoïden en complexe, tumorachtige organoïden. Dit manuscript biedt een optimalisatiestrategie en protocol voor de 3D-cultuur van heterogene patiëntafgeleide monsters en hun analyse met behulp van IFC.

Oprichting en analyse van driedimensionale (3D) organoïden afgeleid van patiënt prostaatkanker Bot metastase Specimens en hun Xenografts

De heterogeniteit van prostaatkanker en de resistentie tegen de behandeling blijven uitdagingen. We beschrijven een protocol voor het genereren van patiënt-afgeleide organoïden (PDO's) die de belangrijkste kenmerken van de ouderlijke tumor behouden. Dit gestandaardiseerde model ondersteunt de screening van geneesmiddelen en de vooruitgang op het gebied van precisiegeneeskunde.

Oprichting en onderhoud van van patiënten afgeleide organoïden voor prostaatkanker: een gedetailleerd experimenteel protocol

De studie presenteert een methode voor in vitro onderzoek van bacteriële infecties met behulp van intestinale organoïden afkomstig van weefselstamcellen. Het protocol beschrijft hoe organoïden in twee dimensies kunnen worden gekweekt en onderscheiden, geïnfecteerd met adherent-invasieve Escherichia coli, en belangrijke metingen worden beoordeeld, waaronder het doorbreken van de epitheliale barrière, infectiebeeldvorming en de repitheliale RNA-respons.

Een tweedimensionale organoïde cultuur op invasine of basement membraanextract om gastheer-bacteriën interacties te bestuderen

Leer hoe u een tweedimensionaal prostaatepitheelmodel genereert uit muizenorganoiden voor het bestuderen van gastheer-pathogeen interacties met uropathogene Escherichia coli. Dit protocol behoudt cellulaire diversiteit en maakt gedetailleerde infectieanalyses mogelijk.

Generatie van een model gebaseerd op een muisprostaatorganoïde voor het bestuderen van gastheer-pathogeen interacties

Meer video's verkennen