Name: Een preklinisch model van synovitis met ex vivo menselijk synoviaal weefsel met behouden functie en architectuur (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Leer het JSAS-model voor reumatoïde artritis-onderzoek met behouden menselijk synoviaal weefsel. Dit systeem onderzoekt acute ontstekingsreacties en cytokineproductie in 3D-architectuur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>10 cm Petri schotels</td><td>Corning</td><td>CLS430167</td><td></td></tr><tr><td>23srRNA RNAscope sonde</td><td>ACD/Biotechne</td><td>468211</td><td></td></tr><tr><td>24 wel platen</td><td>Life Sciences</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>3 mm biopsie ponsen</td><td>Integra</td><td>12460406</td><td></td></tr><tr><td>50 mL kegelvormige flesjes</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol (voor sterilisatie)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Borrelia burgdorferi</td><td>ATCC</td><td>35210&nbsp;</td><td>moet worden gebruikt in de late exponentiële fase voor maximale pathogeniteit</td></tr><tr><td>BSK-H</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B8291</td><td></td></tr><tr><td>CD68 antilichaam</td><td>Invitrogen</td><td>14-0688-82</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>CO2 tank (standaardcondities)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate gebufferde zoutoplossing (Ca-/Mg-)</td><td>Thermofisher</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>foetaal bovien serum</td><td>Biotechne</td><td>S11150</td><td>Verhit in geïnactiveerde batch: F22100</td></tr><tr><td>forceps (tandenloos)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>kramptang</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bevochtigde cellincubaor (standaardcondities)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hypoxia incubaor</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hypoxia tank (5% O2, 5% CO2, rest N2, fysiologische omstandigheden)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IL-4 antilichaam</td><td>Thermofisher</td><td>MA5-42470</td><td>1:100</td></tr><tr><td>iNOS antilichaam</td><td>Thermofisher</td><td>PA1-036</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Iris schaar</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipopolysacharide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>lage glucose DMEM (+Natriumpyruvaat, +L-glutamine)</td><td>Life Technologies</td><td>11885084</td><td></td></tr><tr><td>MMP9 antilichaam</td><td>Thermofisher</td><td>MA5-32705</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>Modulaire incubaorkamer (hyperoxische omstandigheden)</td><td>Emrbient, Inc</td><td>MIC-101</td><td></td></tr><tr><td>Monocyte chemoattractant protein 1</td><td>Peptrotech</td><td>300-04-20UG</td><td></td></tr><tr><td>N-acetyl cysteïne</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td>Moet vers worden bereid voor elk experiment en gebufferd in gelijkmolaire natriumbicarbonaat naar een pH van 7-7.4</td></tr><tr><td>OPG ELISA</td><td>Millipore</td><td>RAB0484</td><td>1:1 verdunning</td></tr><tr><td>Zuurstoftank met liter per minuut stroomregelaar</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDPN antilichaam</td><td>Invitrogen</td><td>14-9381-82</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Propidium Jodide</td><td>Thermofisher</td><td>J66764.MC</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope multiplex fluorescent V2 assay</td><td>ACD/Biotechne</td><td>323100</td><td></td></tr><tr><td>sRANKL ELISA</td><td>MyBioSource</td><td>MBS262624</td><td>1:1 verdunning</td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus USA 300 MRSA</td><td>ATCC</td><td>BAA-1717</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green</td><td>Thermofisher</td><td>S7563</td><td>10,000X stock</td></tr><tr><td>TNF antilichaam</td><td>Thermofisher</td><td>PA5-19810</td><td>1:100</td></tr><tr><td>transwell inzetstukken - 0,4 um maat</td><td>Millicell</td><td>PICM01250</td><td></td></tr><tr><td>transwell inzetstukken - 5 um maat</td><td>Corning</td><td>CLS3421</td><td></td></tr></tbody></table>

een preklinisch model van synovitis met ex vivo menselijk synoviaal weefsel met behouden functie en architectuur

A Pre-Clinical Model of Synovitis Using Ex vivo Human Synovial Tissue with Preserved Function and Architecture

Optimalisatie van zuurstofcultuurcondities
Fysiologische weefselperfusie bestaat uit ongeveer 6%-8% zuurstof, terwijl de standaard incubatiecondities voor celkweek op atmosferische zuurstofniveaus (~21%)16 liggen. Ter vergelijking: hyperoxygenatie kan de levensvatbaarheid van celkweek verbeteren of toxischzijn. Voldoende gebruik van JSAS vereiste vroegtijdige vaststelling van de levensvatbaarheid van synoviaal weefsel; Daarom wer...

Een preklinisch model van synovitis met ex vivo menselijk synoviaal weefsel met behouden functie en architectuur

Arthritis is an inflammatory state within joints resulting in cartilage damage, pain, and loss of mobility. Recent advances in arthritis research ...

De belangrijkste vragen die we willen beantwoorden, zijn wat de native synoviale immuunrespons is op infectieuze en inflammatoire stimuli, en hoe dat tot uiting komt in veranderingen in de synoviale structuur? Mijn belangrijkste klinische en onderzoeksfocus ligt op de behandeling van ernstig zwaarlijvige patiënten met RC-artritis in het eindstadium. Vaak is deze patiëntenpopulatie medisch verwaarloosd vanwege hun moeilijkheden bij het vinden van chirurgische behandelingsopties voor hun ziekte.Om te beginnen, voer een artrotomie en dissectie uit in de operatiekamer. Gebruik een standaard mediale parapatellaire benadering en voer een meer uitgebreide blootstelling uit bij het opereren van een patiënt met morbide obesitas en eindstadiumartrose. Identificeer het voorste synovium en gebruik elektrocauterisatie om het weefsel te dissecteren.Observeer de knie op tekenen van ontsteking, aangezien patiënten met obesitas een lokale ontstekingsreactie kunnen vertonen die correleert met de bredere ontstekingseffecten van obesitas. Geef het synovium op een steriele manier door aan het onderzoeksteamlid. Plaats de monstercontainer gevuld met koude Dulbecco's PBS of DPBS op ijs en breng het humane voorste synoviale weefsel dat tijdens de totale knieprothese is verkregen, over in de container.Was het weefsel twee keer in koud DPBS gedurende 10 minuten op een plate rocker. Breng vervolgens het synovium over naar een steriele petrischaal van 10 centimeter of groter onder een Biosafety Level 2 kast. Voeg koud sterieel DMEM met lage glucose met natriumpyruvaat en L-glutamine toe om de schaal voor de helft te vullen.Identificeer het synoviale weefsel door de parelglanzende intimaal laag zonder deze los te maken. Schik de benodigde hulpmiddelen om minimaal twee technische replica's van drie millimeter biopsie-kernen te verkrijgen. Gebruik iris schaar of een scalpel om het overtollige vet- en stromaweefsel van de gecauteriseerde kant te dissecteren om het synovium te isoleren, waarbij een weefseldiepte van ongeveer vier tot vijf millimeter wordt gehandhaafd.Ververs het petrischaalmedia indien nodig om het gezichtsveld te behouden. Positioneer het weefsel met de synoviale bekleding naar de borentool. Stabiliseer het weefsel met de niet-dominante hand met behulp van forceps of hemostatische klemmen en boren het weefsel door een stevige loodrechte druk uit te oefenen met zachtjes draaien.Vervang de biopsiepons na ongeveer 10 tot 15 gebruiken, of wanneer het weefsel tijdens het boren draait om schade aan de intimale bekledingsstructuur te voorkomen. Open een tweede petrischaal en vul deze met vijf tot tien milliliter media met 10%FBS, gekoeld op 37 graden Celsius. Met platte of niet-getande forceps brengt u de kernen over naar de schaal en schudt u voorzichtig gedurende een tot twee seconden om vuil weg te spoelen zonder ze strak vast te klemmen.Om de bodemput van het Joint Space Analysis System voor te bereiden, voegt u 600 microliters lage glucose DMEM met 10%FBS toe, gekoeld op 37 graden Celsius. Voeg de voertuigregeling of de gekozen behandelingsreagent, zoals LPS of MCP-1, toe aan de bodemput. Selecteer de transwell-porengrootte op basis van het gewenste experimentele resultaat en voeg 300 microliters lage glucose DMEM met 10%FBS toe aan de transwell.Gebruik steriele forceps om individuele weefselkernen voorzichtig over te brengen naar het media van de transwell, vermijd gebarsten en drijvende kernen. Plaats vervolgens de constructie in een incubator bij 37 graden Celsius met 5% koolstofdioxide gedurende acht tot 72 uur, afhankelijk van de downstream-assays die moeten worden uitgevoerd. Fixeer het synoviale weefsel in 10% neutraal gebufferd formaline.Snijd het daarna in voor histologische analyse. Na kleuring met hematoxyline en eosine, beeld de weefselsecties af bij 10X en 40X met behulp van lichtveldmicroscopie. Gebruik Photoshop om de intimale bekleding en sublining-regio's in het 40X TIFF-beeld af te bakenen, waarbij niet-doelgebieden, erytrocyten en grote vaten voor latere kwantitatieve analyse worden afgedekt.Analyseer de uiteindelijke maskers om de dikte, integriteit en cellulairiteit van de intimale bekleding en sublining te kwantificeren. Beoordeel ten slotte de migrerende cellen door middel van flowcytometrie en de oplosbare factoren in het verzamelde media door een enzym-gekoppelde immunosorbentassay. Het synoviale weefsel gekweekt met toenemende doses MCP-1 of LPS vertoonde duidelijke morfologische veranderingen in de intimale bekleding, waaronder een bros intimaal bekleed en een verdikte intimale bekleding met verminderde cellulaire dichtheid in vergelijking met de controle.MCP-1 en LPS-behandeling veranderden de synoviale cytokinerespons. MCP-1 induceerde pathogene fibroblastmarker podoplanine-expressie in de sublining, terwijl LPS podoplanine verhoogde in zowel de intimale bekleding als de sublining. Migratoire immuuncellen in de bodemput omvatten neutrofielen, NK-cellen, NKT-cellen, T-cellen, B-cellen of dendritische cellen, monocyten of macrofagen en M2-macrofagen.T-cellen waren de meest voorkomende migrerende immuuncellen. Statistisch gezien was er geen verschil in celmigratie op basis van de stimulus in de bodemput. Osteoprotegerine, een artritis-relevant eiwit, werd gedetecteerd bij 24, 48 en 72 uur in onbehandeld gekweekt artritisch synovium en was significant hoger bij 72 uur dan bij 24 uur.De expressie van inducibele stikstofmonoxidesynthase in de intimale bekleding was hoog bij controles bij nul uur en was na 24 uur bijna afwezig. De expressie van stikstofmonoxidesynthase werd gehandhaafd wanneer behandeld met N-acetyl cysteïne. Omgekeerd veranderde N-acetyl cysteïne de expressie van matrix metalloproteïnase-9 niet, een marker voor zowel synovitis als potentiële kraakbeenschade.Dit protocol stelt onderzoekers in staat om de veranderingen in synoviale intimale en sublininglagen te bestuderen, inclusief diepte, cellulairiteit en intactheid

a-pre-clinical-model-synovitis-using-ex-vivo-human-synovial-tissue

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Presenteren we een methode voor de beoordeling van de ruimtelijke omvang van verwonding/dood van de cel op het gewrichtsoppervlak van intact lymfkliertest gewrichten na toepassing van gecontroleerde mechanische belastingen of effecten. Deze methode kunt u nagaan hoe artrose, genetische factoren en/of verschillende laden regimes van invloed zijn op de kwetsbaarheid van in situ chondrocyten worden gebruikt.

Visualisatie in real time en analyse van chondrocyten letsel als gevolg van mechanische belasting in volledig Intact lymfkliertest kraakbeen explantaten

Hier presenteren we een protocol dat isolatie en kweek van kraakbeen explanten van runderknieën beschrijft. Deze methode biedt een eenvoudig en toegankelijk hulpmiddel om weefselveranderingen te beschrijven in reactie op biologische stimuli of nieuwe therapieën gericht op het gewricht.

Een ex vivo weefselkweek model van kraakbeen remodellering in boviene knie Explants

Hier beschrijven we een gedetailleerd en reproduceerbaar stroomcytometrieprotocol om monocyten/macrofaag en T-celsubsets te identificeren met behulp van zowel extra- als intracellulaire kleuringstesten in de murine milt, beenmerg, lymfeklieren en synovaal weefsel, gebruikmakend van een gevestigd chirurgisch model van murineartrose.

Flow Cytometrie Analyse van immune cell subsets binnen de Murine Milt, Beenmerg, lymfeklieren en synoviale weefsel in een artrose model

We bieden gedetailleerde methoden voor het genereren van vier soorten weefsels uit menselijke mesenchymale stamcellen, die worden gebruikt om het kraakbeen, bot, vetkussen en synovium in het menselijke kniegewricht samen te vatten. Deze vier weefsels zijn geïntegreerd in een aangepaste bioreactor en verbonden via microfluïdica, waardoor een kniegewricht-op-een-chip wordt gegenereerd.

Creatie van een kniegewricht-op-een-chip voor het modelleren van gewrichtsaandoeningen en het testen van medicijnen

We presenteren een stapsgewijze aanpak om de meest voorkomende problemen in verband met micro-inkepingen met atoomkrachtmicroscopie te identificeren en aan te pakken. We illustreren de opkomende problemen bij inheemse menselijke gewrichtskraakbeenexplantaten die worden gekenmerkt door verschillende gradaties van door artrose veroorzaakte degeneratie.

Praktische problemen aanpakken bij op atoomkrachtmicroscopie gebaseerde micro-inkeping op menselijke gewrichtskraakbeenexplantaten

De huidige studie biedt een aangepast protocol om synoviale macrofagen en fibroblasten te isoleren uit murine inflammatoire artritisweefsel.

Isolatie en kweek van primaire synoviale macrofagen en fibroblasten uit muizenartritisweefsel

Hier presenteren we een assembloid-modelsysteem om peescellulaire overspraak na te bootsen tussen het dragende peeskernweefsel en een extrinsiek compartiment met celpopulaties die worden geactiveerd door ziekte en letsel. Als belangrijke use case laten we zien hoe het systeem kan worden ingezet om ziekterelevante activering van extrinsieke endotheelcellen te onderzoeken.

Engineering Tendon Assembloids om cellulaire overspraak bij ziekte en reparatie te onderzoeken

Hier rapporteren we een protocol dat een muismodel voor reumatoïde artritis (RA) tot stand brengt door adoptieve overdracht van CD4+ T-cellen van SKG-muizen, wat een snel en betrouwbaar experimenteel hulpmiddel biedt voor het onderzoeken van de immunologische mechanismen, pathologische progressie en ontwikkeling van nieuwe behandelingen voor RA.

Een adoptief overdrachtsmodel van reumatoïde artritis bij muizen

Hierin beschrijven we een chirurgische methode om de voorste kruisband (ACL) te transecteren als een betrouwbaar model om knieartrose bij knaagdieren te induceren en methodologieën voor het oogsten van gewrichtsvloeistof van de knie, het meten van knie-oedeem en het beoordelen van de ernst van artrose.

Transsectie van de voorste kruisband en lavage van gewrichtsvloeistof in een knaagdiermodel om gewrichtsontsteking en posttraumatische artrose te bestuderen

Een nieuwe DC-onafhankelijke methode voor de inductie en de uitbreiding van antigeen-specifieke T-cellen wordt beschreven. HLA A2-Ig op basis van kunstmatige antigeen presenterende cellen (aAPC) zijn geladen met HLA-A2 beperkt peptiden om efficiënt uit te breiden CTL van diverse antigen specificiteit. Deze technologie biedt veel mogelijkheden voor CTL-op basis van adoptieve immunotherapie.

HLA-Ig Based Artificial antigeen presenterende cellen voor efficiënte Ex vivo Uitbreiding van de Mens CTL

Leer het JSAS-model voor reumatoïde artritis-onderzoek met behouden menselijk synoviaal weefsel. Dit systeem onderzoekt acute ontstekingsreacties en cytokineproductie in 3D-architectuur.

Een preklinisch model van synovitis met ex vivo menselijk synoviaal weefsel met behouden functie en architectuur

Meer video's verkennen