Geautomatiseerde HPLC-scheiding met LC-mate: een geïntegreerde repetitieve autosampler en fractieverzamelaar voor microschaalzuivering

Ons onderzoek richt zich op het ontwerpen van een instrument dat direct op HPLC-opstellingen wordt aangesloten om al die repetitieve handmatige stappen te automatiseren. Handmatige monsterinjectie en het verzamelen van fracties zijn erg tijdrovend. LC-Mate biedt een cross-platform geautomatiseerde oplossing voor HPLC-monsterzuivering.

Controleer om te beginnen de oplosmiddelleidingsverbindingen tussen het HPLC-systeem, de LC-Mate en de chromatografische kolom om de juiste stroompaden te garanderen. Om de verbinding van de signaaltransmissielijn tussen de UV-detector en LC-Mate te controleren, sluit je de zwarte draad aan op de rode aansluiting en de witte draad op de zwarte aansluiting om de polariteit van de analoge signaaluitgang te evenaren. Bekijk het LC-Mate-display om te bevestigen dat de analoge signaalgolfvorm verschijnt.

Als er geen golfvorm zichtbaar is, draai dan de draadverbindingen om door de zwarte draad aan de zwarte aansluiting te bevestigen en de witte draad aan de rode aansluiting. Om de triggerverbinding tussen de ultravioletdetector en de LC-Mate te controleren, steek je het enkele uiteinde van de datakabel in de uitgangspoort van de ultravioletdetector. Verbind de zwarte en witte draden van het andere uiteinde van de kabel met de zwarte en blauwe trigger-terminals van de LC-Mate. Draai de terminals strak om een stevige triggerverbinding te garanderen.

Zorg vervolgens voor de juiste opstart van het HPLC-systeem en LC-Mate. Klik op het LC Mate-icoon op de interface om automatisch het systeem-zelftestprogramma uit te voeren en belangrijke hardwaremodules te initialiseren. Wacht op de korte prompttoon en het verdwijnen van het zelftestbericht om te bevestigen dat de initialisatie voltooid is.

Configureer de HPLC-scheidingsvoorwaarden en begin met elutie om de kolom in evenwicht te brengen. Voer in de testinterface het injectievolume, elutietijd en herhalingstijden in, en druk vervolgens op het Start-icoon om de auto-sampler, fractieverzamelaar en HPLC-operatie te starten. Identificeer haalbare scheidingsvoorwaarden, waaronder resolutie, looptijd, retentietijd, injectievolume en ultraviolet golflengte.

Selecteer de Threshold-functiemodule aan de linkerkant van de interface om het parameterinstellingsscherm te openen. Voer het injectievolume, herhalingstijden, drempel en elutietijd in en druk op Start om geautomatiseerde werking te starten. Houd de statusindicatoren in de gaten.

Observeer de injectie in uitvoering om de introductie van het monster te bevestigen. Controleer de indicator 'Separation in progress' om te verifiëren dat de chromatografische scheiding plaatsvindt. Let op de spuitleegingsindicator om aan te geven wanneer de spuit restvloeistof uitspoelt.

Om fraction collection uit te voeren op basis van tijd, selecteer je de timing collection module aan de linkerkant van de interface om het parametermenu te openen. Volume van de invoerinjectie, herhalingstijden, elutietijd en de vereiste verzameltijden. Druk op de Startknop om de herhaalde automatische sequentie te starten.

Selecteer vervolgens de Collect All-functiemodule aan de linkerkant van de interface. Stel een verzameldrempelwaarde in om alle chromatografische pieken afzonderlijk te verzamelen. Voor pijpleidingreiniging wordt de injectiepijplijn van de autos-sampler in een klein flesje met een schoon oplosmiddel gestopt.

Selecteer de reinigingsmodule aan de linkerkant van de interface om het parametermenu te openen. Stel vervolgens het injectievolume in tussen nul en 1000, en de herhalingstijden voor het reinigen van de injectorpijpleiding. Klik op Reinigen onder Reinigen Voltooid om te beginnen met injectorpijpreiniging.

Houd het aantal cycli in de gaten om voltooide wascycli bij te houden. Stel de reinigingstijd in voor de reiniging in de verzamelpijplijn. Klik op Zuiveren onder Current Pipeline om te beginnen met het reinigen van de collectiepijpleiding.

Monitor het huidige pijpleidingdisplay om sequentiële reiniging van pijpleiding 0 tot pijpleiding 10 te bevestigen. Schakel automatisch opslaan in zodat het systeem chromatogrammen na elke elutiecyclus kan opslaan. Alternatief klik je na elutie op de opslaan-knop om handmatig data op te slaan.

Na het invoeren van de metadata in het dialoogvenster kies je de opslaglocatie uit lokale opslag, een SD-kaart of een externe universele seriële busstation. Semi-preparatieve HPLC-scheiding met LC-Mate bereikte continue en stabiele monsterinjectie en fractieverzameling tijdens de zuivering van 2"O-galloyl-hyperoside. Kleine onzuiverheden werden effectief verwijderd om gezuiverd 2"O-galloyl-hyperoside te verkrijgen met het LC-Mate-systeem.

Continue en stabiele monsterinjectie en fractionele verzameling werden ook succesvol bereikt tijdens de zuivering van phloridzin en trilobatine. Hieruit blijkt dat het LC-Mate-systeem de operationele efficiëntie aanzienlijk verbetert door handmatige interventie aanzienlijk te verminderen. De relatieve standaarddeviatie van het volledige ringinjectiepiekgebied was 0,813%, wat wijst op uitstekende stabiliteit en reproduceerbaarheid van LC-Mate-injecties.

Dit systeem faciliteert geautomatiseerde zuivering en de precieze frakatieverzameling voor efficiënte HPLC-workflows op macroschaal. Correcte signaalvariant, juiste moduskeuze en parameterinstelling zijn cruciaal voor succesvolle toepassing van het LC-Mate-instrument. We zijn van plan de kanaalcapaciteit te vergroten en nieuwe detectoren te integreren voor betere cross-platform compatibiliteit.