30 december 2025
Deze studie presenteert een protocol voor het opzetten van een reproduceerbaar, minimaal invasief rattenmodel van superieure sagittale sinustrombose, geïnduceerd door ferrichloride, waarbij een zijde-hechtingsmethode wordt gebruikt in combinatie met laserspeckle-contrastbeeldvorming en hoogresolutie-echografie voor evaluatie.
In ons vakgebied worden verschillende modelleringsmethoden gebruikt voor superieure sagittale sinus-trombose. De inductiemethode van ferricchloride wordt echter veel gebruikt vanwege de eenvoud en de lage kosten. We streven ernaar het ferricchloride-geïnduceerde superior sagittale sinustrombosemodel te verfijnen door corticale schade te verminderen en de sinustromben te visualiseren.
Begin met het aanbrengen van oogzalf op beide ogen van een verdoofde rat en scheer je het hoofdhaar zorgvuldig. Vervolgens zet je de rat in een buikligging op een platform voor het opereren van een knaagdier met medisch tape. Houd de lichaamstemperatuur rond de 37 graden Celsius met een warmtekussen.
Desinfecteer de kaalgeschoren hoofdhuid grondig met 5% povidonjodium, gevolgd door 75% alcohol, en herhaal dit drie keer per stuk. Na het bevestigen van de verdovingsdiepte met een teenpnijreflex, maak je een peri-mediane incisie van 15 millimeter op de hoofdhuid. Met een stomp dissectie scheid je de onderliggende fascia en het periost om de schedel volledig bloot te leggen.
Dunner de schedel met een craniale boor totdat de sinus sagittale superior duidelijk zichtbaar is, beginnend bij de lambda en 10 millimeter naar voren langs de sagittale hechting. Gebruik een intermitterende boortechniek om schade aan de onderliggende dura mater en de sinus superior sagittale sinus te voorkomen, en spoel de boorbit herhaaldelijk met normale zoutoplossing om thermische schade aan de cortex te voorkomen. Na het beelden van de basiscondities breng je een segment van 10 millimeter 2-0 zijde hechting aan, doordrenkt met 40% ijzerchloride-oplossing, gedurende vijf minuten op het blootgestelde oppervlak van de bovenste sagittale sinus.
Vervang de hechting door een nieuw geweekt segment en breng het nog eens vijf minuten aan. Spoel vervolgens het operatieveld drie keer met 0,5 milliliter normale zoutoplossing om het resterende ijzerchloride te verwijderen. Sluit de huid met onderbroken hechtingen en 4-0 zijden hechtingen en desinfecteer het gebied met povidonjodium.
Observeer de rat totdat hij volledig wakker is, en breng hem dan terug naar zijn kooi. Zet het laser speckle contrast imagingsysteem en de bijbehorende software aan, RF LSI versie vijf. Druk op de knop voor online modus om live imaging te activeren.
Pas de hoogte en positie van het instrument aan totdat de indicatorlaser in het gezichtsveld is gecentreerd. Plaats de rat op een schuimplatform en pas zijn positie aan totdat de sinus superior sagittale is uitgelijnd met de indicatorlaser. Pas de vergroting en scherpstelling aan totdat het beeld duidelijk wordt weergegeven.
Stel de onder- en bovengrenzen van de pseudokleurdrempel in om het visuele uiterlijk van het pseudokleurbeeld te optimaliseren. Stel een cirkelvormige ROI in over de sinus superior sagittalis, registreer de veneuze stroming en sla de originele en pseudocolor-afbeeldingen op. Maak isoflurane, echografiegel, wegwerpscheermesjes, medische tapes klaar en controleer alle benodigde instrumenten.
Installeer de driedimensionale acquisitiemotor op het beeldvormingssysteem. Installeer vervolgens de UHF 57X transducer en initialiseer de motor. Na het verdoofen van de rat, plaats je hem in een buikligging op de thermostatische beeldplaat die op 37 graden Celsius staat, en zet je het hoofd en de ledematen voorzichtig vast met medische tapes.
Breng ultrageluidgel gelijkmatig aan op de blootgestelde hoofdhuid. Pas de positie en oriëntatie van de rat ten opzichte van de transducer aan totdat de sinus superior sagittale en intraluminale trombus duidelijk zichtbaar zijn. Maak sequentiële tomografische beelden van de superieure sagittale sinus in het sagittale vlak met behulp van driedimensionale beeldvorming in B-modus met een stapgrootte van 0,04 millimeter, gevolgd door tomografische beelden in het coronale vlak met dezelfde instellingen.
Gebruik kleur-Dopplermodus om de bloedstroom in de superieure sagittale sinus te observeren en pas gepulseerde Dopplermodus toe om de bloedstroomsnelheid te meten. Stop met de narcose en observeer de rat totdat hij volledig wakker is. Daarna zet je de rat terug in zijn kooi.
Exporteer tenslotte de verkregen beelden en analyseer deze met Vevo LAB-software. Noteer de maximale sagittale en coronale dwarsdoorsnede-oppervlakten en het volume van de trombus in de sinus superior sagittal, samen met de maximale bloedstroomsnelheid van de sinus. Na lokale toepassing van ferricchloride toonde laserspecklecontrastbeeldvorming een significante vermindering van de lokale bloedstroom in de superior sagittale sinus vergeleken met de basislijn.
Op de postoperatieve dag zeven bevestigde een echo van kleine dieren de vorming van een trombus in de sinus superior sagittale sinus met gedeeltelijke luminale recanalisatie. Gepulseerde Doppler-echo toonde meetbare bloedstroomsnelheid aan binnen het resterende lumen van de superior sagittale sinus. Driedimensionale echografie maakte volumetrische metingen mogelijk van de superieure sagittale sinustrombus met seriële beeldsneden van een dikte van 0,04 millimeter.
Ons verfijnde model is minder invasief en beter compatibel met echografie beeldvorming, waardoor een betrouwbaardere, directere therapeutische ontwikkeling en evaluatie mogelijk is. Zorg ervoor dat interoperatieve laserspecklecontrastbeeldvorming het succes van het model bevestigt en dat postoperatieve high-resolution echografie dynamisch de vorming van trombus, lysis en lumenrecanalisatie monitort.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Dit artikel presenteert een verfijnd ratmodel voor trombose van de sinus sagittalis superior (SSS) met behulp van een techniek met een FeCl3-gedrenkte hecheldraad. Het protocol minimaliseert corticale beschadiging en verbetert de compatibiliteit met beeldvormingsmodaliteiten, waardoor een reproduceerbaar en minimaal invasief platform wordt geboden voor het bestuderen van cerebrale veneuze trombose (CVT) en het evalueren van potentiële therapieën.
Betrouwbare preklinische modellen van cerebrale veneuze trombose (CVT) zijn essentieel voor translationeel onderzoek en therapeutische evaluatie bij de ontdekking van neurovasculaire geneesmiddelen. Het gemodificeerde FeCl3-geïnduceerde model voor trombose van de sinus sagittalis superior maakt reproduceerbare, minimaal invasieve en beeldvormingscompatibele studies mogelijk, wat bijdraagt aan het voorspellende vertrouwen bij vroege targetvalidatie en mechanistische risicoreductie. Dit platform versterkt de besluitvorming over de portfolio door kwantitatieve, longitudinale gegevens over trombusvorming en recanalisatie te verschaffen.
Dit model is geïntegreerd in het continuüm van ontdekking naar preklinische fase en slaat een brug tussen vroege mechanistische studies en translationele evaluatie van de werkzaamheid voor neurovasculaire indicaties.