Name: Onderzoek naar glycolyse in primaire microglia met behulp van extracellulaire fluxassay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: Leer glycolyse meten in primaire microglia met een extracellulaire fluxassay. Deze methode analyseert real-time de extracellulaire acidificatiesnelheid (ECAR) om metabole veranderingen bij inflammatie te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Prinz, M., Jung, S., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+biology%3A+One+century+of+evolving+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia biology: One century of evolving concepts.</a> Cell. 179, 292-311 (2019).</li>
<li>Tay, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+microglia+recovery+population+revealed+by+single-cell+RNAseq+following+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol.+Commun%22%5BJournal%5D)">Unique microglia recovery population revealed by single-cell RNAseq following neurodegeneration.</a> Acta Neuropathol. Commun. 6, 87(2018).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis+and+oxidative+phosphorylation+play+critical+roles+in+natural+killer+cell+receptor-mediated+natural+killer+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolysis and oxidative phosphorylation play critical roles in natural killer cell receptor-mediated natural killer cell functions.</a> Front. Immunol. 11, 202(2020).</li>
<li>Soto-Heredero, G., Gómezde Las Heras, M. M., Gabandé-Rodríguez, E., Oller, J., Mittelbrunn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis-a+key+player+in+the+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Glycolysis-a key player in the inflammatory response.</a> FEBS J. 287, 3350-3369 (2020).</li>
<li>O'Neill, L. A., Kishton, R. J., Rathmell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+immunometabolism+for+immunologists%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A guide to immunometabolism for immunologists.</a> Nat. Rev. Immunol. 16, 553-565 (2016).</li>
<li>Bernier, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+metabolic+flexibility+supports+immune+surveillance+of+the+brain+parenchyma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Microglial metabolic flexibility supports immune surveillance of the brain parenchyma.</a> Nat. Commun. 11, 1559(2020).</li>
<li>Bernier, L. P., York, E. M., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunometabolism+in+the+brain%3A+How+metabolism+shapes+microglial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Immunometabolism in the brain: How metabolism shapes microglial function.</a> Trends Neurosci. 43, 854-869 (2020).</li>
<li>Geric, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming+during+microglia+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunometabolism%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming during microglia activation.</a> Immunometabolism. 1, e190002(2019).</li>
<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol. Cells. 47, 100095(2024).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+modulates+microglial+NLRP3+inflammasome+activity+through+mitophagy+in+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism modulates microglial NLRP3 inflammasome activity through mitophagy in Alzheimer’s disease.</a> J. Neuroinflammation. 21, 261(2024).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transporter+1+critically+controls+microglial+activation+through+facilitating+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Glucose transporter 1 critically controls microglial activation through facilitating glycolysis.</a> Mol. Neurodegener. 14, 2(2019).</li>
<li>Lu, J., Zhou, W., Dou, F., Wang, C., Yu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+sustains+microglial+metabolic+reprogramming+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">TRPV1 sustains microglial metabolic reprogramming in Alzheimer's disease.</a> EMBO Rep. 22, e52013(2021).</li>
<li>Orihuela, R., McPherson, C. A., Harry, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+M1%2FM2+polarization+and+metabolic+states%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Microglial M1/M2 polarization and metabolic states.</a> Br. J. Pharmacol. 173, 649-665 (2016).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J. Neuroinflammation. 18, 129(2021).</li>
<li>Kaushik, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+glycolytic+metabolism+supports+transmigration+of+brain-infiltrating+macrophages+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Enhanced glycolytic metabolism supports transmigration of brain-infiltrating macrophages in multiple sclerosis.</a> J. Clin. Invest. 129, 3277-3292 (2019).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-mediated+metabolic+reprogramming+shapes+distinct+microglia+functions+in+response+to+lipopolysaccharide+and%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">mTOR-mediated metabolic reprogramming shapes distinct microglia functions in response to lipopolysaccharide and.</a> Glia. 68, 1031-1045 (2020).</li>
<li>Montilla, A., Zabala, A., Matute, C., Domercq, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+metabolic+characterization+of+microglia+culture+in+a+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional and metabolic characterization of microglia culture in a defined medium.</a> Front. Cell. Neurosci. 14, 22(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1M HEPES solution</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>1X HBSS</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;14175-079</td><td></td></tr><tr><td>2.5% Trypsin</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;15090-046</td><td></td></tr><tr><td>2DG</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>D6134</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic/Antimycotic&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>D &ndash;(+)Glucose, anhydrous&nbsp;</td><td>Thermoscientific&nbsp;&nbsp;</td><td>A16828.36</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>&nbsp;11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>11284932001- Roche</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Fisherbrand</td><td>FB12999102</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L-Lactate Kit</td><td>Abcam</td><td>ab65330</td><td></td></tr><tr><td>LPS&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&nbsp;L4391</td><td></td></tr><tr><td>MEM NEAA&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycin A</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>495455</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;15240-062</td><td></td></tr><tr><td>pH indicator strips</td><td>Fisherbrand</td><td>13-640-516</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe24</td><td>Agilent Technologies</td><td>N/A</td><td>Generic name: Extracellular flux analyzer</td></tr><tr><td>Seahorse 24 V7 PS cell culture microplates</td><td>Agilent Seahorse</td><td>100777-004</td><td>Generic name: Extracellular flux cell culture microplates</td></tr><tr><td>Seahorse assay XF Calibrant buffer (pH 7.4)</td><td>Agilent Seahorse&nbsp;</td><td>&nbsp;100840-000</td><td>Generic name: Extracellular flux calibrant buffer</td></tr><tr><td>Seahorse assay XF DMEM media (pH 7.4)</td><td>Agilent Seahorse&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp; 103575-100</td><td>Generic name: Extracellular flux assay media</td></tr><tr><td>Seahorse Extracellular flux assay kit</td><td>Agilent Seahorse&nbsp;</td><td>102342-100</td><td>Generic name: Extracellular flux calibration plate&nbsp;</td></tr><tr><td>Sodium pyruvate&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;11360-070</td><td></td></tr></tbody></table>

onderzoek naar glycolyse in primaire microglia met behulp van extracellulaire fluxassay

Investigating Glycolysis in Primary Microglia Using Extracellular Flux Assay

Onderzoek naar glycolyse in primaire microglia met behulp van extracellulaire fluxassay

Microglia, the resident macrophage cells of the central nervous system, dynamically alter their metabolic programs in response to physiological and ...

investigating-glycolysis-primary-microglia-using-extracellular-flux

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Het isoleren van primaire microglia van de cellulaire heterogeniteit van de hersenen is essentieel om hun rol te onderzoeken in zowel fysiologische en pathologische omstandigheden. Dit protocol beschrijft een mechanische isolatie en gemengde celkweek techniek die hoge opbrengst en een hoge zuiverheid, levensvatbare primaire microgliale cellen...

Primaire Microglia Isolatie van Mixed gliale celculturen van neonatale rat hersenweefsel

This protocol provides a biochemical approach for measuring extracellular acidification rate (ECAR) and oxygen consumption rate (OCR) of primary leukemic cells with extracellular flux assay. The assessment of the metabolic profile of these cells helps to characterize their demands, leading to personalized therapy.

Extracellular Flux Assay: A Method for Measuring Metabolic Profile of Cells

Metabolische herprogrammering is een kenmerkend en vereist kenmerk voor M1 en M2 macrofaagpolarisatie. Dit manuscript beschrijft een test voor de meting van fundamentele parameters van glycolyse en mitochondriale functie in muis-beenmerg-afgeleide macrofagen. Deze tool kan worden toegepast om te onderzoeken hoe bepaalde factoren het metabolisme en fenotype van macrofagen beïnvloeden.

Metabole karakterisering van gepolariseerde M1 en M2 Bone Marrow-afgeleide macrofagen met behulp van real-time extracellulaire Flux Analysis

Glycolyse is een bepalende metabolische marker in meerdere biologische systemen. Het monitoren van glycolyse door het meten van de extracellulaire flux van H+ is gebruikelijk, maar vereist correctie om kwantitatief en eenduidig te zijn. Hier laten we zien hoe je extracellulaire fluxgegevens kunt verzamelen en corrigeren om onderscheid te maken tussen respiratoire en glycolytische bronnen van extracellulaire acidificatie.

Meting en analyse van de extracellulaire zuurproductie te bepalen glycolytisch Rate

De studie van metabolisme wordt steeds relevanter voor immunologisch onderzoek. Hier presenteren we een geoptimaliseerde methode voor het meten van glycolyse en mitochondriale ademhaling in muis splenocyten, en T- en B-lymfocyten.

Een geoptimaliseerde Protocol Analyseer glycolyse en mitochondriale Ademhaling in lymfocyten

In dit artikel beschrijven we een methode om glycolyse en mitochondriale ademhaling te meten in primaire menselijke Natural Killer (NK) cellen geïsoleerd van perifeer bloed, in rust of na IL15-geïnduceerde activering. Het beschreven protocol kan gemakkelijk worden uitgebreid tot primaire menselijke NK-cellen die worden geactiveerd door andere cytokines of oplosbare stimuli.

Analyse van human natural killer cell metabolisme

Hier presenteren we twee protocollen om microgliale inslokking van vGLUT1-positieve synapsen en pHRodo Red-gelabelde ruwe synaptosomen te kwantificeren met behulp van flowcytometrie.

Kwantificering van microgliale inslokking van synaptisch materiaal met behulp van flowcytometrie

Alcoholmisbruik schaadt de immuniteit van alveolaire macrofagen (AM) als gevolg van onderdrukte mitochondriale ademhaling en bio-energetica. We hebben onlangs aangetoond dat blootstelling aan ethanol (EtOH) de afhankelijkheid van glutamine voor mitochondriale ademhaling in AM's verhoogt. Hierin worden methoden aangereikt om het gebruik van glutamine voor mitochondriale ademhaling in met EtOH behandelde AM's te bepalen met behulp van een extracellulaire fluxbioanalysator.

Beoordeling van glutamine als brandstofbron voor alveolaire macrofagen blootgesteld aan chronische ethanol met behulp van een extracellulaire fluxbioanalysator

Hier beschrijven we in detail methoden voor het extraheren van macrofagen uit het beenmerg, de milt en het hartinfarct, en vervolgens het beoordelen van de metabole flux in levende cellen.

Analyse van ex vivo metabole flux in milt- en cardiale macrofagen en beenmergmonocyten

Er werd een protocol ontwikkeld voor de bereiding van gezuiverde mitochondriën uit microgliacellen, isolatie van mitochondriale eiwitten voor de afgifte van N-glycanen en snelle detectie van subcellulaire, mitochondriale glycanen met behulp van infraroodmatrix-geassisteerde laserdesorptie elektrospray-ionisatie gekoppeld aan nauwkeurige massaspectrometrie met hoge resolutie.

Mitochondriaal preparaat uit microglia voor glycaananalyse

Leer glycolyse meten in primaire microglia met een extracellulaire fluxassay. Deze methode analyseert real-time de extracellulaire acidificatiesnelheid (ECAR) om metabole veranderingen bij inflammatie te bestuderen.

Onderzoek naar glycolyse in primaire microglia met behulp van extracellulaire fluxassay

Meer video's verkennen